HYPOXIC STRESS,HEPATOCYTES AND CACO-2 VIABILITY AND SUSCEPTIBILITY TO Shigella flexneri INVASION

SUMMARY

Inflammation due to Shigella flexneri can cause damage to the colonic mucosa and cell death by necrosis and apoptosis. This bacteria can reach the bloodstream in this way, and the liver through portal veins. Hypoxia is a condition present in many human diseases, and it may induce bacterial translocation from intestinal lumen. We studied the ability of S. flexneri to invade rat hepatocytes and Caco-2 cells both in normoxic and hypoxic microenvironments, as well as morphological and physiological alterations in these cells after infection under hypoxia. We used the primary culture of rat hepatocytes as a model of study. We analyzed the following parameters in normoxic and hypoxic conditions: morphology, cell viability, bacterial recovery and lactate dehydrogenase (LDH) released. The results showed that there were fewer bacteria within the Caco-2 cells than in hepatocytes in normoxic and hypoxic conditions. We observed that the higher the multiplicity of infection (MOI) the greater the bacterial recovery in hepatocytes. The hypoxic condition decreased the bacterial recovery in hepatocytes. The cytotoxicity evaluated by LDH released by cells was significantly higher in cells submitted to hypoxia than normoxia. Caco-2 cells in normoxia released 63% more LDH than hepatocytes. LDH increased 164% when hepatocytes were submitted to hypoxia and just 21% when Caco-2 cells were in the same condition. The apoptosis evaluated by Tunel was significantly higher in cells submitted to hypoxia than normoxia. When comparing hypoxic cells, we obtained more apoptotic hepatocytes than apoptotic Caco-2 cells. Concluding our results contribute to a better knowledge of interactions between studied cells and Shigella flexneri. These data may be useful in the future to define strategies to combat this virulent pathogen.     

弗氏志贺菌2a 2457T株蛋白复合体BN/SDS-PAGE电泳方法的建立

目的建立分离弗氏志贺菌2a2457T株胞内可溶性复合物的BN/SDS-PAGE电泳方法 ,并优化分离条件。方法分别比较了不同配胶方式、配胶长度以及胶条平衡方法。结果成功建立了分离弗氏志贺菌2a2457T株胞内可溶性复合物的方法。结论本实验所建立及优化的方法 ,可以有效地分离蛋白复合体,为进一步研究志贺菌属蛋白复合体奠定了基础,并对以后的实验具有一定的参考价值。     

志贺菌261株菌型分布及耐药分析

目的了解上海市闵行区志贺菌菌型分布及药物敏感特点,为痢疾防治提供科学依据。方法将2007—2009年送检的肠道腹泻病人中分离出的志贺菌进行菌型分型,采用K-B法进行药物敏感试验。结果 2007—2009年间共检出261株志贺菌,主要为福氏志贺菌和宋氏志贺菌。其中福氏志贺菌190株(72.80%),宋氏志贺菌71株(27.20%)。190株福氏志贺菌中有10个血清型(F1 a14株,F2 a100株,F2b13株,F4 a4株,F4 c38株,FX变种7株,FY变种11株,F4b、F5 a、F6型各1株)。261株志贺菌对复方新诺明、氨苄西林、四环素、利福平、萘啶酸的耐药率分别为87.36%、88.12%、86.97%、81.23%、96.93%。结论该区志贺菌的耐药情况严重,且多重耐药,所以应加强耐药性监测和防治。     

余姚市福氏1c志贺菌感染监测结果分析

目的了解浙江省余姚市感染性腹泻病人中首次发现的福氏1c志贺菌感染情况及对抗生素的敏感情况,为制订预防措施和临床治疗提供参考依据。方法采集感染性腹泻病人的大便或肛试标本,依据GB/T 4789.5-2003和WS 287-2008进行增菌、分离、生化鉴定、血清分型,药敏试验依据WS/T 125-1999。结果 440份感染性腹泻病人粪便中检出志贺菌22株,检出率为5.0%,福氏1c志贺菌检出率最高2.5%,占50.00%。药敏试验:11株福氏1c志贺菌多重耐药,对头孢西丁、头孢他啶、头孢噻肟、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、亚胺培南的敏感率达100%。头孢曲松、诺氟沙星、头孢哌酮的敏感率分别为81.82%、72.28、81.82%,对其余9种抗生素完全耐药。结论福氏1c志贺菌是余姚市腹泻病人首次流行的菌株,多重耐药,氨基糖苷类和头孢西丁、头孢他啶、头孢噻肟可以作为福氏1c腹泻病人的首选药。     

河南省痢疾感染特点及病原特性研究

〔目的〕了解志贺痢疾杆菌流行菌型变异及其生物学特性 ;〔方法〕对河南省监测点 2 0 0 1、2 0 0 2年分离的 2 14株痢疾杆菌应用血清学、生化学、药物敏感等试验进行系统的鉴定 ;〔结果〕 2 14株痢疾杆菌优势流行菌型由原来的福氏志贺 2a正逐渐向福氏 4、4c、1a、5b转变 ;2 14株菌均对头孢唑啉、诺氟沙星、多粘菌素B 10 0 %敏感 ,对头孢噻肟、头孢他啶、呋喃妥因、环丙沙星敏感率在 97%以上 ;对四环素、萘啶酸耐药高达 92 %以上。〔结论〕农村近两年痢疾感染的优势菌型仍为福氏志贺菌 ,福氏 1a、4c、4及 5b菌型的感染率呈逐年上升的趋势[2 - 3] ;药物敏感测试结果为临床合理用药提供了确切依据。     

志贺菌敏感株与诱导耐多药株蛋白质组学分析

目的对志贺菌敏感株与诱导耐多药株全菌蛋白进行蛋白质组学比较，寻找细菌耐多药相关蛋白。方法采用4类抗生素的次抑菌浓度，对临床分离鉴定的志贺菌敏感株进行诱导耐多药试验；对志贺菌敏感株及诱导耐多药株全菌蛋白进行双向电泳；电泳图谱采用ImageMaster2DPlatinum软件分析；差异表达蛋白进行基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MOLDITOF-TOF质谱）分析。结果成功获得志贺菌诱导耐多药株，在志贺菌敏感株与耐多药株全菌蛋白质图谱中分别检测出（946±37）个和（1096±189）个蛋白质斑点；共发现48个差异表达的蛋白点，其中5个质谱鉴定为ABC转运蛋白、谷胺酰转肽酶、天冬氨酸氨甲酰基转移酶、翻译延长因子Tu、单链DNA结合蛋白；其中前3个蛋白中在耐多药株中表达量增强，后2个减弱。结论5个耐多药相关蛋白中在细胞代谢中起重要作用的酶类表达量上调；ABC转运蛋白在志贺菌诱导耐多药机制中起重要作用。     

克痢痧对志贺菌耐药性质粒消除作用的实验研究

目的：探讨复方中成药克痢痧对志贺菌R质粒的消除作用，使其重新恢复对抗生素的敏感性。方法：对临床分离的福氏志贺菌耐药性R质粒进行检测．并选用复方中成药克痢痧对该质粒进行体外消除实验，与传统消质粒剂SDS、盐酸小檗碱进行比较。结果：经实验前后R质粒指纹图谱分析，原菌株染色体及7条质粒带清晰可见，经克痢痧作用后的消除子都缺失了相应的质粒带；体外实验克痢痧对志贺菌耐庆大霉素R质粒消除率为4．88％，SDS、盐酸小檗碱和空白对照组R质粒消除率分别为6．79％，3．71％和0．25％；对耐氨苄青霉素R质粒消除率为13．22％，SDS、盐酸小檗碱和空白对照组R质粒消除率分别为9.25％．8．96％和0．06％。结论：复方中成药克痢痧对志贺菌R质粒具有较好的消除作用。     

福氏志贺菌耐药性分析

目的研究福氏志贺氏菌耐药性，指导临床用药。方法对2003年3月至2005年8月住院患儿大便培养分离所得46例痢疾杆菌进行菌型分析和药敏试验，并观察平均住院日的变化。结果3年细菌培养检出痢疾杆菌46株，全部为福氏茵，血清型及亚型取代其它型及亚型；药敏试验结果提示痢疾杆菌对多种抗生素耐药性逐年增加，对红霉素、氨苄西林、苯唑青霉素及复方新诺明等几乎完全耐药。急性细菌性痢疾平均住院日有延长趋势，治疗难度增大。结论福氏志贺氏菌是小儿细菌性痢疾的主要的血清型，临床治疗宜根据药敏结果用药。     

消炎抗菌片的抗菌活性及对福氏志贺氏菌的抗菌机制初步探讨

目的:研究武汉大学人民医院院内制剂消炎抗菌片对14种不同菌株的抑菌活性,并初步探讨其对福氏志贺菌(Shigella flexner)的抑菌机制。方法:采用K-B法和液体二倍稀释法,测定消炎抗菌片对14种常见致病菌株的抑菌活性,并以药物敏感性较强且与药物主要临床疗效相关的福氏志贺菌为受试菌,从药物对该细菌生长特性的影响、电导率变化,以及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)谱带,考察给药后菌体变化情况。结果:消炎抗菌片对福氏志贺菌、铜绿假单胞杆菌、藤黄微球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等14个菌种及菌株具有不同程度的抑制作用,总体对革兰阴性菌抑菌效果比革兰阳性菌强;药物作用福氏志贺菌后,菌悬液电导率与对照组相比显著升高,SDS-PAGE结果显示经消炎抗菌片处理的菌体无明显蛋白条带形成。结论:本院院内制剂消炎抗菌片对14种菌株具有不同程度的抗菌活性,能够显著影响福氏志贺菌的细胞膜通透性,且对菌体蛋白具有一定抑制作用。     

福氏和宋内志贺菌的药物敏感度测定

目的了解本地区福氏志贺菌和宋内志贺菌对临床常用抗菌药物的耐药性。方法琼脂稀释法测定2004年5-10月我院肠道门诊分离的31株福氏志贺菌和37株宋内志贺菌对多种抗菌药物的敏感性。结果福氏志贺菌和宋内志贺菌对四环素、复方磺胺甲嗯唑、氨苄西林和氨苄西林-舒巴坦耐药显著，耐药率分别为100％～97．3％、90．3％～94．6％、90．3％～64．9％和67．7％～51．4％；2种细菌对氯霉素和庆大霉素的耐药性差异有显著性；2种细菌对氟喹诺酮类、第三代头孢菌素非常敏感，耐药率为6．5％～0％。结论本地区福氏志贺菌和宋内志贺菌对氟喹诺酮类和第三代头孢菌素非常敏感，对复方磺胺甲喙唑、氨苄西林、四环素等其他多种抗菌药物耐药显著，应加强耐药性监测和防治。