血浆凝血酶原时间测定的方法比较

血浆凝血酶原时间测定的方法比较王缚鲲田惠芬吴玉暖候正燕（白求恩国际和平医院检验科，石家庄０５００８２）关键词血浆凝血酶原时间手工法仪器法血浆凝血酶原时间（ＰＴ）测定是临床常做项目之一。我科自１９９５年第一季度首次参加全国ＰＴ测定质控已连续四次，为了提...     

毕赤酵母表达重组人凝血酶原2及活性分析

目的：通过毕赤酵母（Pichia pastoris）表达制备重组人凝血酶原2（prothrombin-2）,并利用锯鳞蝰（Echis carinatus）凝血酶原激活剂ecarin将其活化为凝血酶,分析凝血酶的活性。方法根据GenBank公布的人凝血酶原2和ecarin的cDNA序列,设计并优化合成凝血酶原2和ecarin基因。将凝血酶原2基因构建至表达载体pPICZαA中,转化并筛选重组凝血酶原2的糖基工程酵母菌,诱导工程酵母分泌表达凝血酶原2,培养上清中的目的蛋白经两步阳离子层析纯化制备,并利用酶切N-糖链和肽指纹图谱分析鉴定目的蛋白。将ecarin基因构建到表达载体pcDNA3．1（＋）,瞬转HEK 293T细胞,收集培养上清。将HEK 293T工程细胞培养上清与纯化的凝血酶原2反应,利用凝血酶发色底物S-2238,测反应产物的酶促活性;利用血浆纤维蛋白原测反应产物的血凝时间、分析血凝活性。结果酵母表达凝血酶原2的培养上清经纯化获得37×103的目的蛋白,去除N-糖链的蛋白相对分子质量降为35×103,与凝血酶原2理论分子量一致。经肽指纹图谱鉴定,纯化得到的蛋白为凝血酶原2。制备的凝血酶原2经HEK 293T细胞表达ecarin的培养上清处理后,可催化S-2238解离产生黄色的对硝基苯胺（pNA）,且pNA产生的光密度值随着处理的凝血酶原2的增加而升高;经ecarin处理的凝血酶原2能促进血浆凝结,与凝血酶试剂的血凝时间接近,且血凝时间随着处理的凝血酶原2的量减少而延长。结论利用毕赤酵母制备了重组人凝血酶原2,被ecarin活化为具有活性的凝血酶,有望替代从血浆中提取的凝血酶原,用于战伤救治和临床研究。     

异常凝血酶原在肝细胞肝癌诊断中的临床价值

肝细胞肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,是指由肝细胞或肝内胆管细胞发生的癌肿,死亡率高[1]。肝细胞肝癌的病因和发病机理尚未明确,起病隐匿,病情发展迅速,早期手术切除是最有效的治疗方法[1-2]。异常凝血酶原(protein induced by vitamin K absence or antagonist-Ⅱ,PIVKA-Ⅱ)是指由于维生素K缺乏或者由于服用维生素K拮抗剂而产生的异常蛋白质。PIVKA-Ⅱ是凝血Ⅱ因子(凝血酶原)的PIVKA体,因此也被称为异常凝血酶原。     

血清异常凝血酶原联合甲胎蛋白检测在原发性肝癌诊断中的应用价值

目的:探讨血清异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)联合甲胎蛋白(AFP)检测在原发性肝癌(PLC)诊断中的应用价值。方法:选取2019年3月至2021年9月佳木斯中医医院收治的192例患者为研究对象,其中PLC患者48例,纳入PLC组,慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者48例,纳入HBV组,慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染者48例,纳入HCV组,肝硬化(LC)患者48例,纳入LC组,另选取同期52名健康体检者为健康组,比较四组AFP、PIVKA-Ⅱ水平,不同病理特征PLC患者血清AFP、PIVKA-Ⅱ水平,并绘制受试者工作曲线(ROC),分析AFP、PIVKA-Ⅱ单项及联合检测在PLC诊断中的价值。结果:PLC组AFP、PIVKA-Ⅱ水平高于健康组、HBV组、LC组、HCV组,差异均有统计学意义(P<0.05);不同肿瘤直径、巴塞罗那临床肝癌(BCLC)分期和肿瘤细胞分化程度的PLC患者血清AFP、PIVKA-Ⅱ水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);不同肿瘤结节PLC患者血清AFP、PIVKA-Ⅱ水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);ROC曲线结果显示,AFP、PIVKA-Ⅱ单项及联合检测的AUC分别为0.883、0.923、0.962,联合检测诊断价值最高。结论:血清PIVKA-Ⅱ联合AFP检测在PLC诊断中具有较高应用价值,临床可根据其水平变化评估肿瘤直径、分期、肿瘤细胞分化程度。     

静脉滴注三种抗生素对四项凝血试验的干扰分析

目的探讨临床上常用的静脉滴注三种抗生素(青霉素钠、头孢唑啉钠、磷霉素钠)在不同剂量下对四项凝血试验的影响。方法应用Start4半自动血凝分析仪及配套试剂分别测定含有不同剂量的三种抗生素血浆和临床使用青霉素钠、磷霉素钠、头孢唑啉钠后各2例患者的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)值及纤维蛋白原(FIB)含量。结果血浆中青霉素钠浓度为3.0mg/ml、头孢唑啉钠浓度为3.2mg/ml、磷霉素钠浓度为1.6mg/ml时PT、APTT、TT、FIB出现变化(P<0.01)。当血浆中青霉素钠浓度为12mg/ml、头孢唑啉钠浓度12.8mg/ml、磷霉素钠浓度为3.2mg/ml时PT、APTT、FIB、TT出现显著性变化(P<0.01)。结论这三种抗生素大剂量使用时均可干扰凝血时间的测定,造成PT、APTT、TT值延长和FIB含量减少,但干扰的程度不同,磷霉素钠干扰最为严重,青霉素钠次之,头孢唑啉钠影响最小。为此在对凝血试验进行质量控制或临床医师分析结果时应考虑此因素的影响。     

不同妊娠期孕妇及妊高征患者凝血四项指标变化的意义

目的探讨正常妊娠妇女和妊高征患者凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶凝固时间(TT)及血浆纤维蛋白原(Fbg)等反映凝血功能4项指标的检测及临床意义。方法厌PT、APTT、TT测定为凝固法,Fbg测定为发色底物法,均在CulterACL-200全自动血凝仪上进行,试剂及定标血浆均为IL公司产品。结果妊娠中、晚期妇女与正常对照组或早期妊娠者比较,PT、APTT、TT时间明显缩短、Fbg含量明显增高,差异有显著性(P<0.05或P<0.01);妊高征组与晚期妊娠组比较,PT、APTT、TT时间进一步缩短,差异有显著性(P<0.05或P<0.01);Fbg水平明显增高,其中65例中、晚孕妇女中39例大于4g/L,占60%;58例中、重度妊高征组中有46例Fbg>4g/L,占80%,某妊高征患者最高Fbg达7.5g/L。结论妊娠各期及妊高征患者由于凝血功能增强、抗凝及纤溶功能减弱,出现所谓妊娠期高凝状态。这一妊娠期生理变化为产后快速有效止血提供了物质基础,但也是导致妊娠期血栓病形成的重要原因,并可能与多种产科疾患有关。妊娠期间检测凝血4项指标的变化对预防血栓形成并及时进行抗凝治疗有着关键的作用。     

凝血酶原时间ISI/INR系统测定中的一些问题及改进意见

目的对凝血酶原时间(PT)测定ISI/INR系统出现的一些问题提出相应的改进建议。方法对上海市12家医院在用的仪器和匹配的PT试剂,对日常使用的正常血浆平均凝血酶原时间(MNPT)作调研实测,将结果进行分析;调查试剂的仪器特定(spec ific)国际敏感度指数(ISI)值与世界卫生组织(WHO)的手工法ISI定标值之间的差异;用2种已知国际标准化比值(INR)的异常参比血浆代替WHO的ISI系统作质控并行比较。结果12家中有4家日常使用的平均正常凝血酶原时间(MNPT)明显偏离实测值,分别为0.8、0.9、1.0和1.8 s。用WHO CRM149R参比,用手工法标定的凝血活酶和109 mmol枸橼酸钠抗凝的不同PT值血标本,在Sysm ex1500型、C.2000型仪器上测定试剂的仪器特定ISI,其结果比手工法分别减少4.1%和4.7%,但采用HEPES-枸橼酸钠抗凝剂标本时,2种型号仪器的特定ISI比手工法分别减少16.7%及7.7%。用已知INR异常参比血浆,国产品与进口品对照的结果良好。结论受调研12家中,有4家血凝分析仪器调研时实测的MNPT明显偏离日常使用值。有几家医院试剂的仪器特定ISI值也存在问题,建议纠正。用已知INR异常参比血浆代替WHO手工法标定凝血活酶ISI法作质控,使用简便,又不需MNPT参数,值得推广。     

PLT、PT、APTT、Fib临床检测的重要性

血小板(PLT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和纤维蛋白原(Fib)能够很好地反映出血时间(RT)和凝血时间(CT)，目前，由于BT和CT的测定受实验影响因素较多，较难反映血小板质和量的改变及内源性凝血系统和血管功能的情况，故已被PLT、PT、APTT、Fib的测定所取代。PLT、PT、APTT、Fib的检测能准确测定PLT的数量和反映外源性凝     

棕色隐士蛛所致的血管内溶血[英]／Blackll DP／／Transfusion

一位7岁女孩因胸部-痛性丘疹被痛醒，丘疹的外形象是被蜘蛛叮咬所致。患儿的血比积为11％，12小时前在另一家医院时为40％，外周血涂片见大多数的红细胞为球形红细胞，直接抗球蛋白试验阴性，凝血酶原时间和部分促凝血酶原时间延长，由于DIC和严重的血管内溶血(图1试管1)。纤维蛋白降解产物升高，胆红素升高(总13．4mg／dl；直接10．6mg／d1)。     

64例重症肝炎死亡患者凝血酶原时间、前白蛋白、胆固醇、胆碱脂酶观察的临床意义

慢性重症肝炎因其病情危重、死亡率高而一直受到临床医生的重视。如何判断预后、判断生存概率、尽力提高生存率是临床医生为之努力的目标。本文选取了本院 1999年 1月至 2 0 0 1年 2月间死亡的 64例重症肝炎 (绝大多数为慢性重症肝炎 )病例 ,分析其凝血酶原时间 (PT)、前白蛋白 (PALB)、胆固醇(CHO)、胆碱脂酶 (BUCHE)的情况 ,以助病情严重程度的预测。1　资料与方法1 1　一般资料 :病例资料均来自 1999年 1月～ 2 0 0 1年 2月间的住院病例。诊断重症肝炎死亡共 64例 ,其中慢性重症肝炎 5 8例 ,亚急性重症肝炎 6例 ;5 6例为乙肝 ,乙戊…