破骨细胞对IGF-1诱导成骨细胞骨同化的促进作用

目的 探讨破骨细胞(osteoclast, OC)存在时IGF-1对成骨细胞(osteoblast, OB)活性的影响。方法 体外培养MC3T3小鼠成骨细胞及RANKL诱导分化成熟的破骨细胞。以10ng/ mL的rhIGF-1直接干预单独或与破骨细胞共育的成骨细胞, 并设空白对照组,培养12h,检测成骨细胞的增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性;培养8d后Von kossa钙化染色法观察矿化结节的形成。结果 成骨细胞、破骨细胞共培养时,rhIGF-1作用12h能够明显促进成骨细胞增殖(P<0.05),抑制成骨细胞的凋亡(P<0.05),使细胞内ALP活性升高(P<0.05),8d时钙化结节的个数及面积百分比升高(P<0.05);与单独培养的成骨细胞组有显著性差异。结论 破骨细胞可明显促进IGF-1所诱导的成骨细胞骨同化作用。     

仙灵骨葆胶囊治疗绝经后骨质疏松症的生物信息学和网络药理学分析和实验验证

目的：基于生物信息学和网络药理学挖掘仙灵骨葆胶囊（XLGB）治疗绝经后骨质疏松症（PMOP）的活性成分和作用机制。方法：采用生物信息学挖掘PMOP相关靶点,采用网络药理学筛选XLGB的活性成分并预测作用靶点,阐明XLGB治疗PMOP的相关靶点,富集分析其信号通路以探究分子机制。动物实验采用去卵巢SD大鼠动物模型,XLGB灌胃3月,检测骨密度,血清活性氧水平,TUNEL染色检测骨组织凋亡情况,蛋白质免疫印迹法检测骨组织内凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax)表达量。结果：筛选出差异表达基因883个,筛选出XLGB活性成分119种,共预测1 734个靶蛋白。通过对XLGB和PMOP共有的26个共同靶点分析显示,AKT1、NFKB1、BAX等靶点及细胞凋亡、破骨细胞分化、cAMP、AMPK等信号通路起重要作用。XLGB组骨密度明显改善,血清活性氧水平降低,TUNEL染色显示XLGB可减少骨组织凋亡情况,提高抗凋亡蛋白Bcl-2、降低促凋亡蛋白Bax的水平。结论：XLGB治疗PMOP具有多成分、多靶点的特点,与调控细胞凋亡密切相关。     

共育体系中成骨细胞和破骨细胞生物学特性观察

目的建立成骨细胞和破骨细胞的体外共育体系,观察在此体系中成骨细胞和破骨细胞生物学特性的变化,探讨成骨细胞和破骨细胞间的相互作用。方法取髂骨松质骨,Ⅱ型胶原酶消化,分次获得成骨细胞和破骨细胞。建立培养上清相通但二者互不接触的成骨细胞-破骨细胞共育模型。以细胞增殖(MTT法)、碱性磷酸酶(ALP)活性代表成骨细胞的成骨活性,以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性、骨吸收陷窝面积代表破骨细胞的破骨能力,检测共育对成骨细胞和破骨细胞生物学特性的影响。结果成骨细胞呈饱满的梭形,ALP染色阳性;破骨细胞呈多核,TRAP染色阳性,可以吸收骨质形成骨陷窝。当成骨细胞与破骨细胞共育后,其MTT法OD值(0.60±0.08)较单独培养时(0.36±0.03)明显提高(P=0.000);其ALP活性(23.37±2.48)u/mg较单独培养时(18.33±0.34)u/mg明显提高(P=0.000)。破骨细胞与成骨细胞共育后,形成骨吸收陷窝的平均面积犤(6.55±0.34)×10-2犦μm2较单独培养时犤(5.15±0.17)×10-2犦μm2明显增大(P=0.000)。结论共育体系中成骨细胞和破骨细胞的功能相互促进,为骨组织代谢的体外研究提供了可靠的模型。     

骨质疏松与一氧化氮

一氧化氮 (ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ ,ＮＯ)极易透过生物膜 ,是细胞间、细胞内的信使分子 ,其扩散速度、穿透细胞膜的能力、内在不稳定性等特征极为显著。由于其合成易于调节 ,作为高级生物体调节的有效信号在循环、呼吸、消化及内分泌代谢等系统中发挥着重要影响。近年来发现ＮＯ及其一氧化氮合酶 (ｎｉｔｒｉｃｏｘ ｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ ,ＮＯＳ)在参与和促进骨质疏松症 (ｏｓｔｅｏ ｐｏｒｏｓｉｓ ,ＯＰ)病理生理过程中也占有举足轻重的作用。1　ＮＯ、ＮＯＳ合成与代谢通过免疫组化及更灵敏的逆转录酶聚合酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ) ,…     

口腔鳞状细胞癌侵犯颌骨与破骨细胞及相关细胞因子的关系

目的:研究在口腔鳞状细胞癌侵犯颌骨的病例中,破骨细胞及与破骨细胞相关的两个重要[细胞因子细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)]的表达情况.方法:选用12例口腔鳞状细胞癌侵犯颌骨病例的手术标本,将新鲜软组织标本制作成冰冻切片,含骨组织标本经固定脱钙后制成石蜡切片.分别对两种切片进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,以及针对RANKL和OPG两种细胞因子的免疫组织化学染色.结果:TRAP阳性的多核细胞出现在肿瘤与颌骨的交界面附近.其下方的骨组织成锯齿样,TRAP阳性细胞位于骨表面的陷窝内.RANKL免疫组化染色阳性的部位主要有血管内皮和上皮基底膜,在与骨面相近的肿瘤组织中也可见位于血管周围的染色阳性细胞,而在靠近骨面的鳞状细胞癌周围的组织内未见OPG特异性染色阳性.结论:在口腔鳞状细胞癌引起颌骨侵犯的病例中,破骨细胞是受到鳞状细胞癌的影响而分化和活化,并最终引起骨组织的吸收破坏.肿瘤细胞是跟随在破骨细胞后面侵入骨组织,并不直接引起骨的变化.骨侵犯性鳞状细胞癌的细胞及周围的血管可以释放出较多的RANKL类细胞因子,促进破骨细胞的分化和活化,最终导致了破骨活动的发生和发展.     

Production and characterization of new monoclonal antibodies to human osteoclasts

Summary Two monoclonal antibodies raised against human osteoclastoma were found to show antiosteoclastic activity on frozen sections of tumor. Immunoreactivity was localized on the membrane surface. These antibodies exhibited no activity against tissue macrophages and human visceral tissue except kidney, where they stained tubules but not glomeruli. In addition, no activity was observed against rabbit or rat osteoclasts, suggesting that they might react with unique epitopes on human osteoclasts.     

血小板衍生生长因子-BB抑制成骨细胞-破骨细胞共育体系中破骨细胞的作用机制

目的　探讨血PDGF BB在共育体系中抑制破骨细胞 (OC)功能的机制。方法　将PDGF BB施加于两种培养体系。测定培养上清一氧化氮 (NO)产物的浓度 ;检测诱导型和内皮型一氧化氮合酶表达情况 ;检测共育体系内外骨保护素 (OPG )表达与PDGF BB浓度的关系 ;观察共育体系培养上清对OC吸附骨质的影响。结果　在PDGF BB刺激下 ,NO含量升高至 (2 5 .2 6±3 .2 4) μg/L (P <0 .0 1) ;加入抑制剂后 ,NO含量为 (9.84± 1.5 1) μg/L ;PDGF BB促进成骨细胞(OB)对eNOS和iNOS的表达 ,抑制剂使二者表达减弱 ;共育体系中OPG表达增强 ,而PDGF BB不能直接促进OPG的表达。共育体系培养上清使OC从骨质上脱离。结论　PDGF BB促进OB产生NO产物 ,后者抑制OC功能。     

The effect of 3-amino-1-hydroxypropylidene-1,1-bisphosphonate (APD) on the resorptive function of osteoclasts of known nuclear number

Bisphosphonates (BP) are known to suppress osteoclastic resorption in vivo and in vitro, but doubt persists as to how, and the effect of BP on the resorptive capability of osteoclasts of known nuclear number is unknown. We aimed to find whether the addition of 3-amino-1-hydroxypropylidene-1,1-bisphosphonate (APD) changed the nuclear profile of an osteoclast population in vitro, and to measure the resorptive efficiency of individually characterized osteoclasts in the presence and absence of the BP. Prehatch chick bone cells were cultured for 24 hours on slices of dentine in medium with or without added APD at 10^-6 M or 10^-8 M, or in control medium on dentine presoaked with 10^-6 M APD for 48 hours. Total pit counts, and pit depths, areas and volumes for pits made by osteoclasts of known nuclear number, were found using confocal video-rate laser reflection microscopy and 3-D image analysis software. APD in the medium inhibited resorption and reduced the volume, area, and depth resorbed per nucleus per chick osteoclast. The nuclear number distribution did not shift significantly, suggesting that no preferential effect arose from the APD affecting one size of cell more than another. The large reduction found in pit numbers, depths, areas, and volumes in the APD dentine-pretreated group supports previous views that BP released during resorption act as metabolic inhibitors, altering protein synthesis by the cell. Larger cells made larger pits, but resorptive efficiency was similar for different cell sizes within the control or APD-treated groups. There was a strong negative correlation between the maximum depth resorbed per nucleus and the number of nuclei in the osteoclast in all groups.     

体外培养破骨细胞的功能观察

观察破骨细胞在离体状态下的骨吸收功能。新鲜牛皮质骨经锯式切片机横切成５０μｍ厚０．５×０．５ｃｍ大小骨片。参照已建立的破骨细胞分离培养方法，从新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠四肢长骨分离破骨细胞，培养于２．５ｃｍ细胞培养皿内或上述骨片上，相差倒置显微镜或扫描电镜观察，可见培养的细胞具有典型破骨细胞的形态特点，接种子骨片上的破骨细胞分别培养１、３、５、７天，扫描电镜观察，可见破骨细胞能在骨片表面形成吸收陷窝，其形态多样，深浅不一，边界清晰，底面粗糙，而且随培养时间延长，陷窝扩大，数量增多。结论，破骨细胞在体外培养条件下具有良好的骨吸收功能，可进行药物干预的研究。