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101.
目的探讨京尼平对脂多糖(LPS)介导的血管通透性增加的影响及可能机制。方法体外实验:将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为4组,对照组仅接受0.1%的二甲基亚砜(DMSO)处理24.5 h(DMSO);模型组接受同等浓度DMSO预处理30 min后与500 ng/ml LPS共孵育24 h(DMSO+LPS);治疗组接受京尼平50μmol预处理30 min后与500 ng/ml LPS共孵育(京尼平+LPS);抑制剂组接受10μmol EX527及京尼平50μmol预处理30 min后与500 ng/ml LPS共孵育(京尼平+EX527+LPS)。检测各组细胞内皮通透性Pa值(Transwell法)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性(酶标仪检测荧光强度)、Sirtuin-1蛋白(SIRT1)表达(Western blotting)、线粒体膜电位变化(JC-1探针法)及细胞凋亡情况(TUNEL染色法)。体内实验:另将雌性大鼠24只按随机数表法分为4组,对照组大鼠注射0.5 ml DMSO 30 min后注射生理盐水0.5 ml(DMSO+生理盐水);模型组大鼠注射0.5 ml DMSO 30 min后注射LPS 10 mg/kg(DMSO+LPS);治疗组大鼠注射京尼平5 mg/kg 30 min后注射LPS 10 mg/kg(京尼平+LPS);抑制剂组大鼠接受5 mg/kg京尼平及5 mg/kg EX527 30 min后注射LPS 10 mg/kg(京尼平+EX527+LPS)。生理盐水或LPS注射60 min后检测大鼠血管通透性ΔI(FITC-白蛋白荧光法)及SIRT1表达(Western blotting)。应用SPSS 20.0软件进行统计分析。根据数据类型,组间比较采用单因素方差分析、LSD两两比较或Tamhane′s T2检验;组内比较采用单因素重复测量的方差分析。结果体外实验:与对照组[Pa:1.00±0.04;caspase-3活性:100.0±4.4;JC-1绿色/红色荧光比例:(100.0±4.8)%;细胞凋亡率:(2.3±1.4)%;SIRT1:(100.0±8.9)%]比较,模型组[1.68±0.09、216.0±23.5、(343.0±28.3)%、(40.8±8.9)%、(61.0±8.5)%],治疗组[1.35±0.07、165.0±15.0、(220.0±13.3)%、(28.2±6.6)%、(86.7±7.6)%]及抑制剂组[1.60±0.10、202.0±16.5、(309.0±18.5)%、(38.0±9.5)%、(64.3±4.8)%]细胞Pa值、caspase-3活性、JC-1绿色/红色荧光比例及细胞凋亡率显著增加,SIRT1水平显著降低;与模型组比较,治疗组Pa、caspase-3、绿色/红色荧光比例及细胞凋亡率显著下降,SIRT1表达显著升高;与治疗组比较,抑制剂组Pa、caspase-3、JC-1绿色/红色荧光比例及细胞凋亡率显著增加,SIRT1表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。体内实验:模型组、治疗组及抑制剂组大鼠在LPS注射30 min及60 min后,与处理前及对照组比较血压明显下降(P0.05),但3组大鼠间血压比较差异无统计学意义(P0.05)。与对照组[SIRT1:(100.0±4.0)%,ΔI:(0.12±0.03)]比较,模型组[(49.3±8.3)%、0.54±0.07],治疗组[(87.3±4.7)%、0.32±0.05]及抑制剂组[(55.3±4.9)%、0.53±0.06]SIRT1表达量显著降低,ΔI显著增加;与模型组比较,治疗组SIRT1表达显著上升,ΔI显著减弱;与治疗组比较,抑制剂组SIRT1表达显著降低,ΔI显著增强,差异均有统计学意义(P0.05)。结论京尼平通过抑制线粒体凋亡信号激活最终抑制LPS介导的血管通透性增加,其作用可能与上调SIRT1有关。 相似文献
102.
目的:对10批不同栀子中栀子苷、京尼平龙胆双糖苷的含量进行测定并比较.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(15:85),流速为1.0 mL· min^-1,柱温为25℃,检测波长为238nm,同时检测2个主要成分(栀子苷、京尼平龙胆双糖苷)的含量.结果:江西早期栀子中京尼平龙胆双糖苷含量较高,四川晚期栀子中栀子苷含量较高.结论:不同产地栀子中两种环烯醚萜类化合物的含量有明显差别,说明栀子果实的生长地点、采摘时间对其中的栀子苷、京尼平龙胆双糖苷含量有较大影响. 相似文献
103.
目的:依据组织工程的原则,首先将pcDNA3.1-血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)165质粒转染至骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells ,BMSCs),然后将其与纳米羟基磷灰(nano-hydroxyapatite,n-HA) /羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMCS)支架材料复合构建组织工程骨,观察该组织工程骨在兔桡骨骨缺损模型处的成骨能力及降解速度。
方法:采用化学共沉淀法制备纳米羟基磷灰石,以京尼平(Genipin)为交联剂,通过粒子沥滤结合冷冻干燥工艺制备纳米羟基磷灰石/羧甲基壳聚糖复合支架材料。采用扫描电镜观察其微观结构;三点弯曲法测试其力学性能;通过细胞形态分析测试其体外细胞毒性;激光共聚焦显微镜观察其荧光性能。根据设计的引物反转录合成VEGF165,pcDNA片段,构建pcDNA3.1-VEGF165质粒。骨髓间充质干细胞取自兔骨髓,培养、传代,采用电转法将 pcDNA3.1- VEGF165转至 BMSCs 然后与 n-HA/CMCS支架材料复合构建组织工程骨;建立动物模型将其植入兔桡侧,通过大体观察,X射线,HE染色及三点弯曲强度评价其成骨能力及降解速度。
结果:京尼平交联的n-HA/CMCS支架材料微观结构、力学性能与天然松质骨相似,可满足支架材料的要求;与戊二醛做交联剂所得支架相比,本研究所得支架生物毒性更小,更利于细胞的吸附与增殖,并且使用京尼平交联是支架材料具有自发荧光特征;成功构建出 pcDNA3.1-VEGFl65质粒,将其转至 BMSCs,并与n-HA/CMCS 复合构建组织工程骨。大体标本观察表明复合材料植入骨缺损处可见骨缺损处愈合良好,植入材料大部分已转化为自体骨组织仅少许未降解。X射线观察显示实验侧可见明显骨痂生成,骨髓腔形成,骨髓腔基本贯通。HE染色结果表明实验组骨缺损愈合,皮质骨形成,皮质主要由编织骨组成,部分由新生的骨单位构成,髓腔再通。
结论: pcDNA3.1-VEGF165转染BMSCs复合n-HA/CMCS支架材料具有生物相容性好、无毒副作用、促进局部微血管形成、加快骨缺损修复的作用,其降解速度与骨生长速度基本匹配;使用京尼平交联的支架不同于其他骨组织工程支架材料,其具有自发荧光特征。通过激光共聚焦显微镜可以清楚地观察到支架和细胞的界面,细胞的粘附特征,以及支架的微结构和降解时微结构特征变化。综上可知本研究所得复合骨是一种潜在的性能优良的骨修复材料。 相似文献
104.
105.
丹栀逍遥散6种有效成分的HPLC测定 总被引:1,自引:0,他引:1
杨永红 《中国实验方剂学杂志》2014,20(16):97-99
目的:建立丹栀逍遥散制剂中有效成分栀子苷、中京尼平苷、芍药内酯苷、甘草甜素、芍药苷以及牡丹酚6种成分的测定分析方法。方法:采用HPLC,Cosmosil 5C18色谱柱,(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.5%磷酸水(15∶85)梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,波长230 nm。结果:根据上述方法可在90 min内成功地分离丹栀逍遥散中栀子苷、京尼平苷、芍药内酯苷、甘草甜素、芍药苷以及牡丹酚6个指标成分,在丹栀逍遥散中各成分质量分数为栀子苷1.203 mg·g-1,京尼平苷1.960 mg·g-1,芍药内酯苷6.720 mg·g-1,甘草甜素0.157 mg·g-1,芍药苷0.012 mg·g-1,牡丹酚0.127 mg·g-1。结论:该方法可用于丹栀逍遥散中栀子苷、京尼平苷、芍药内酯苷、甘草甜素、芍药苷以及牡丹酚的测定,操作简单、结果准确、回收率高、重复性好,可用于丹栀逍遥散及其相关制剂的质量控制。 相似文献
106.
目的 建立不同产地车前子药材的高效液相色谱指纹图谱并测定京尼平苷酸和毛蕊花糖苷2种指标成分的量。方法 Zorbax sbaq-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.5%的醋酸水溶液,体积流量1.0 mL/min,检测波长254 nm,采用梯度洗脱,建立车前子HPLC指纹图谱。结果 建立了车前子的指纹图谱,确立13个共有峰,京尼平苷酸和毛蕊花糖苷质量分数均值为0.794 3%和0.664 2%。结论 本研究建立的指纹图谱与指标成分测定相结合分析方法快速,可用于评价车前子的质量,并为下一步建立车前子配方颗粒的质量控制方法提供依据。 相似文献
107.
不同产地初加工方式处理杜仲叶的HPLC指纹图谱研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 对不同产地初加工方式处理杜仲叶进行HPLC指纹图谱的比较研究,阐明不同初加工方式对杜仲叶化学成分的影响,以期筛选出适合杜仲叶的产地初加工方式.方法 对所采集的杜仲鲜叶以不同的产地初加工方式进行加工处理,并采用HPLC法,建立用以评价初加工方式优劣的指纹图谱体系.色谱条件:以Promosil C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,扫描波长200~400 nm,检测波长208 nm,柱温25℃,体积流量0.8 mL/min.结果 系统研究了杜仲叶的不同产地初加工方式,并建立了评价其优劣的杜仲叶HPLC指纹图谱,确定了22个主要共有峰,但是各共有峰峰面积相差较大,绿原酸、京尼平苷酸等主要有效成分的量有明显差异.结论 建立的HPLC指纹图谱分析法可同时用于有效成分的定量测定,该方法重复性好、可操作性强,可较全面地反映不同产地初加工方式处理的杜仲叶间的差异. 相似文献
108.
目的考察京尼平苷(Gen)对胰腺β细胞增殖的影响及其细胞信号转导机制。方法将INS-1细胞(一种胰腺β细胞)用Gen处理一定时间之后,用MTT方法测定活细胞的数量,用BrdU标记的方法分析细胞增殖的情况,Western印迹分析Gen对于细胞增殖相关的Akt和FoxO1磷酸化的影响。结果Gen处理INS-1细胞可将活细胞数量提高45%(P〈0.01),并且BrdU标记的阳性细胞数量明显增加(P〈0.01)。另外,Gen还能显著上调INS-1细胞中Akt308丝氨酸位点和叉头转录因子FoxO1的磷酸化(P〈0.01),而且这种作用可被PI3K的抑制剂LY294002阻断。结论Gen能够促进胰腺β细胞增殖,而且这种作用可能与其激活PI3K激酶途径、增强FoxO1的磷酸化有关。 相似文献
109.
栀子环烯醚萜类通过犬血脑屏障后成分的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:通过对栀子环烯醚萜类进入脑脊液的移行成分分析,阐明栀子治疗中枢神经系统疾病潜在的活性成分。方法:给予犬静脉注射栀子环烯醚萜类成分,并采集3个不同时间点的脑脊液,通过液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术检测并鉴定脑脊液中的栀子环烯醚萜类成分,通过MS和核磁共振(NMR)检测余下的栀子环烯醚萜成分。结果:在脑脊液中存在3种栀子环烯醚萜类成分。利用LC-MS分析确认其中1种成分为栀子苷;而采用MS和NMR数据确证的其他2种栀子环烯醚萜类成分分别为去乙酰基车叶草苷酸甲酯和京尼平-β-D-龙胆双糖苷。结论:栀子环烯醚萜类成分中栀子苷、去乙酰基车叶草苷酸甲酯和京尼平-β-D-龙胆双糖苷能够通过血脑屏障进入脑脊液,其透过的机制和药理作用还有待进一步研究。 相似文献
110.
目的 对京尼平(genipin)的结构进行改造以阐明其药效结构。方法 以京尼平为原料,通过Swern 反应和选择性还原反应合成目标化合物,其结构经现代波谱方法鉴定。结果与结论 合成了3 个京尼平衍生物,单步收率在 77%~90%;3 个化合物的结构均经 1H-NMR 和13C-NMR 和 MS 谱确证。 相似文献