缢蛏糖胺聚糖的提取分离及其体外抗肿瘤活性的初步研究

缢蛏肉经胰酶和枯草杆菌中性蛋白酶酶解提取．经过分离得粗糖胺聚糖SG1．再经初步纯化得到精制的糖胺聚糖SG3．结果表明．胰酶和枯草杆菌中性蛋白酶用量分别为贝肉重量的1．2％和0．8％．水解时间为3h效果最佳；SG1得率为1．5％；SG3的总糖含量从SG1的，19．7%提高到73．2％．总氮含量从8．3％降至2．7％；SG3的电泳行为表明可能含有2个以上的组分；仞步的体外抗肿瘤试验表明．SG1对HL-60细胞具有显著的抑制效果。     

糖胺聚糖与角膜透明度关系的研究

对12例正常角膜、12例斑块状角膜营养不良和1例全身性糖胺聚糖贮积症角膜进行形态学和胶性铁超微组化研究。结果表明正常角膜上皮下基底膜和前弹力层有硫酸软骨素,实质层胶原纤维间有硫酸软骨素和硫酸角质素,内皮细胞表面有透明质酸,各种细胞膜上有硫酸肝素存在。斑块状角膜营养不良实质层胶原纤维间硫酸软骨素明显增多,硫酸角质素缺乏,角膜实质细胞和内皮细胞胞质内合成了大量的细纤维状物质和异常的糖胺聚糖。全身性糖胺聚糖贮积症为硫酸肝素在细胞内的蓄积,病变细胞膜上硫酸肝素缺乏。作者认为角膜组织中一定量的糖胺聚糖维持了角膜透明,其分布部位、性质和数量变化均可导致角膜混浊。     

人肋软骨细胞体外培养中生长代谢及功能的变化

目的　通过检测体外培养的人肋软骨细胞老化过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(aggrecan)的表达变化 ,为组织工程软骨构建的种子细胞选择适宜的回植时机。方法　取体外培养的P1 ～P5人肋软骨细胞 ,通过观察细胞形态 ,细胞增殖率 ,Alcianblue法定量检测每代Aggrecan中GAG含量 ,免疫组化蛋白水平观察Ⅰ、Ⅱ型胶原表达及RT PCR从mRNA水平分析Ⅰ、Ⅱ型胶原及Aggrecan基因表达量。结果　人肋软骨细胞从第 3代起逐渐向成纤维样细胞形态转换 ;每代软骨细胞Aggrecan中GAG含量随传代次数逐渐降低 ,第 3代后处于较低水平 ;Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达在蛋白水平及mRNA水平基本一致 ,第 2代以前Ⅱ型胶原表达较强 ,Ⅰ型胶原表达较弱 ,之后随传代Ⅱ型胶原表达减弱 ,Ⅰ型胶原表达逐渐增强 ;而Aggrecan在第 3代以前表达较高 ,从第 4代后明显下降。结论　人软骨细胞体外培养老化过程中综合细胞扩增及细胞功能因素 ,第 2代的软骨细胞 (体外扩增约 18 32 6倍 )可作为构建人组织工程软骨的种子细胞。     

牡蛎糖胺聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的:探讨牡蛎糖胺聚糖(O-GAG)对Ⅰ-型单纯疱疹病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响。方法:采用巨噬细胞体外培养的方法,观察每组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力、胸腺指数和脾指数。结果:随O-GAG浓度的增加,腹腔巨噬细胞吞噬能力显著增强,与病毒组比较,差异有显著意义(P<0.05或0.01)。胸腺指数ACV和O-GAG低、中、高剂量组与正常对照组比较,差异有显著意义(P<0.05或0.01),O-GAG高剂量组与病毒组比较,差异有显著意义(P<0.01)。脾脏指数O-GAG中、高剂量组与正常对照组比较,差异有显著意义(P<0.05或0.01),O-GAG高剂量组与病毒组比较,差异有显著意义(P<0.01)。结论:牡蛎糖胺聚糖能显著提高Ⅰ-型单纯疱疹病毒感染小鼠胸腺指数和脾脏指数,增强腹腔巨噬细胞吞噬能力,具有免疫增强作用。     

扇贝糖胺聚糖对巨噬细胞低密度脂蛋白受体表达的影响

 目的探讨扇贝糖胺聚糖(SS-GAG)的抗动脉粥样硬化作用机制。方法以体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,与不同浓度的SS-GAG、肝素孵育12h后,加入氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)作用24h,采用免疫组化和逆转录聚合链反应(RT-PCR)分别检测低密度脂蛋白受体(LDL-R)蛋白和mRNA表达的情况。结果OX-LDL与单核巨噬细胞RAW264.7作用24h后能降低LDL-R的蛋白和mRNA表达,SS-GAG对OX-LDL引起的LDL-R表达降低有保护作用,以200mg.L^-1组作用最为明显。结论OX-LDL可降低巨噬细胞LDL-R的表达,而SS-GAG可逆转OX-LDL的作用,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一。     

扇贝糖胺聚糖对巨噬细胞氧化修饰低密度脂蛋白的影响

动脉粥样硬化（AS）是缺血性心脑血管疾病的主要病理基础，其形成的确切机制尚未阐明。近年来研究证实氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）通过促进巨噬细胞源性泡沫细胞的形成、诱导调亡、促进血管平滑肌增殖等在AS的形成和发展中发挥着极为重要的作用。因此普遍认为减少体内OX-LDL的生成，能抑制AS的形成和发展。     

海参糖胺聚糖联合放疗对人肺腺癌A549细胞增殖抑制及促凋亡机制研究

目的 探讨海参糖胺聚糖（hGAG）与放疗联合应用对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用机制。方法 体外培养人肺腺癌A549细胞至对数生长期,分为对照组、hGAG组、放射组、联合组（hGAG联合放射处理）。CCK-8法测定不同处理组细胞的增殖抑制率;Hoechest 33258法对实验细胞进行染色并观察细胞变化;AnnexinV-FITC/PI双染法联合流式细胞术检测凋亡状况;蛋白印迹法（Western blot）测定各个组细胞survivin、Bax、Bcl-2及caspase-3四种凋亡蛋白的相对表达量。结果（1）CCK-8法显示,24h、48h和72h各时间段hGAG组、放射组、联合组细胞的增殖抑制率均高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）;24h、48h和72h各时间段联合组细胞的增殖抑制率亦均高于放射组,差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）Hoechest 33258染色示：hGAG组、放射组及联合组在镜下均可见凋亡细胞呈现核碎裂、核固缩现象,细胞呈现为染色浓密的状态,联合组较放射组更为明显;（3）流式细胞仪检测显示:三个实验组的细胞总凋亡率较对照组高（P<0.05）,以及联合组的细胞总凋亡率比放射组高（P<0.05）;（4）Western blot示：三个实验组与对照组比较,以及联合组与放射组相比,蛋白Bax、caspase-3的表达水平升高,蛋白Bcl-2、survivin的表达水平降低（均P<0.05）。结论 hGAG可有效抑制A549肺癌细胞的增殖并促进其凋亡,并且可以增强A549细胞系对射线的敏感性,推测其作用机制可能与caspase-3蛋白和Bax蛋白表达上调,以及survivin蛋白、Bcl-2蛋白的表达下调有关。     

气相色谱法鉴别扇贝糖胺聚糖的中性糖基

从海湾扇贝中提取分离出糖胺聚糖，分子中除含有氨基己糖和己糖醛酸外，还含有中性糖基。样品经盐酸－甲醇试剂醇解成单糖，用六甲基二硅胺烷和三甲基硅烷硅醚化成三甲基硅醚衍生物，于气相色谱仪中测定，并与标准单糖比较分析，结果发现，扇贝糖胺聚糖含有５种中性糖基，即葡萄糖，半乳糖，木糖，岩藻糖和鼠李糖。     

内皮细胞损伤对动脉平滑肌细胞糖胺聚糖的影响

内皮细胞损伤对动脉平滑肌细胞糖胺聚糖的影响陈鹏，吕俊升，陈慰浙，余心如，单子葭，冼棠超我们以此实验探讨了当血管内皮细胞在不同生长状态和受到缺氧、氧化及低密度脂蛋白的非致死性损伤时，对动脉平滑肌细胞的糖胺聚糖合成和分泌的影响，以阐明动脉粥样硬化的发病机...     

银屑病患者糖胺聚糖代谢的研究

本研究采用改良的咔唑—硫酸法测定了30例银屑病患者和15例健康人24小时尿液中糖胺聚糖(GAG)的含量,并用单向电泳法分析其尿中GAG的种类和相对含量。结果显示:银屑病患者尿中GAG含量较正常对照组明显增高(P<0.05),单向电泳分析表明,银屑病患者尿中排出增多的GAG主要为硫酸乙酰肝素(HS),经直线相关分析得两者呈正相关(r=0.6236,P<0.001),这些结果证明银屑病患者的表皮细胞间质和真皮结缔组织中存在着代谢紊乱。