Sertoli细胞诱导大鼠肝内胰岛移植物免疫豁免的实验研究

目的 探究睾丸Sertoli细胞能否对肝内共移植的胰岛移植物提供免疫豁免作用以及共移植的睾丸Sertoli细胞最佳数量。方法将同种大鼠胰岛及不同数量的睾丸Sertoli细胞同时移植于糖尿病受体的肝内,观察移植物存活情况、胰岛功能、并检测移植物内胰岛素和Fas配体(FasL)表达以及浸润淋巴细胞凋亡情况。结果单纯胰岛移植组平均存活期为(5.6±0.8)d,同时与胰岛细胞在肝内共移植的睾丸细胞数增加至1×107个时,平均存活期为(41.4±4.61)d,明显延长(P<0.05),胰岛移植物中有大量表达FasL的睾丸细胞和表达胰岛素的胰岛细胞.在移植物周围有大量浸润的淋巴细胞凋亡。结论睾丸Sertoli细胞与胰岛细胞同时在肝内共移植,通过诱导局部豁免而延长胰岛移植物的存活时间,且同时共移植1×107个Sertoli细胞时效果最好。     

肺结核患者血清趋化因子CXCL8、RANTES与 疗效的相关性

目的 探究肺结核（pulmonary tuberculosis,PTB）患者血清CXC趋化因子配体8（C-X-C motif chemokine ligand 8,CXCL8）、调节活化正常T细胞表达和分泌因子（regulate upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES）水平与治疗效果的关系。方法 选取2020年2月至2021年2月温州医科大学附属衢州医院收治的450例初诊涂阳的PTB患者为研究对象。所有患者均采用标准抗PTB治疗,根据治疗效果分为有效组（n=383）和无效组（n=67）。比较两组一般资料及血清CXCL8、RANTES水平,采用Logistic回归分析PTB患者治疗效果的影响因素以及CXCL8、RANTES对PTB患者治疗效果的预测价值。结果 治疗后,450例PTB患者治疗有效率为85.11%。无效组的全程督导占比低于有效组,吸烟、外地户籍占比及治疗前血清CXCL8、RANTES水平高于有效组,差异均有统计学意义（P<0.05）,性别、职业、年龄比较,差异无统计学意义（P>0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,吸烟、户籍类型、CXCL8及管理方式是PTB患者治疗无效的影响因素（P<0.05）。血清CXCL8、RANTES预测PTB患者治疗效果的曲线下面积（areas under the curve,AUC）分别为0.877、0.865,敏感度分别为77.6%、79.1%,特异性分别为88.3%、89.3%;CXCL8、RANTES联合预测PTB患者治疗效果的AUC为0.955,敏感度为94.0%,特异性为85.4%。结论 血清CXCL8、RANTES高水平与PTB患者治疗不良密切相关,检测血清CXCL8、RANTES有利于评估PTB患者治疗效果,且二者联合预测效果更佳。     

妊娠糖尿病患者孕晚期血清LRG1、CCL2水平与产后血糖转归的相关性分析

目的 探究妊娠糖尿病（GDM）患者孕晚期血清富亮氨酸α2-糖蛋白1(LRG1）、趋化因子配体2(CCL2）水平与产后血糖转归的相关性。方法 选取2019年6月—2021年6月衡水市人民医院收治的98例GDM孕晚期患者为研究对象,根据患者产后6周的口服葡萄糖耐量试验（OGTT）结果分为异常组42例和恢复组56例。收集两组患者的基线资料,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清LRG1、CCL2水平;采用Pearson法分析血清LRG1、CCL2水平与产后血糖及胰岛素指标的相关性;采用多因素一般Logistic回归分析影响产后血糖异常的因素。结果 异常组患者孕前体质量指数（BMI）高于恢复组（P<0.05）;异常组患者孕晚期及产后血清LRG1、CCL2水平均高于恢复组,且恢复组产后血清LRG1、CCL2水平低于孕晚期（P<0.05）;异常组患者孕晚期及产后甘油三酯（TG）、空腹血糖（FPG）、餐后1 h血糖（1 hPG）、餐后2 h血糖（2 hPG）、空腹胰岛素（FINS）及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）均高于恢复组（P<0.05）,异常组患者产后FPG、FINS、H...     

FasL、抗人DR5单克隆抗体诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨FasL、Anti-DR5 mAb对肿瘤细胞Hela、BGC823、MCF-7、1．342、H9101、D6的杀伤作用及机制。方法：采用RT-PCR、MTY比色法、电泳、DNA倍体分析、Western blot等方法。结果：H9101、Hela细胞株DR5 mRNA水平有表达，D6细胞无表达；H9101、1．342细胞株Fas mRNA水平有表达，D6细胞无表达。H9101、1．342细胞株对FasL、Anti-DR5 mAb敏感并呈剂量依赖性；MCF-7、BGC823细胞株对FasL敏感，对Anti-DR5 mAb相对敏感。Hela对FasL相对敏感，对Anti-DR5 mAb敏感；D6对两种凋亡诱导剂耐受。结论：FasL、Anti-DR5 mAb能不同程度地诱导肿瘤细胞凋亡，其机制与Fas、DR5、Caspase-8、Bcl-2的表达有关。     

人Flt3配体基因的克隆及其在CHO细胞中的表达

目的克隆人Flt3配体（Flt3 LIg and，FL），并在CHO细胞中进行表达。方法从健康人外周血中提取总RNA，通过RT-PCR技术，扩增Flt3配体胞外区cDNA功能性片段，经DNA测序证实后，将得到的片段基因插入pcDNA3．0表达载体，构建了pcDNA3．0-FL真核表达载体；将重组质粒pcDNA3．0-FL转染CHO细胞．经G418筛选出阳性细胞克隆，扩大培养，提取细胞总蛋白，用SDS—PAGE分离并Western blotting检测到在相对分子质量约24000处有一显色条带。结果FL胞外区cDNA被正确克隆到真核表达载体pcDNA3．0中并在CHO细胞中成功表达。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3．0-FL并在CHO细胞中成功表达，为FL的相关研究和应用开发奠定了基础。     

大鼠胸腺降黑素受体的鉴定及生物学特性

应用放射配体结合法证实大鼠胸腺内存在降黑素特异结合部位，该结合位点可以满足特异结合部位的基本条件：１．低结合容量；２．高亲和力；３．可饱和性；４．可逆性；５．对降黑素高度特异性。此外，该特异结合位点具昼夜节律；亚细胞分布的研究表明以细胞核含量最高，线粒体次之，并具有年龄依赖性降低，以出生时最高。     

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞CD40L的表达增高

目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)的白细胞分化抗原40配体(CD40L)表达,探讨其在发病中的作用。方法:分离SLE患者和正常人PBMCs,采用流式细胞术,检测其在正常状况和应用植物凝集素(PHA)及地塞米松(Dex)后,CD40L的表达水平,并进行比较;分析SLE患者CD40L的表达水平和狼疮活动指数(SLEDAI)的相关性。结果:活动期SLE患者PBMCs的CD40L阳性细胞百分率(%)明显高于对照组,且高于静止期SLE患者;应用PHA处理24h后,3组PBMC表达CD40L均明显增加,但活动期SLE患者增加更明显;应用地塞米松后,SLE患者(活动期和静止期)PBMCs的CD40L表达明显减少,对照组无明显改变;SLE患者(活动期和静止期)CD40L的表达水平和SLEDAI均呈明显正相关。结论:CD40L在SLE患者PBMCs的表达增加,和疾病活动度有关;其受PHA和Dex调控,在SLE发病和病程中起重要作用。     

利用国产~(125)碘源制备~(125)I-心得静及实验考核

用国产Na~(125)I源、氯胺-T法、制备(-)~(125)I心得静标记配体【(-)~(125)I-IPIN】,放射色谱法分离复合物,测得(-)_(125)I-IPIN的Rf值为0.35,比活度为46.12～55.32TBq/mmol,标记率为37％,放射化学纯度达95％以上,该标记配体与小鼠脑细胞膜β受体的结合用受体的放射配体结合分析法(RBA)考核,呈典型的饱和曲线,Scatchard分析呈一直线,平衡解离常数(Kd)为0.041±0.001nM,Hill系数接近于1(0.99)。     

抗人CD154单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析

目的:克隆抗人CD154抗体轻重链可变区基因,并分析其核苷酸序列,为基因工程抗体的构建奠定基础。方法:从分泌能抑制免疫反应的抗人CD154单克隆抗体杂交瘤细胞株 7E8中提取总RNA,合成cDNA第一链后,经PCR扩增获得抗人CD154单抗轻链可变区 (VL)和重链可变区 (VH)基因,分别克隆入pUC18载体,并进行序列分析。结果:①抗体的轻链可变区基因全长为 341bp,编码113个氨基酸,归属于Ig的Vκ2基因,氨基酸序列分析结果显示轻链可变区含有明确的 4个骨架区和 3个抗原决定簇互补区,在第 2 3位和第 93位氨基酸为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两个特征性氨基酸;②抗体的重链可变区基因全长为 354bp,编码118个氨基酸,归属于小鼠IgVH基因,D、J区基因分别属于DSP2.9和JH2,氨基酸序列分析结果显示,重链可变区含有明确的 4个骨架区和 3个抗原决定簇互补区,在第 2 3和第 97位氨基酸为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两个特征性氨基酸。结论:经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别为抗体的轻、重链可变区基因.     

CTLA-4-FasL融合分子的构建及其生物学特性的鉴定

文章通过特异的引物分别扩增出CTLA 4和FasL胞外区的cDNA ,将它们拼接后 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 1( + )中 ,进行表达、纯化 ,获得CTLA 4 FasL融合蛋白。Westernblot分析显示了该融合蛋白具有CTLA4 胞外区和FasL胞外区的抗原性。体外试验表明 ,该融合蛋白可以结合Jurkat细胞表面的Fas受体和Raji细胞表面的B7分子 ,表明了该分子双特异性的特点。该融合蛋白能够直接诱导Jurkat细胞发生凋亡 ,且此凋亡效应伴随Raji细胞的参与而增强 ,初步证实了该分子的免疫抑制效应 ,从而为进一步研究该融合蛋白特性及应用奠定了基础。