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101.
恙虫病东方体Sta56抗原的原核表达、纯化及其在间接ELISA中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 构建含恙虫病东方体sta5 6基因的重组表达质粒 ,在E .coli中表达Sta5 6重组抗原 ,纯化后用于间接ELISA检测恙虫病。方法 从含有恙虫病东方体Karp株sta5 6基因的重组质粒TOPO sta5 6扩增出截短的sta5 6 ,定向插入pET30a载体 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,用SDS PAGE及Westernblot进行分析 ;采用电洗脱方法纯化重组抗原并应用于间接ELISA检测恙虫病。结果 以截短的sta5 6基因片段构建了重组表达质粒pETOt95 7,重组的Sta5 6抗原可在E .coli中以融合蛋白的形式有效表达 ,SDS PAGE显示了一条相对分子质量 (Mr)为 4 0 .3× 10 3 的蛋白表达带 ,West ernblot证实该融合蛋白能被恙虫病患者阳性血清所识别。电洗脱纯化的重组抗原应用于间接法ELISA检测恙虫病 ,与间接免疫荧光法IFAT比较 ,其敏感性和特异性分别为 91.7%和 76 .5 %。结论 在大肠杆菌中表达的Sta5 6重组抗原具有免疫反应性 ,纯化后可用作免疫诊断试剂。 相似文献
102.
目的:研究表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β-环糊精(β-CD)组成的人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性,以提高鸡IL-18重组蛋白复性率,获得更多具有良好活性的蛋白.方法:将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG于37℃诱导培养获得表达.表达产物主要以包涵体的形式存在.包涵体经超声波破碎、洗涤后以6 mol/L的盐酸胍溶解,使蛋白彻底变性,然后利用人工分子伴侣系统辅助蛋白复性.复性产物经透析纯化后,利用淋巴细胞增殖试验来检测其活性.结果:经SDS-PAGE分析表明,表达产物是与ChIL-18重组蛋白相符的Mr约44000的蛋白条带.利用人工分子伴侣系统辅助复性,鸡IL-18重组蛋白获得了42.54%复性率.鸡淋巴细胞增殖试验表明,表达产物对鸡淋巴细胞具有明显诱导增殖作用.结论:人工分子伴侣系统能够较好地辅助鸡IL-18重组蛋白复性,获得较高的复性率.其产物具有良好的生物学活性,为下一步鸡IL-18重组蛋白的应用研究奠定了试验基础. 相似文献
103.
104.
人MASP1 N端片段原核表达载体的构建及其表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶1(MASP1)N端片段.方法:采用PCR技术从含人MASP1 cDNA的质粒pGEM-MASP1中扩增MASP1-N端基因片段,将其插入原核表达载体pGEX4T-1,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP1-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与重组MBL-CLR、重组MBL的结合活性.结果:从pGEM-MASP1中扩增得到约860 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4 900 bp和860 bp片段,测序结果与预期的完全一致.纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR、重组人MBL蛋白结合.结论:获得了表达人MASP1 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP1 N端片段/GST融合蛋白,为MASP1分子的进一步研究提供了条件. 相似文献
105.
Wistar大鼠胰岛细胞体外分离、纯化及鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探索Wistar大鼠胰岛分离纯化的最佳条件.方法 采用肝胰管内灌注胶原酶消化分离胰岛及Ficoll 400密度梯度离心纯化.纯化后的胰岛经组织学染色、电镜及放射免疫法鉴定其特异性和活力.结果 组织学染色显示纯化后胰岛的活力和纯度分别在95%和85%以上.电镜显示纯化后的胰岛形态完整,包膜清晰,分泌颗粒丰富.放射免疫结果表明,低糖组和高糖组分泌胰岛素的浓度有显著差异,证明胰岛功能良好.结论 肝胰管内灌注胶原酶消化法是一种好的消化方法.影响胰岛收获量的因素很多,例如胰腺的充分扩张,胶原酶的浓度和活性以及消化的时间等. 相似文献
106.
王棕花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定 总被引:2,自引:1,他引:2
目的 克隆并表达王棕花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin).方法 利用RT-PCR结合RACE技术克隆王棕花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析.然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个王棕花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性.结果 克隆获得了王棕花粉profilin的全长基因,由675个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸.经分析,这个序列编码的蛋白为小分子质量酸性蛋白,等电点为4.86,相对分子质量(Mr)约为14.2×103.此序列已被GenBank收录,登录号为EF173599.重组王棕花粉profilin在大肠杆菌中高效表达,进一步经Ni2+亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性.结论 成功克隆和表达了王棕花粉profilin,为王棕过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础. 相似文献
107.
目的了解重庆市某三甲医院消毒供应中心(CSSD)纯化水处理系统的细菌水平、消毒方法及效果。方法运用无菌技术采集重庆市某三甲医院CSSD不同时期的纯化水进行细菌培养,根据细菌培养、余氯、硬度检测结果对纯化水处理系统采取一系列措施以改善水质,并对各项措施的实施效果进行评价。结果该院CSSD纯化水存在细菌总数超标的情况,分别经过调整加盐量、更换水处理机耗材、安装含氯消毒剂加药装置并在水处理机制水时将5%84消毒液持续低流量泵入纯化水储水罐后,细菌总数明显降低,纯化水水质达标。结论该院纯化水存在细菌污染现象,医院应加强管理,CSSD需按时维护水处理设备,定期监测水质。 相似文献
108.
日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的纯化及其对血吸虫病的诊断和疗效考核 总被引:8,自引:1,他引:7
目的 为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原(SjAWA67)对血吸虫病的诊断及疗效考核价值。方法 通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔,进行ELISA检测。结果 SjAWA67的纯度已达到电泳纯和免疫纯,对急、慢性血吸虫病患血清的捡出率分别为100%和95%,与正常人血清、肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的交叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45.5%、75.0%和90,9%。结论 SjAWA67分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。 相似文献
109.
目的:为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法:利用RT-PCR技术从人外周血单核细胞系U937 cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白V(Annexin V) cDNA,并克隆到大肠杆菌表达载体中,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2 Annexin V融合蛋白。表达产物经凝血酶消化,可除去MS2细菌蛋白,再经离子交换层板纯化,可得成熟的Annexin V纯品,FITC标记后的Annexin V可用于细胞凋亡的检测。结果:在大肠杆菌表达的人重组Annexin V占菌体蛋白的56%,经纯化获得99%纯度的非融合型Annexin V,FITC标亡的Annexin V能有效地检测凋亡细胞。结论:成功地建立了批量获取Annexin V的技术路线,为推广高效检测凋亡技术提供了基础。 相似文献
110.