实时定量PCR检测慢性粒细胞白血病微小残留病研究进展▲

慢性粒细胞白血病（CML）是起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病。约90％～95％CML患者具有费城染色体（Pniladelphia．Pn）。其分子基础是9号染色体上的o-abl基因易位到22号染色体上的bcr基因上形成新的基因嵌合体-bcr／abl融合基因，即t（9；22）（q34；q11）。     

RNA干扰阻断BT／CD28共刺激通路在小鼠心脏移植中的抗排斥作用

目的探讨RNA干扰（RNAi）技术阻断B7／CD28共刺激通路对小鼠异体心脏移植排斥反应的影响及其机制。方法经体外转录合成针对CD80 mRNA和CD86 mRNA序列特异性小片段干扰RNA（siRNA），转染供者骨髓来源的树突状细胞（DC），半定量逆转录聚合酶链反应、流式细胞仪检测DC转染CD80siRNA、CD86siRNA前后CD80 mRNA和CD86 mRNA的表达水平以及细胞表面CD80及CD86的表达情况。在小鼠异位心脏移植前7d，经静脉给受者输注经siRNA干扰后的DC（干扰DC组），同时设立同种异体对照组、环孢素A（CsA）治疗组（术后皮下注射CsA 5mg／d）、同系移植对照组和未干扰DC组（移植前输注未转染DC），观察各组移植心脏的存活时间，对移植物的排斥反应进行病理分级，并测定移植物组织中白细胞介素2（IL-2）、γ干扰素（IFN-γ）及IL-10的mRNA表达水平。结果siRNA转染DC后，其CD80 mRNA及CD86 mRNA的表达受到明显抑制，CD80、CD86的阳性率分别由84％和67％下降至35％和30％。与同种异体对照组和未干扰DC组比较，干扰DC组移植心脏存活时间明显延长（P〈0．01），组织排斥反应病理分级显著降低（P〈0．01），移植心脏组织中IL-2 mRNA和IFN-γ mRNA的表达水平明显降低（P〈0．01），而IL-10 mRNA的表达水平明显升高（P〈0．01）。结论利用RNAi敲减供者骨髓来源的DC表面B7分子的表达，以阻断BT／CD28共刺激通路，具有抑制小鼠心脏移植排斥反应的作用，其机理可能是通过诱导T淋巴细胞无能并使T辅助细胞分化向Tn2型方向偏移。     

RNA干扰及其在胶质瘤基因治疗中的应用

RNA干扰（RNA interference。RNAi）是双链RNA（double—stranded RNA，dsRNA）降解特异性靶基因转录出的mRNA。从而抑制靶蛋白表达的现象。自从二十世纪九十年代发现RNAi这一现象以来，RNAi已被广泛应用于研究基因功能、信号转导通路和基因治疗等方面。随着分子生物学、分子遗传学等学科的发展．发现了许多与肿瘤发生、发展和预后密切相关的基因。经过大量临床前期试验表明，针对特异性靶基因的小干扰RNA（short／small interfering RNA．siRNA）治疗胶质瘤是行之有效的。为基因治疗胶质瘤提供了新的思路。[第一段]     

微小病变型肾病免疫发病机制进展

微小病变型肾病综合征 (ｍｉｎｉｍａｌｃｈａｎｇｅｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ,ＭＣＮ)是儿童原发肾病综合征中最常见的病理类型 ,病因不明。其致病因素可导致肾小球滤过结构较多阴离子丢失 ,静电屏障作用减退 ,使相对分子质量较小、带阴电荷的白蛋白从尿中大量丢失 ,形成高选择性蛋白尿。大部分ＭＣＮ患儿应用糖皮质激素和免疫抑制剂可获得缓解 ,但副作用大且复发率高。因此 ,进一步研究其病因及发病机制 ,为寻找高效、安全的治疗手段提供理论依据 ,具有十分重要的意义。非微小病变型肾病肾内常见各种免疫球蛋白和(或 )补体成分沉积 ,提示有…     

锌指蛋白A20 RNAi载体的构建及筛选

目的我们前期的实验结果显示A20 mRNA和蛋白在人脑胶质瘤组织及细胞系（U251、U87、BT325）中高表达，本研究拟构建A20RNAi载体，并检测其对U251细胞A20表达的抑制作用。方法构建三种针对人A20基因的真核干涉表达载体，以脂质体法将其分别转染人脑胶质瘤细胞系U251，以RT-PCR、蛋白印迹法检测各干涉载体对U251细胞中A20mRNA和蛋白表达的抑制作用。结果成功构建三种针对A20基因的RNAi载体，经RT-PCR、蛋白印迹检测筛选出对A20基因干涉效果最佳的载体，命名为pSilencer3．1-A20R1。结论成功构建A20基因干涉载体，为进一步探讨A20与脑胶质瘤恶性增殖、血管形成以及抗凋亡的关系奠定实验基础。     

RNA干扰技术在以VEGF/VEGFR为靶点的膀胱癌治疗研究中的应用前景

RNA干扰（RNAi）是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象，它是指当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA（dsRNA），该mRNA发生降解而导致基因沉默的现象。利用RNAi技术干涉VEGF表达，达到抑制肿瘤发展和转移的研究已较为广泛。膀胱癌生长、转移不仅有VEGF表达增多，同时发现VEGFR表达亦增高，成为RNAi的新靶点。现主要综述以VEGF/VEGFR为靶点的RNAi技术在膀胱癌治疗研究中的优势、发展前景以及存在问题与对策。     

反义AKT2 RNA抑制U251胶质瘤细胞生长的体内外研究

目的 研究反义AKT2RNA对U251人脑胶质瘤细胞在体内外的生长抑制效用。方法 将逆转录病毒pLXSN为载体的反义AKT2构建体转染U251人脑胶质瘤细胞系，应用蛋白印记确定基因转染前后AKT2的表达水平。流式细胞法与Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的增殖活性。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导pLXSN、pLXSN-AS-AKT2基因治疗对U251细胞生长抑制作用。在28d的观察期内定期测量皮下肿瘤体积，对肿瘤标本应用免疫组化的方法进行AKT2和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达比较。结果 脂质体介导pLXSN-AS-AKT2可显著抑制U251细胞AKT2表达。与对照组和pLXSN转染组比较，细胞周期分析结果表明AK—AKT2转染组进入S期的细胞数减少了8．5％～8．9％，而进入G0＋G1期细胞则增加了7．9％～8．6％。Matrigel基质生长实验显示对照组和pLXSN转染组细胞呈正常形态贴壁生长，而AS～AKT2转染组细胞不能贴壁生长，呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示pLXSN-AS-AKT2显著抑制皮下肿瘤生长，组织病理学分析显示AS-AKT2转染组AKT2表达下降而GFAP表达上调。结论 体内外实验证明反义AKT2方法在抗胶质瘤增殖方面作用重要，AKT2可作为基因治疗胶质瘤的优选靶标。     

局部消融在肝脏微小占位病变治疗中的地位及评价

随着影像学技术的发展，肝脏微小占位病变的临床诊断已不再困难，其治疗比较特殊。 从病理上来说，非肝硬化中的肝细胞结节性病变主要包括：肝细胞腺瘤（liver cell adenoma，LCA），局灶结节性增生（focal nodular hyperplasia，FNH），大再生性结节（large regenerative nodule，LRN），结节再生性增生（nodular regenerative hyperplasia，NRH），部分结节转化（partial nodular transformation，PNT），代偿性增生（compensatory hyperplasia），灶状脂肪变性（focal fatty change）和肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）。从临床上来说，肝脏常见微小占位病变主要有小肝癌（small hepatocellular carcinoma，sHCC），微小肝癌（micro hepatocellular carcinoma，mHCC）及相关结节，小转移瘤、小血管瘤、小囊肿、小的其他良性占位病变等。     

小儿腹股沟疝微小切口免缝合门诊手术患者的健康教育

目的总结小儿腹股沟斜疝小切口免缝合门诊手术患儿的健康教育。方法口头宣教和发放健康教育单,完善术前准备。术后正确护理,避免并发症的发生。结果68例患儿无出血、感染、复发。结论健康教育为患者解决有关健康问题,同时,提高了护士的业务素质。