HPLC-TOF/MS分析丹参酒炙前后化学成分的变化

目的:采用高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(HPLC-TOF/MS)分析丹参酒炙前后主要化学成分的变化,为揭示丹参炮制原理及制定丹参饮片的质量标准提供参考。方法:HPLC分离采用Halo~C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.7μm),流动相乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~3 min,0%~10%A;3~8 min,10%~40%A;8~25 min,40%~70%A;25~36 min,70%~100%A),流速0.25 m L·min-1;质谱定性采用飞行时间质谱,ESI离子源,正离子模式下扫描,采用对照品定位、质谱数据、数据库匹配和文献参照对各离子峰进行归属,通过丹参酒炙前后离子峰数目和峰面积的比较,研究其化学成分变化。结果:生丹参和酒丹参中分别推测出中16,14种化合物。丹参酒炙后,紫草酸或丹酚酸H,丹参酮ⅡB色谱峰消失,隐丹参酮、丹参新醌乙、丹参酮ⅡA和丹参新酮的峰面积显著降低,二氢丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅰ的峰面积增加。结论:丹参酒炙后化学成分的种类和含量变化显著,部分丹参酮类和丹酚酸类成分产生质变或量变,推测丹参酒炙后活血祛瘀作用增强与所含成分转化成体内更易吸收的活性成分有关。     

含丹酚酸的丹参酮微乳处方工艺研究

目的：制备丹参多组分复合微乳,优选最佳处方及制备工艺。方法：结合伪三元相图法与单纯形网格法,以微乳粒径、包封率和载药量为评价指标,通过 Design Expert 8.06软件进行试验设计和模型构建,响应面数据分析优化和验证最佳处方。结果：最终优选出的微乳处方为肉豆蔻酸异丙酯∶15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯（solutrol-HS 15）-二乙二醇单乙基醚（transcutol P）（4∶1）∶纯化水为13.3∶31.7∶55.0,此时微乳粒径为12.88±0.57nm,丹参酮IIA包封率为98.00±2.26%,丹参酮IIA和丹酚酸B的载药量分别为5.30±0.03、2.43±0.01mg·g^-1。结论：该法制得的微乳中丹参酮IIA包封率及载药量均较高,粒径较小,为丹参微乳制剂的开发与应用提供科学依据。     

自微乳载药系统(SMEDDS)用于丹参酮的增溶及吸收研究

目的:考察自微乳载药系统(SMEDDS)对丹参酮的增溶和吸收的影响,以指导丹参酮SMEDDS处方的选择。方法:紫外分光光度法测定SMEDDS溶液中丹参总酮的溶解度,采用大鼠在体小肠吸收模型考察丹参酮SMEDDS的吸收。结果:丹参总酮在SMEDDS溶液中的溶解度是水中的10倍,胶束中的2.5倍,且SMEDDS处方中油相(中链甘油三酸酯,MCT)比例增加,溶解度增加;丹参酮SMEDDS和胶束的吸收常数Ka分别为0.479,0.326h-1,t1/2分别为1.44,2.12h,SMEDDS处方中油相(MCT)比例增加,吸收增加。结论:SMEDDS能显著增加丹参酮的溶解度和在大鼠小肠的吸收,且SMEDDS处方中MCT能促进丹参酮的增溶和吸收。     

共研磨法制备吸入用丹酚酸-丹参酮复合微粉及其表征

建立了一种将丹参中的脂溶性和水溶性有效成分共微粉化的方法,制备得到了适用于肺部吸入给药的丹酚酸-丹参酮复合微粉。以湿法球磨粉碎为制备方法,复合微粉1~5μm体积分数为评价指标,采用中心组合实验设计(central composite design,CCD)-效应面法进行工艺优化。通过扫描电镜、激光粒度分布仪、X-射线衍射分析仪等对复合微粉进行质量评价,并测定其流动性和引湿性。结果显示最优制备工艺条件下得到的丹酚酸-丹参酮复合微粉粒径分布均一,D50为2.33μm,1~5μm体积分数为80.82%,休止角为(50.60±1.13)°,临界相对湿度约为77%。共微粉化使药物微粒的粒径显著减小,药物的无定形物稍有增加,对粉体的流动性、吸湿性无显著影响。该研究表明湿法球磨可用于性质差异大的多种成分的共微粉化,制备得到适于吸入的丹酚酸-丹参酮复合微粉,为进一步吸入粉雾剂的制备提供基础。     

酸碱预处理后酶解提升丹参药渣中丹参酮类成分的提取效率研究

通过酸碱预处理丹参药渣,并利用纤维素酶降解,比较不同处理方法对丹参酮类成分提取效率的影响,以期为丹参药渣中丹参酮类成分的开发利用提供科学依据。结果表明,未经酸碱预处理的丹参药渣中,当酶C浓度为6 U·m L~(-1),酶解4.5 d时可使大部分纤维素降解,所得葡萄糖质量分数最高为59.74 mg·g~(-1)。对不同预处理方法评价,发现碱预处理-纤维素酶C降解后的效果最佳,葡萄糖质量分数达119.50 mg·g~(-1),相同浓度纤维素酶C酶解的酸预处理药渣次之。丹参酮的提取量经酶液降解后,与常规非酶法处理相比,丹参酮ⅡA提取量提高了82.54%,质量分数达2.451 mg·g~(-1);丹参酮Ⅰ提取量提高了81.82%,质量分数达2.373 mg·g~(-1);隐丹参酮提取量提高了64.4%,质量分数达1.080 mg·g~(-1);二氢丹参酮Ⅰ提取量提高了61.3%,质量分数达0.601 2 mg·g~(-1)。通过酸碱预处理与纤维素酶降解相结合的方法可有效提高丹参药渣中丹参酮类成分的提取效率,该方法具有可操作性和实用性,有利于提升丹参药渣中丹参酮类资源性化学物质的利用效率。     

丹酚酸/丹参酮配伍对凝血酶诱导HUVEC细胞炎症因子的影响

目的观察丹酚酸/丹参酮配伍对凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞炎症因子P-selection、E-selection的影响。方法培养HUVEC细胞,设空白对照组、凝血酶损伤模型组、丹酚酸/丹参酮配伍50μg/L组、丹酚酸/丹参酮配伍100μg/L组。采用ELISA法检测细胞上清液中P-selection、E-selection含量。结果丹酚酸/丹参酮配伍50μg/L、100μg/L均可显著降低经凝血酶诱导而升高的P-selection含量(P<0.01),丹酚酸/丹参酮配伍100μg/L可显著降低经凝血酶诱导而升高的E-selection含量(P<0.05)。结论丹酚酸/丹参酮配伍可通过抑制炎症因子P-selection、E-selection表达而抗凝血酶诱导的HUVEC炎症损伤。     

磷胺霉素处理对丹参毛状根合成丹参酮类化合物的影响

使用萜类物质合成MEP途径中关键酶DXR的有效抑制剂磷胺霉素（100 μmol·L^-1）处理丹参毛状根,在处理后2,4,6,8,10,16,21 d收获毛状根,检测处理组和对照组毛状根中SmDXR基因的mRNA水平以及丹参酮类物质含量的变化情况。结果发现,随着磷胺霉素处理时间延长,丹参毛状根颜色与对照组相比明显变浅;毛状根中SmDXR基因的mRNA水平呈抛物线型变化,在处理后第6天达到最高值,随后逐渐降低;检测了4种丹参酮类化合物含量,其中丹参酮Ⅰ的含量变化不显著,而二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅱ_A的含量随处理时间延长而逐渐降低,第21天时对照组毛状根中总丹参酮含量是处理组的5.63倍。上述结果表明,丹参DXR基因对于MEP途径丹参酮类化合物的积累具有重要作用,抑制SmDXR基因表达将对该途径次生代谢产物积累产生显著影响。     

Bioactive tanshinones in Salvia miltiorrhiza inhibit the growth of prostate cancer cells in vitro and in mice

Searching for efficacious and safe agents for the chemoprevention and therapy of prostate cancer has become the top priority of research. The objective of this study was to determine the effects of a group of tanshinones from a Chinese herb Salvia Miltiorrhiza, cryptotanshinone (CT), tanshinone IIA (T2A) and tanshinone I (T1) on prostate cancer. The in vitro studies showed that these tanshinones inhibited the growth of human prostate cancer cell lines in a dose‐dependent manner via cell cycle arrest and apoptosis induction. Among three compounds, T1 had the most potent activity with IC₅₀s around 3–6 μM. On the other hand, tanshinones had much less adverse effects on the growth of normal prostate epithelial cells. The epigenetic pathway focused array assay identified Aurora A kinase as a possible target of tanshinone actions. The expression of Aurora A was overexpressed in prostate cancer cell lines. Moreover, knockdown of Aurora A in prostate cancer cells significantly decreased cell growth. Tanshinones significantly downregulated the Aurora A expression, suggesting Aurora A may be a functional target of tanshinones. Tanshinones, especially T1, also showed potent anti‐angiogenesis activity in vitro and in vivo. Furthermore, T1 inhibited the growth of DU145 prostate tumor in mice associated with induction of apoptosis, decrease of proliferation, inhibition of angiogenesis and downregulation of Aurora A, whereas it did not alter food intake or body weight. Our results support that T1 may be an efficacious and safe chemopreventive or therapeutic agent against prostate cancer progression.     

甘肃丹参脂溶性成分的提取与纯化工艺研究

目的：研究从甘肃丹参中提取和纯化脂溶性成分的最佳工艺条件。方法：采用L9（3^4）正交设计,以总丹参酮、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、二氢丹参酮和丹参酮Ⅰ的提取率为考察指标,优选最佳提取工艺;以总丹参酮的含量为考察指标,优选纯化总丹参酮粗提物的工艺条件。结果：总丹参酮的最佳提取条件为加8倍量的90％乙醇,回流提取3次,每次提取1h;最佳纯化工艺条件为加15倍量的5％碳酸钠溶液,洗涤5次。结论：纯化工艺条件能使总丹参酮粗提物的含量由20．31％上升至59．87％,达到了新药申报规定的要求。该提取和纯化总丹参酮的最佳工艺条件简便易行,适用于工业化生产。