多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶检测与分析

目的了解本地区多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶产生情况,为临床治疗及控制医院感染提供依据。方法用K-B法进行常规药敏试验,筛选出50株多重耐药铜绿假单胞菌,用改良三维试验检测各种β-内酰胺酶,同时用2-巯基丙酸抑制试验检测金属酶。结果50株多重耐药铜绿假单胞菌中产ESBLs2株(4%)、产AmpC酶20株(40%),11株同时产ESBLs和AmpC酶(22%),金属酶筛选出8株(16%)阳性。结论本地区多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶以AmpC酶为主,临床应根据药敏试验结果,合理选用抗生素,以减少耐药菌株产生和控制医院感染。     

烧伤病房肠杆菌科细菌耐药性及其危险因素分析

目的 了解烧伤患者感染肠杆菌科细菌的耐药性及产超广谱β内酰胺酶(ESBL)菌感染的危险因素.方法 对2001年1月-2008年12月笔者医院烧伤病房细菌培养结果为肠杆菌科细菌的92例患者进行回顾性分析.分析其病原菌分布情况、耐药情况、产ESBL菌株检出率和耐药性,以及产ESBL菌引发医院感染的因素.数据行χ2检验.结果 共分离109株肠杆菌科细菌,其中阴沟肠杆菌38株占34.9%,大肠埃希菌25株占22.9%,肺炎克雷伯菌22株占20.2%,奇异变形杆菌13株占11.9%,其他肠杆菌科细菌11株占10.1%.常见肠杆菌科细菌除对亚胺培南的耐药率低于8.0%外,对其余抗菌药物均为中高度耐药.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBL检出率分别为44.0%、77.3%.产ESBL菌株对大多数抗菌药物的耐药率高于未产ESBL菌.单因素分析可见,患者住院时间大于20 d、第三代头孢菌素使用时间大于5 d、喹诺酮类药物使用时间大于7 d、外用抗菌药物使用时间大于5 d是产ESBL菌引发医院感染的危险因素,与未产ESBL菌比较,差异有统计学意义(χ2值分别为5.491、4.441、15.186、4.938,P值均小于0.05).结论 笔者单位烧伤病房肠杆菌科细菌耐药情况严重,产酶率高,应加强监测,控制引起产ESBL菌感染的危险因素,减少其感染发生率.     

源自同一患者的二株血和粪便对碳青霉烯类耐药大肠埃希菌

目的 了解对碳青霉烯类抗菌药物耐药大肠埃希菌的耐药机制及与内源性感染的关系.方法 将临床分离的来源于同一患者血培养和粪便培养的大肠埃希菌2株,采用浓度梯度法(E-test)测定亚胺培南、美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)值,纸片扩散法测定其他16种抗菌药物的敏感性,等电聚焦电泳(IEF)检测所产生的β-内酰胺酶,PCR及序列分析确定其基因型,接合试验和Southern杂交进行耐药基因定位,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析2株菌株的同源性.结果 亚胺培南、美罗培南对2株大肠埃希菌的MIC值均≥32 mg/L,均产KPC-2(等电点值为6.7)和SHV-12(等电点值为8.2).blaKPC-2基因位于可转移的54 kb质粒上.PFGE显示2株大肠埃希菌为同一克隆株.结论 2株大肠埃希菌的耐药性及染色体DNA酶切图谱均一致,该患者大肠埃希菌败血症极可能是肠道的大肠埃希菌移位引起的内源性感染.     

Imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa strains carry metallo-β-lactamase gene blaVIM in a level I Iranian burn hospital

Introduction

In this study, we aimed to determine the distribution of bla_VIM and bla_IMP transferable genes in Pseudomonas aeruginosa isolates from infected burn wounds in an Iranian level I burn care center. These genes confer imipenem resistance and increase the mortality rate of burn patients.

Methods

P. aeruginosa isolates from burn patients were tested for antibiotic susceptibility with Kirby-Bauer disk diffusion method and for production of metallo-β-lactamase (MBL) by EDTA disk method. DNA was purified from isolates with positive MBL results and underwent PCR for detection of bla_VIM and bla_IMP genes.

Results

MBL was produced by 23 imipenem-resistant isolates and bla_VIM gene was detected in all of these isolates. None of the isolates carried bla_IMP gene. Mortality rate of infection with MBL-producing Pseudomonas strains was 82.6% in this hospital while the mortality rate for non-MBL-producing Pseudomonas was 22.7%.

Conclusion

We found that all MBL-producing isolates in this hospital carry bla_VIM gene. This result is similar to the previous Iranian study and emphasizes the importance of VIM family of MBLs in Iran. Timely identification of these strains and strict isolation methods can prevent spread of this transferable gene to other Gram-negative bacteria and prevent the subsequent outbreak of high mortality.     

CMY型AmpC酶新基因亚型的序列分析与表达载体构建

目的 对两株弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY型AmpC酶进行基因克隆、序列分析和重组表达载体的构建.方法 以产CMY型AmpC酶的弗劳地枸橼酸杆菌30、31号总基因组DNA为模板,PCR扩增CMY基因,将其克隆人pGEM-T载体后测定该核苷酸序列.30、31号菌与受体菌进行质粒接合实验,构建pBV220-CMY重组表达载体.对原菌株和重组菌株进行AmpC酶检测.结果 PCR扩增出大小为1146 bp的基因片段,与GenBank上多种CMY亚型的基因序列同源性为97%.质粒接合实验证实质粒上含CMY基因,为可转移质粒.三维实验结果显示30、31号菌和重组菌株所产的酶均能水解头孢西丁.结论 30、31号菌所产的CMY型AmpC酶为CMY新基因亚型.成功构建重组表达载体pBV220-CMY,为下一步酶的表达和纯化提供了依据.     

肺炎链球菌青霉素结合蛋白2B、1 A、2X氨基酸置换对β内酰胺类抗生素最小抑菌浓度的影响

目的 分析肺炎链球菌(SP)青霉素结合蛋白(PBP)2B、1A、2X保守序列氨基酸置换对其β内酰胺类抗生素抗菌活性的影响.方法 用E-test法测定59株SP对6种β内酰胺类抗生素最小抑菌浓度(MIC),并埘其青霉素结合蛋白基因(pbp)2b、1a、2x的编码片段进行套式PCR扩增和基因测序,根据氨基酸置换类型进行分型.PBP2B分为:PBP2B I型(无变异);PBP2B Ⅱ型[谷氨酰胺432→亮氨酸和(或)苏氨酸445/451→丙氨酸/丝氨酸、谷氨酸481→甘氨酸,其中1株存在431/432脯氨酸的插入];PBP2B Ⅲ型(兼具PBP2BⅡ型变异及内氨酸624→甘氨酸).PBP1A编码基因变异分为:PBPIA I型(无变异);PBP1A Ⅱ型(苏氨酸574→天冬氨酸,丝氨酸575→苏氨酸,谷氨酰胺576→甘氨酸,苯丙氨酸577→酪氨酸,即574TSQF→NTGY);PBP1A Ⅲ型(574TSQF→NTGY及苏氨酸371→丙氨酸/丝氨酸、脯氨酸432→苏氨酸).PBP2X编码基因变异分为:PBP2X I型(无变异);PBP2XⅡ型(组氨酸394→亮氨酸或苏氨酸338→丙氨酸);PBP2X Ⅲ型(苏氨酸338→丙氨酸,异亮氨酸371→苏氨酸、精氨酸384→甘氨酸和亮氨酸546→缬氨酸);PBP2X IV型(兼具PBP2XⅢ型变异及蛋氨酸339→苯丙氨酸,蛋氨酸400→苏氨酸).分析各型氨基酸置换与抗生素MIC的关系.结果 59株SP对6种β内酰按类抗生素的药敏分布(敏感株、中介株、耐药株)分别为青霉素(12、29、18);阿莫西林(49、9、1);头孢呋辛(16、16、27);头孢曲松(47、1、11);头孢嚷肟(47、3、9);亚胺培南(49、10、0).PBP2BⅢ型、PBPlAⅢ型及PBP2XⅣ、PBP2X IV型SP对β内酰胺类抗生素的不敏感株(中介株+耐药株)明显增多,SP的β内酰胺类抗生素MIC_(50)明显升高.结论 PBP2B、1A、2X保守序列中或附近的氨基酸置换可明显升高SP的β内酰胺类抗牛素MIC值.     

儿科产超广谱β内酰胺酶志贺菌的检测及耐药性分析

目的 了解儿科临床分离志贺菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的状况及耐药情况,为临床治疗提供参考.方法 收集2004年1月至2008年12月我院所有细菌性痢疾住院患儿粪便标本中分离出的志贺菌共59株,用肉汤稀释法进行ESBLs的检测,用琼脂稀释法进行药敏试验.质控菌株用大肠埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603.结果 59株志贺菌中共检出产ESBLs者21株,阳性率为35.6%,以头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸为底物时21株全部检出,检出率为100%,以头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸为底物时检出5例,检出率为23.8%.产与不产ESBLs组均对青霉素类严重耐药,产ESBLs组对三代、四代头孢及氨曲南的耐药率均明显高于非产ESBLs组,对磺胺类及喹诺酮类抗生素的耐药率亦高于非产酶组.对产ESBLs菌株敏感性较好的抗生素有亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦和头孢西丁,耐药率分别为0.0%、0.0%、14.3%、9.5%、14.3%.结论 本地区儿科分离志贺菌产ESBLs阳性率高,且产ESBLs菌呈多重耐药,建议临床微生物室开展对志贺菌产ESBLs的检测,根据患儿状况选择上述5种耐药率低的药物作为治疗药物.     

自动化细菌鉴定仪和碳青霉烯酶基因OXA-51扩增在不动杆菌属细菌鉴定中的价值

目的 评价自动化细菌鉴定仪Phoenix和Vitek2 Compact以及碳青霉烯酶基因OXA-51(blaOXA-51-like扩增在不动杆菌属细菌鉴定中的价值.方法 收集2006-2007年北京协和医院临床标本中分离的非重复不动杆菌属细菌50株,以扩增性核糖体DNA限制性酶切片段分析(amplified ribosomal DNA restriction analysis,ARDRA)为参考方法,分别采用blaOXA-51-like基因扩增和Phoenix、Vitek2 Compact细菌鉴定仪进行鉴定.结果 与ARDRA分子鉴定结果进行对比,blaOXA-51-like基因扩增鉴定方法敏感度为100%,特异度为100%;细菌鉴定仪Phoenix和Vitek2 Compact鉴定到种的准确率分别为44%和56%.结论 不动杆菌属仪器表型鉴定准确率不高;对于鲍曼不动杆菌,blaOXA-51-like基因扩增为一种快速可靠的鉴定方法.在研究不动杆菌的耐药机制或同源性分析时,可采用ARDRA方法进行鉴定.     

Bacterial agents of lower respiratory tract infections (LRTIs), beta-lactamase production, and resistance to antibiotics in elderly people. DEDALO Study Group

This study determined the etiology of lower respiratory tract infections in the elderly and assessed whether the growth of β-lactamase producing bacteria is particularly favoured in these patients. Between December 1998 and May 1999, 187 patients with community-acquired pneumonia (CAP), and 887 patients with acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease (AECOPD) were enrolled. The mean age was 74 years (range of 65–94 year). Sputum and bronchial aspirate for microbiological investigation were obtained. Besides organisms commonly involved in bacterial infections of the lower respiratory tract (i.e. Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, and Moraxella catarrhalis), Enterobacteriaceae and Pseudomonas spp. were also found. A high percentage of these bacteria were β-lactamase producers. These data along with the clinical presentation, severity of infection, and epidemiological knowledge, might represent a guide for the choice of empiric antimicrobial treatment.     

产ESBLs大肠埃希氏菌临床株EC98A7表型和基因型研究

目的 研究大肠埃希氏菌多重耐药临床菌株EC98A7对超广谱β—内酰胺类抗生素的耐药机制。方法 采用K—B法、双纸片协同试验、接合传递试验、质粒谱分析、PCR、PCR—RFLP和DNA序列分析等方法分析BC98A7的表型及基因型。结果 EC98A7对头孢他啶等第三代头孢菌素和庆大霉素等抗生素高度耐药，并能将全部耐药表型通过一个大小约80kb的质粒传递给受体株。双纸片协同试验证明EC98A7产ESBLs。PCR等证实EC98A7含有TEM型和CTX-M型ESBLs。PCR-RFLP显示TEM型ESBL含有E104K突变，无R164H突变。同源性分析表明503bp的blaCTX-M DNA片段与CTX-M亚组1同一性最高，与blaCTX-M3相比仅有1个核苷酸改变即A787G，对应氨基酸改变为D239G。结论 大肠埃希氏菌多重耐药临床株EC98A7同时产TEM型CTX-M型两种ESBLs，推测这与对超广谱β-内酰胺类抗生素的高度耐药有关。