蟾蜍灵诱导人宫颈癌C33A细胞自噬作用的机理研究

目的:探讨蟾蜍灵诱导人宫颈癌C33A细胞自噬的作用。方法:不同浓度梯度的蟾蜍灵处理人宫颈癌C33A细胞,选用CCK－8法检测蟾蜍灵对人宫颈癌C33A细胞的杀伤作用。透射电镜观察给药后C33A细胞的自噬现象。流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平,蛋白免疫印迹法检测自噬LC3蛋白表达及相关信号通路JNK、p-JNK蛋白表达。结果:蟾蜍灵对人宫颈癌C33A细胞的生长抑制作用呈时间-剂量依赖性。蟾蜍灵给药后可诱导C33A细胞发生自噬,蛋白印迹实验结果表明LC3蛋白表达随药物浓度升高而增加。蟾蜍灵诱导C33A细胞自噬发生与其促ROS水平升高激活了JNK信号通路有关。结论:蟾蜍灵诱导C33A细胞自噬的机制可能与通过ROS/JNK通路促进细胞自噬有关,以此发挥其抗肿瘤的作用。     

蟾皮中蟾蜍噻咛的超声提取工艺研究

目的 优选超声提取蟾蜍噻咛的最佳提取工艺.方法 通过单因素设计的方法,采用间歇超声辐射进行微波提取工艺的优化;以蟾蜍噻咛含量为评价指标,采用HPLC测定蟾蜍噻咛的含量.结果 超声法提取的最佳工艺条件为50％乙醇pH值为4的酸性溶液,温度50℃,固液比为1:15,提取时间为60 min,功率100W.结论 与传统水加热回流提取法相比,缩短了提取时间,降低成本,并有良好的蟾蜍噻咛提取率.     

蟾蜍大网膜治疗皮肤溃疡的研究现状

皮肤溃疡由于具有发生于体表,对外观影响大及并发症多等特点,对患者的生活和工作质量造成了极大的危害。蟾蜍在治疗皮肤感染性溃疡上有一定的疗效,目前关于蟾蜍治疗溃疡的研究很多,但未见对蟾蜍大网膜的研究。故本文旨在探讨蟾蜍大网膜对皮肤溃疡的作用,以期为皮肤溃疡的治疗提供新的技术方法和研究思路。     

HPLC测定不同种蟾皮药材中不同部位蟾蜍噻咛的含量

目的:对不同种蟾皮不同部位中蟾蜍噻咛的含量进行了比较研究.方法:采用高效液相色谱法测定了不同种蟾皮中不同部位蟾蜍噻咛的含量.样品中蟾蜍噻咛峰通过与对照品进行HPLC-DAD 3D及HPLC-MS-MS比对分析进行了确定.提取方法通过正交试验确定为50倍量50％甲醇超声60 min.样品分析选用了WondsiITM C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5μm),以乙腈-水(6∶94)为流动相,检测波长226 nm.结果:该方法具有良好的线性(r=0.999 7)、精密度(RSD,0.59％)、稳定性(RSD.0.72％)和重复性(RSD,1.56％);平均加样回收率为98.57％,RSD为2.03％,表明该方法准确可靠.经测定,中华大蟾蜍与黑框蟾蜍不同部位均含有蟾蜍噻咛成分,含量为0.07％ ～0.17％.结论:蟾蜍噻咛在不同种蟾皮药材中的不同部位含量差异不大.     

HPLC法测定蟾酥中4种蟾毒内酯

目的建立同时测定蟾酥药材中蟾蜍他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的方法。方法 10批蟾酥药材采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;乙腈-0.04%三氟乙酸为流动相梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;柱温为35℃;检测波长为296 nm。结果蟾蜍他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基分别在0.05～2.61μg(R2=1),0.10～4.96μg(R2=1),0.10～5.03μg(R2=1),0.10～5.18μg(R2=1)范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为97.62%,97.34%,97.23%,97.34%,RSD值均<2.0%。结论此方法简便、准确。10批不同来源的蟾酥样品测定结果表明,药材中蟾蜍他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基含有量相对稳定,脂蟾毒配基含有量则波动较大。     

贝加灵喷雾剂的纤毛毒性作用及粘膜刺激性实验研究

目的考察贝加灵对蟾蜍口腔粘膜纤毛的影响及对大鼠鼻腔粘膜的刺激性。方法采用在体蟾蜍上颚纤毛运动模型法,在光学显微镜下观察纤毛持续运动时间,以纤毛活动时间为指标考察贝加灵的纤毛毒性大小;分别取给予贝加灵1,3,5,7 d及给药7 d停药1周后的大鼠鼻粘膜做组织切片检查,观察粘膜有无病理变化。结果贝加灵对纤毛运动影响较小,与生理盐水组比较,无显著性差异(P﹥0.05);制剂对纤毛作用具有可逆性;对大鼠鼻粘膜结构形态无影响。结论贝加灵对蟾蜍上颚纤毛没有影响,对大鼠鼻粘膜也无明显刺激性。     

蟾蜍制剂诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

蟾蜍制剂是我国传统中药材,具有镇痛、消炎、麻醉等作用。近年来研究表明其具有多种抗肿瘤作用,包括诱导细胞凋亡,抑制增殖,促进细胞分化,抑制肿瘤血管形成等作用。而近几年来,以研究蟾蜍制剂诱导肿瘤细胞凋亡作用机制最多,本文主要就近几年来蟾蜍制剂：华蟾素、蟾毒灵及华蟾毒精诱导细胞凋亡作用机制的研究进展做一综述。     

蟾蜍灵诱导人肺腺癌细胞凋亡作用及其机制

目的 研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵(bufalin)对人肺腺癌细胞的作用及其机制。方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用;瑞氏 吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体跨膜电位;Western blot法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果 (1) 蟾蜍灵明显抑制A549细胞增殖,48h及72h的IC50分别为(56.14±6.72)nmol/L、(15.57±4.28)nmol/L。(2) 蟾蜍灵能诱导肺癌细胞凋亡,形态学表现为出现凋亡小体及流式细胞仪检测到的亚二倍体凋亡峰。(3) 蟾蜍灵可以明显降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)。(4) 蟾蜍灵诱导细胞凋亡过程中,下调Bcl-2蛋白表达(P<0.01),同时活化Caspase-3。结论 线粒体途径是蟾蜍灵诱导肺腺癌A549细胞凋亡的主要通路之一。     

蟾蜍灵对B16细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究中药蟾蜍灵对B16细胞增殖和凋亡的影响,探讨蟾蜍灵对黑色素瘤的抑制作用。方法 采用MTT法测定蟾蜍灵对B16细胞活力的影响;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞术检测蟾蜍灵对细胞周期的影响。结果 蟾蜍灵对B16细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度和时间的依赖性。蟾蜍灵作用24、48和72 h的IC50值分别为37.80、6.00和9.12 μmol/L。荧光染色显示蟾蜍灵作用于B16细胞24 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征;细胞周期分析显示,蟾蜍灵处理组S期细胞降低,蟾蜍灵可引B16细胞G0/G1期阻滞,而对G0/G1期阻滞随作用时间延长而增强。结论 蟾蜍灵可能通过阻滞B16细胞增殖周期进程而诱导凋亡。     

蟾蜍活性多肽对不同肿瘤细胞的抗癌功能及机制研究

目的:研究来源于中华大蟾蜍卵子内一种活性多肽对人不同组织类型肿瘤细胞株的抗癌作用及可能机制。方法:采用MTT法检测活性多肽对肿瘤细胞增殖能力的影响。构建肿瘤移植瘤模型,检测该活性多肽对肿瘤细胞成瘤能力的影响。流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况。采用real-time PCR检测活性多肽对细胞周期和凋亡相关基因表达的影响。结果:蟾蜍活性多肽对不同组织类型的肿瘤细胞具有增殖抑制和/或诱导凋亡的作用,并呈时间依赖性和剂量依赖性。蟾蜍活性多肽可能通过下调周期相关基因cyclinB、CDK1的表达阻滞肿瘤细胞周期于G2/M期检查点。对凋亡诱导的作用可能与凋亡相关基因Survivin、Caspase-3表达和bcl/bak表达的比值上调有关。结论:蟾蜍活性多肽能够通过阻滞细胞周期进展和诱导凋亡抑制肿瘤细胞的体内外增殖能力。