人IL-37b在大肠埃希菌中的表达、纯化及活性鉴定

目的表达重组IL-37b蛋白并去除内毒素,鉴定其活性。方法构建原核表达载体p ET28/IL-37b,转化大肠杆菌感受态细胞;经IPTG诱导表达的重组蛋白由Ni2+-NTA凝胶进行变性条件下的亲和层析纯化;用SDS-PAGE分析、考马斯亮蓝染色鉴定重组蛋白是否为目的蛋白;去除蛋白中原核表达所产生的内毒素;将蛋白作用于受LPS刺激的RAW 264.7细胞,收集培养上清,通过ELISA方法检测IL-6的表达水平,鉴定蛋白的生物学活性。结果表达了纯度较好的重组IL-37b蛋白,降低了其中原核表达所产生的内毒素,经鉴定其具备良好的生物学活性。结论成功表达了具备良好生物学活性的IL-37b蛋白。     

湿性抑菌水凝胶敷料的性能与应用

目的采用抗菌肽(GBB)替代传统抗菌剂,制备新型湿性抑菌水凝胶敷料。方法将聚丙烯酸钠固定于无纺布上作为抑菌敷料的基底,并用涂抹方式在基底表面吸附上0.004 mg/cm2~1.00 mg/cm2不同浓度的抗菌肽。参照标准YY/T0471.1-2004中的方法测定敷料的吸水率、含水率及水蒸气透过率;采用2015版《中国药典》通则0952黏附力测定第一法,测定初粘力表征材料理化性能;同时采用接触法及抑菌圈法检测敷料抑菌性,评价抑菌敷料抑菌作用大小,并与商业化含银敷料抑菌率进行比较;用噻唑蓝(MTT)法评估检测材料有无明显细胞毒性。结果敷料吸水率平均值可达404.59%,含水率平均值可达80.09%,水蒸气透过率平均值可达1476.67g/m~2/24h,能黏附最大钢球质量10.10g,敷料表面GBB含0.20 mg/cm~2,对大肠埃希菌抑菌率为100%,MTT法检测材料无明显毒性。结论材料基本满足湿性抑菌水凝胶敷料要求,具有优良生物相容性,故有望作为抗感染的创面敷料。     

SPLUNC1在呼吸道感染中的作用及其调节

呼吸道与外界环境相通,长期暴露于各种理化物质及病原微生物刺激之下,其上皮细胞分泌的具有抗菌活性的蛋白对维持机体健康至关重要.短腭、肺及鼻咽上皮克隆l(short palate,lung,and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)就是新近发现的一种具有抗菌活性的蛋白,其结构与杀菌/渗透性增加蛋白相似,能特异结合革兰阴性菌细胞壁上的脂多糖,有助子维持内稳态、保持肺内无菌环境,在快速激活先天免疫及启动适应性免疫中起守门员作用,有望作为抗菌制剂用于呼吸道细菌感染性疾病的治疗.     

不同浓度结核菌建立兔脊柱结核模型的对比研究

[目的]应用不同浓度结核杆菌构建兔脊柱结核模型,探索在造模中较适合的菌量。[方法]42只新西兰兔随机分为5组,实验组3组共30只,每组10只;对照组10只;空白组2只。实验组及对照组动物经弗氏完全佐剂致敏后,在L_6上终板下方钻孔,塞入明胶海绵。实验组分别注入0.1 ml浓度为10~6CFU/ml,10~7CFU/ml,10~8CFU/ml H37Rv标准菌;对照组注入0.9%的生理盐水0.1 ml;空白组不做任何处理。[结果]术后12周兔存活率:注射10~6 CFU/ml菌量兔100%、10~7CFU/ml菌量80%、10~8CFU/ml菌量30%、对照组100%、空白组100%。术后8周X线片阳性率分别为33.3%,62.5%,66.7%;CT及三维CT阳性率分别为44.4%,75%,100%。术后12周X线片阳性率分别为44.4%,75%,100%;CT及三维CT阳性率分别为44.4%,100%,100%。术后12周解剖见17只兔椎体发生骨质破坏,部分有干酪样坏死物质形成,未见有腰大肌脓肿形成;病理学检查:片状分布的干酪样坏死物质,骨小梁排列紊乱及轮廓不清,周围见上皮样细胞及多核巨细胞包绕,局部有部分死骨碎片形成,周围见大量炎细胞浸润;实验组细菌培养阳性率分别为22.2%,75%,66.7%。对照组及空白组未出现上述结核影像学及病理改变。[结论]不同浓度H37Rv标准菌构建兔脊柱结核模型存在较大差异,10~6CFU/ml成功率较低;10~8CFU/ml死亡率及并发症较高;10~7CFU/ml造模成功率高且死亡率较低,较适合兔脊柱结核模型的构建。     

LL-37 在肿瘤发生发展中的作用

[摘要] LL-37 是人体内发现的唯一一种Cathelicidin 类抗菌肽,由其前体hCAP-18 经丝氨酸蛋白酶3 剪切后产生。研究发现,LL-37 可在卵巢癌、肺癌、恶性黑色素瘤、皮肤鳞状细胞癌、前列腺癌等肿瘤中发挥促癌作用;而在胃癌、结直肠癌、白血病等肿瘤中发挥抑癌作用。本文就LL-37 在这些恶性肿瘤发生发展过程中所起的作用作一综述。     

林蛙抗菌肽脂质体处方筛选

目的探索新剂型延长林蛙抗菌肽的药效时间,筛选林蛙抗菌肽脂质体最佳处方。方法采用薄膜分散法制备林蛙抗菌肽脂质体,以包封率为考察指标,使用单因素分析筛选和优化处方。结果处方所制得的脂质体形态均匀,包封率为79.2%,12 h脂质体在皮肤表面的存留率为91.79%。结论筛选所得的林蛙抗菌肽脂质体形态均匀,包封率较高,12 h内皮肤表面存留率较高。     

新型抗菌肽KR-1的设计、筛选及抗菌活性评价

目的 构建高活性、低毒性的新型抗菌肽,对其抗变异链球菌及其他口腔致病菌的活性进行评价,探讨其在防治龋病中的潜在应用价值。方法 以天然抗菌肽Histatins5的类似物Dhvar4为模版合成新型抗菌肽KR-1、KR-2。通过所设计抗菌肽对变异链球菌的最小抑菌浓度（MIC）实验,兔血红细胞溶血试验以及CCK-8法,筛选出高活性、低毒性的目标抗菌肽;使用96孔板培养变异链球菌生物膜,分为实验组（用浓度梯度为0.6×、0.8×、1×、2×MICs的KR-1进行处理）与阳性对照组（用浓度梯度为0.6×、0.8×、1×、2×MICs的洗必泰进行处理）,通过结晶紫染色定量法观察生物膜量的改变;使用10×MIC浓度KR-1作用于变异链球菌生物膜后通过激光共聚焦显微镜观察结构的改变;通过KR-1作用口腔链球菌后杀菌所需的时间探讨目标抗菌肽对口腔链球菌的抗菌效率。结果 实验测得KR-1及KR-2的MIC分别为3.2 μmol/L和12.8 μmol/L,有效浓度下,兔血红细胞溶血率分别为0.35%和48.8%,24 h牙龈成纤维细胞存活率分别为72.96 %和21.94 %,将活性较高、生物相容性较好的KR-1作为目标抗菌肽;经结晶紫染色后测定KR-1的50%生物膜最小抑制浓度（MBIC50）低于1.92 μmol/L,且浓度为2.56 μmol/L时效果优于阳性对照组洗必泰（P=0.001）,共聚焦显微镜下观察可见经KR-1处理后生物膜结构疏松;KR-1在5 min内可杀灭约90%细菌。结论 KR-1抗菌肽具有较强的抗菌活性和较低的毒性,且有良好的抗变异链球菌生物膜作用。     

抗菌肽LL-37通过激活p53信号通路诱导胃癌AGS细胞凋亡

目的 探讨抗菌肽LL-37对人胃癌细胞系AGS细胞凋亡的影响及其分子机制.方法 不同浓度(0、10、20、40μmol/L)LL-37处理胃癌AGS细胞24 h,采用MTT法检测细胞增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术法检测细胞凋亡,qRT-PCR法检测细胞中p53 mRNA表达水平,免疫荧光法检测细胞中p53蛋白定位,Western blot法检测细胞核中p53蛋白表达以及细胞中Cleaved-caspase-3、PUMA、Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白表达;干扰p53基因表达验证LL-37通过激活p53信号通路诱导胃癌AGS细胞凋亡.结果 LL-37可剂量依赖性抑制胃癌AGS细胞增殖,提高细胞凋亡率,上调p53 mRNA和蛋白表达水平并促进p53蛋白核转位,同时促进凋亡蛋白Cleaved-caspase-3、PUMA和Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达.干扰p53基因表达可抑制LL-37诱导的AGS细胞凋亡.结论 LL-37可诱导胃癌AGS细胞凋亡,其机制可能与激活p53表达有关.     

清热利湿方联合洛索洛芬钠片治疗急性痛风性关节炎的疗效观察及对细胞因子的影响

目的 观察清热利湿方联合西药洛索洛芬钠片治疗急性痛风性关节炎湿热瘀阻证的疗效及对患者细胞因子的影响.方法 将92例急性痛风性关节炎湿热瘀阻证患者随机分为治疗组46例、对照组46例.对照组采用洛索洛芬钠片治疗,治疗组在对照组西药治疗基础上联合清热利湿方加减治疗.观察中医证候积分,中医证候疗效,采用视觉模拟评分法(VAS)记录疼痛评分,红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、血白细胞(WBC)、血尿酸(UA)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)、白细胞介素-37(IL-37),记录不良反应.结果 2组治疗前后中医证候积分较治疗前均降低(P<0.05),治疗组较对照组降低明显,治疗前后差值比较,差异有统计学意义(P<0.05).治疗组46例中,临床痊愈12例,显效25例,有效6例,无效3例,总有效率为93.48％;对照组46例中,临床痊愈9例,显效23例,有效8例,无效6例,总有效率为86.96％.经秩和检验,Z=-1.247,P>0.05,说明2组疗效相当.2组治疗后ESR,CRP,WBC,UA,IL-1β,IL-18,VAS评分均较治疗前降低(P<0.05),治疗组较对照组降低明显,治疗前后差值比较,差异均有统计学意义(P<0.05).治疗组不良反应总发生率2.17％,对照组为6.52％.结论 清热利湿方治疗急性痛风性关节炎湿热瘀阻证可有效减轻炎症反应,改善症状,同时具备良好的安全性.     

防御素与口腔黏膜疾病的关系

防御素是机体免疫系统的重要组成部分,它可以通过直接杀菌作用抵御入侵机体的病原微生物,还可以介导获得性免疫反应、调节机体的免疫炎症反应和创伤修复过程,其细胞毒性和细胞裂解活性在肿瘤免疫方面的作用也值得关注。研究发现防御素与口腔溃疡、口腔扁平苔藓等多种口腔黏膜疾病有关,本文就此方面的研究进展做一综述。