Gax基因转染对低氧性PASMCs增殖及原癌基因表达的影响

目的： 探讨生长终止特异性同源盒Gax基因转染对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中原癌基因c-fos、c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响。方法：腺病毒介导Gax基因(Ad-Gax)转染PASMCs。在常氧（21％O₂）和低氧（2.5％O₂）12 h条件下，利用RT-PCR和免疫细胞化学法分别测定转染组和未转染组PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达，以及c-fos、c-jun mRNA表达变化；［³H］-TdR掺入法检测各组PASMCs增殖情况。结果：RT-PCR和免疫细胞化学法证实Gax基因转染后PASMCs中Gax能稳定过表达；转染组细胞c-fos、c-jun mRNA表达水平在常氧和低氧均低于未转染组细胞（P<0.05,P<0.01）；未转染组低氧时［³H］-TdR掺入量比常氧时高（P<0.01）；在常氧和低氧时转染组［³H］-TdR掺入量均低于未转染组（P<0.05，P<0.01）。结论：Gax基因过表达可能通过下调c-fos、c-jun基因的表达来抑制低氧性PASMCs的增殖。     

Proto-oncogene allelic variations in human squamous cell carcinomas of the larynx

Summary Proto-oncogene restriction fragment length polymorphisms (RFLPs) were investigated in a group of 23 patients with squamous cell carcinomas of the larynx. The frequency of the rare 5 kb c-mos allele was significantly higher than that observed in control groups of patients with colorectal neoplasms or lymphoproliferative disorders. In addition, the 2 patients heterozygous at the c-mos locus (TC-8 and TC-10) were the only 2 of our series to develop multiple malignancies. Also, the 10 kb L-myc allele was remarkably more represented in patients with laryngeal carcinoma when compared to controls. These findings suggest that c-mos and L-myc RFLPs might be helpful in identifying those individuals who are at a higher risk of developing laryngeal carcinomas. Single allele amplification of L-myc, c-myb and c-mos proto-oncogenes, with no concomitant mRNA hyperexpression, were observed in 3 cases. The results obtained seem to rule out a direct pathogenetic role of these proto-oncogenes and suggest that the amplification of other closely linked genes, located on chromosomes 1, 6 and 8, respectively, may be causally associated with the development of these tumors. No allelic deletions at the c-myb locus were observed, whereas a loss of a c-Ha-ras-1 allele was demonstrated in one of the 11 heterozygous patients. Thus, the analysis of polymorphic proto-oncogenes in laryngeal carcinomas allowed us to identify a group of genetic abnormalities (chromosomes 1, 6 and 8 gene amplifications and c-Ha-ras-1 deletions) which may be involved in the development or progression of these tumors.     

原癌基因C－myc、C－N－ras、C－Ki－ras、C－erbB2在卵巢癌组织中的扩增

对３２例卵巢癌、４例卵巢良性上皮性肿瘤、３例卵巢上皮性交界性肿瘤及２例正常卵巢组织进行ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交研究，发现在卵巢癌组织中原癌基因Ｃ－ｍｙｃ、Ｃ－Ｎ－ｒａｓ和Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ、Ｃ－ｅｒｂＢ２扩增率分别为５０％、４４％、３１％、２５％。Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ、Ｃ－Ｎ－ｒａｓ扩增主要发生在早期和分化好的卵巢癌患者中。Ｃ－Ｎ－ｒａｓ扩增在晚期患者中也有表现。Ｃ－ｍｙｃ和Ｃ－ｅｒｂＢ２扩增主要发生在Ⅲ期以上、分化较差的患者中。所有死亡患者均有Ｃ－ｅｒｂＢ２基因扩增，两种以上癌基因扩增者占死亡者８３％。     

口腔扁平苔藓组织中表皮生长因子及其受体表达变化的研究

目的探讨表皮生长因子(EGF)、表皮生长因子受体(EGFR)及两种原癌基因c-fos、c-jun,在口腔扁平苔藓中的基因表达、蛋白含量变化及其生物学意义。方法选择新鲜组织标本31例,包括糜烂型扁平苔藓10例、网状型扁平苔藓12例和正常口腔黏膜9例,使用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测EGF、EGFR、c-fos和c-jun基因在不同组织中的表达;同时使用免疫组化方法比较这4种蛋白在不同组织中的定位和表达量的变化。结果糜烂型扁平苔藓EGFR基因的mRNA和蛋白含量分别为(55.9±23.1)%、(71.1±10.1)%,均明显高于网状型扁平苔藓及正常口腔黏膜组织(P<0.05)。糜烂型扁平苔藓中的c-fos和c-jun基因表达呈相同的变化规律,两种基因的mRNA含量均显著高于正常口腔黏膜。糜烂型扁平苔藓的C-fos、C-jun蛋白的阳性细胞率分别是正常黏膜的1.3和1.5倍,蛋白含量明显高于正常口腔黏膜(P<0.01)。结论糜烂型扁平苔藓的癌变率可能大于网状型扁平苔藓,其中EGF及其受体引导的信号传导通路可能起着十分重要的作用。     

Syndrome in question

Costello syndrome (CS) is a rare genetic disorder, first described by Costello in 1971, caused by mutations in the HRAS proto-oncogene. Clinical findings include facial dysmorphism, skin disorders, cognitive impairment, cardiac and musculoskeletal defects. There is an increased risk of malignancies in these patients, due to the proto-oncogene mutation, and also sudden death secondary to heart disease. We report a case with characteristic phenotype, highlighting the peculiar skin changes.     

慢病毒介导的c-metRNA干扰对人乳头状甲状腺癌K1细胞生物学行为的影响

目的: 探讨c-Met在乳头状甲状腺癌(PTC)中的表达;构建针对人c-met基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并观察其对K1细胞c-met基因的沉默效应及对细胞生物学行为的影响。方法: 免疫组化方法检测35例乳头状甲状腺癌及25例良性甲状腺疾病手术切除标本中c-Met的表达;构建人c-met基因的RNAi慢病毒载体,应用荧光定量RT-PCR与Western blotting检测其对c-met的干扰效率,应用克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验检测其对细胞克隆形成、周期、迁移、侵袭能力的影响,应用裸鼠模型评估RNA干扰后细胞成瘤能力的影响。结果: c-Met在PTC中的表达明显高于良性甲状腺组织;成功构建了c-met RNAi慢病毒载体,RT-PCR及Western blotting实验显示其对乳头状甲状腺癌K1细胞c-met mRNA 及蛋白表达的抑制均较明显;克隆形成实验显示c-met RNAi慢病毒载体能够抑制K1细胞的克隆形成能力;流式细胞术检测显示c-met RNAi慢病毒载体能够减少S细胞比列;划痕实验及Transwell实验显示c-met RNAi慢病毒载体能够抑制细胞迁移和侵袭;裸鼠成瘤实验显示RNA干扰后细胞的成瘤能力降低。结论: c-met RNAi慢病毒载体能够抑制K1细胞的克隆形成能力、细胞周期进程、迁移、侵袭及成瘤能力。     

肝癌介入治疗前后原癌基因Pokemon、甲胎蛋白异质体、甲胎蛋白、脱γ-羧基凝血酶原联合检测的临床价值

目的 研究原癌基因Pokemon、甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)、脱γ-羧基凝血酶原(DCP)在原发性肝癌(HCC)病人介入治疗前后表达量变化及其与治疗效果之间的关系.方法 纳入30例HCC病人,均行肝动脉化疗栓塞(TACE),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测治疗前后血清中Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量,分析四者TACE前后表达量变化与治疗效果之间的关系,并对TACE治疗后复发者与未复发者Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量变化进行探讨.结果 (1)TACE治疗有效组Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量分别为(50.09±4.91)μg·L-1、(322.67±64.53)μg·L-1、(10.26±1.08)μg·L-1、(42.66±9.43)AU·L-1,低于治疗前Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量(103.10±7.65)μg·L-1、(807.36±113.55)μg·L-1、(27.42±3.00)μg·L-1、(93.39±4.70)AU·L-1;t=6.741、7.740、7.534、4.985;P=0.000、0.000、0.000、0.001.治疗无效组Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量分别为(87.71±5.73)μg·L-1、(503.20±132.01)μg·L-1、(20.31±2.66)μg·L-1、(73.11±8.36)AU·L-1,与治疗前四者的表达量相比(93.47±1.92)μg·L-1、(610.55±101.69)μg·L-1、(21.18±1.97)μg·L-1、(75.01±7.29)AU·L-1,差异无统计学意义(t=1.801、1.280、0.626、0.764;P=0.146、0.270、0.565、0.488).(2)按治疗后3个月是否复发将有效组分为复发者和未复发者,复发者Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量分别为(114.63±16.28)μg·L-1、(763.50±140.22)μg·L-1、(18.58±2.09)μg·L-1、(87.93±8.57)AU·L-1,与TACE治疗后1个月(复发前)Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量[(65.90±8.25)μg·L-1、(400.60±99.11)μg·L-1、(9.17±1.27)μg·L-1、(35.93±4.10)AU·L-1] 相比,差异有统计学意义(t=2.598、6.247、5.762、6.122;P=0.029、0.000、0.000、0.000).结论 TACE治疗有效者Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量明显下降,复发者四种标志物的表达量再次升高,提示四者对监测HCC的治疗效果及预测肿瘤的复发有一定的参考价值,但需进一步研究证实.     

2A型多发性内分泌腺瘤家系RET原癌基因突变的分子筛查及五肽胃泌素激发试验的临床意义

目的 检测两个2A型多发性内分泌腺瘤（MEN2A）家系中RET原癌基因突变情况,初步探讨两个家系发病的分子机制及了解五肽胃泌素激发试验在MEN2A诊疗中的意义。方法 提取两个MEN2A家系共6名成员外周血基因组DNA,对RET原癌基因21个外显子进行PCR,PCR产物进行直接测序,对4例患者测定血降钙素并行五肽胃泌素激发试验。结果 两个家系中各有2例患者分别携带RET原癌基因外显子11的C634R突变和C634Y突变。初诊及复发的MEN2A患者血清降钙素明显升高（400．5～13 510．7ng／L,正常值16．6～132．8ng／L）,五肽胃泌素激发后升高更显著（494．1～33 901．9ng／L）。结论 本研究中临床诊断为MEN2A的家系存在RET原癌基因外显子11的C634位点突变。血降钙素水平及五肽胃泌素激发试验有助于临床诊断和疗效随访。     

冬虫夏草促进大鼠肾小管细胞增殖与其对庆大霉素急性肾损伤的防治作用

本研究证明冬虫夏草对体外培养的大鼠肾小管上皮细胞增殖具有明显促进作用，其增殖效应的机制可能与诱导肾小管细胞持续高水平地表达ｃ－ｍｙｃ原癌基因ｍＲＮＡ有关，鉴于急性肾衰治疗的中心环节正在于如何促进损伤、坏死的肾小管细胞再生、修复，因而推测虫草的上述作用可能对于急性肾衰治疗有益，采用虫草治疗庆大霉素诱发的大鼠急性肾损伤，确实具有良好的效果。     

丹参酮ⅡA对U251胶质瘤细胞的增殖抑制和原癌基因表达的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对人胶质瘤细胞株U251的增殖抑制作用及其作用机理。方法:应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对U251细胞的增殖抑制,应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对U251细胞周期的影响,应用RT-PCR观察相关基因C-myc表达的变化。结果:丹参酮ⅡA对U251细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,当浓度为0.10 g·L^-1时,对U251细胞增殖的抑制率达到(53.7±6.0)%。流式细胞仪分析显示,用0.10 g·L^-1丹参酮ⅡA培养3 d,细胞周期中G₀/G₁期所占比例增高,S期占细胞周期的比例降低。RT-PCR结果显示,随着丹参酮ⅡA作用剂量的增加,c-myc基因的表达被明显抑制。结论:丹参酮ⅡA对人胶质瘤细胞系U251的增殖具有明显的抑制作用,并对原癌基因c-myc的表达具有抑制作用。