基因工程技术在抗菌肽研究应用中的作用

抗菌肽具有抗菌谱广、热稳定性好、抗菌机制独特、不易产生耐药性等优点,有望成为抗生素最理想的替代品。然而,由于传统方法获得抗菌肽产量低、费时长、费用昂贵,无法实现大规模生产,这成为制约抗菌肽进入实际应用的最大障碍。因此,通过基因工程技术获得抗菌肽成为最为经济、科学的方法。现就抗菌肽的分类、作用机制及获取抗菌肽的方法等方面进行综述。     

抗菌肽GLL-37在大肠杆菌中的高效融合表达及纯化

目的:研究抗菌肽GLL-37的原核表达及产物纯化。方法:将人工合成的编码2个串联GLL-37的基因片段克隆入原核表达载体pGEX-2T中,构建表达载体pGEX-2T/GLL-37,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达融合蛋白GST-GLL-37-M-GLL-37,产物经Glutathione Sepharose4B亲和层析分离纯化后,再经CNBr切割,阳离子交换层析,得到纯化的重组GLL-37。并采用微量稀释法测定重组GLL-37对6种革兰氏阴性和阳性菌的最低抑菌浓度。结果:在大肠杆菌中成功表达和纯化了具有完全抗菌活性的重组GLL-37,其产量为8.5mg/L的培养物。结论:通过原核表达可高效、低成本地获得具有生物活性的重组GLL-37。     

中国林蛙皮抗菌肽用响应面法优化提取条件

采用响应面法优化了中国林蛙皮抗菌肽的提取条件.结果表明,林蛙皮抗菌肽的最佳提取工艺条件为:浸提液pH 1.48,浸提时间3.61 h,液料比12.46:1(ml:g),抗菌肽抑菌圈直径预测值为24.8mm,验证值为24.9 mm,与理论预测值偏差为0.41%.     

天蚕素A截短肽在大肠埃希菌中的高效表达及活性分析

将构建好的含抗菌肽天蚕素A(cecropin A,CA)截短肽CA19(36、210)1～5倍串连体的pET-31b(+)载体进行诱导表达,其表达量比单体表达明显提高.将融合蛋白用亲和层析法将其纯化,其纯度达到90%以上.纯化融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了其特异的多克隆抗体.纯化串连融合蛋白用溴化氰切割成单体检测其活性,发现均具有抑菌活性.本研究为抗菌肽的基因工程制备提供了新途径.     

家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对肿瘤细胞A375抑制作用的研究

目的:研究家蝇胚胎抗菌蛋白对肿瘤细胞A375生长的抑制作用。方法:利用脂多糖诱导家蝇胚胎细胞提取抗菌蛋白,将提取的抗菌蛋白用PBS配制成40、80、160、320及640μg/mL 5个浓度组,做黑色素瘤细胞A375的MTT实验,实验组采用等量PBS,观察家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对A375的抑制作用,以人脐静脉血管内皮细胞作为正常对照组。结果:MTT检测显示五种浓度抗菌蛋白对A375均有抑制作用,与阴性组相比P<0.05,差异有显著性。各浓度组对人脐静脉血管内皮细胞无抑制作用,与阴性组相比P>0.05,差异无显著性。结论:家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对肿瘤细胞A375具有明显抑制作用,而对正常人体细胞无抑制。     

水产低值鱼抗菌肽研究进展

抗菌肽是生物防御系统产生的一类对抗外源性病原体的肽类物质,具有抗细菌、真菌、病毒、原虫、癌细胞等多种活性,目前发现抗菌肽或类似抗菌肽的小分子肽类广泛存在于昆虫、两栖类、水产动物及哺乳动物中,具有广阔的应用前景。现就抗菌肽的理化特征、结构特点、应用前景等几个方面系统地阐述水产低值鱼抗菌肽的研究进展。     

抗菌肽抗菌机制的研究进展

抗菌肽是广泛存在于生物体内的一类小分子多肽,是生物固有免疫系统的重要组成部分.抗菌肽不仅能够有效杀灭细菌,而且还对真菌、病毒、寄生虫甚至肿瘤细胞都具有一定的杀伤作用.抗菌肽因其作用迅速、广谱抗菌、不易产生耐药性等诸多特点,已成为医药卫生、畜牧养殖、水产动物等领域研究的热点.本文就当前抗菌肽抗菌机制的研究进展作一综述.     

海洋动物抗菌肽研究进展

抗菌肽是具有天然抗菌活性的一类生物多肽。海洋无脊椎动物和鱼类是海洋生物多样性的代表,也是发现结构、功能具有独特性的新型抗菌肽的源泉。目前,已从海洋无脊椎动物,包括刺胞动物、软体动物、环节动物、甲壳动物、棘皮动物和原索动物以及脊椎动物鱼类分离出多种抗菌肽。本文章对海洋无脊椎动物和鱼类中抗菌肽的研究进展、作用机理和研究趋势作了简要概述。     

新疆家蚕抗菌肽联合多种化疗药物对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

【目的】研究新疆家蚕抗菌肽联合4种化疗药物对人食管癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响。【方法】应用MTT法检测新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与不同浓度阿霉素(Doxorubicin,DOX)、卡铂(Carboplatin,CBP)、顺铂(Dichloro-Diamineplatinum,DDP)、环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)联合,对人食管癌Eca109细胞增殖的影响;流式细胞仪分析新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与D0X、CBP、DDP、CTX联合,对Eca109细胞凋亡,活性氧水平及线粒体膜电位的影响。【结果】新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与化疗药物DOX、DDP、CTX分别单独用药或联合用药均可抑制Eca109细胞的增殖作用,联合用药组与各药物单独处理组相比,细胞凋亡率,活性氧水平及线粒体膜电位均具有显著性差异（P<0.05）。【结论】在体外实验中,抗菌肽与化疗药物DOX、DDP和CTX联用对Eca109细胞具有增殖抑制作用和凋亡诱导作用。新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与DOX、DDP和CTX联合作用Eca109细胞具有协同作用,而与CBP联合作用Eca109细胞则具有拮抗作用。