基于指纹图谱和网络药理学的江枳壳质量标志物预测分析

目的 基于指纹图谱和网络药理学方法分析预测道地药材江枳壳中潜在的质量标志物（Q-Marker）。方法 对18批江枳壳药材分别建立超高效液相色谱（UPLC）、气相色谱-质谱（GC-MS）指纹图谱，并结合化学计量学方法，筛选出Q-Marker候选成分。运用网络药理学构建“核心成分-靶点-通路”网络，预测江枳壳Q-Marker及核心靶点，再用分子对接方法验证江枳壳Q-Marker生物活性。结果 18批江枳壳药材运用UPLC、GC-MS指纹图谱结合化学计量学分析，共筛选出9个Q-Marker候选成分，通过网络药理学分析，预测川陈皮素、新橙皮苷、橙皮内酯、柚皮苷、D-柠檬烯为江枳壳Q-Marker，作用于核心靶点转化蛋白p21/H-Ras-1（HRAS）、肿瘤蛋白抗原p53（TP53）、丝裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）、转录因子AP-1（JUN）、糖原合成酶激酶-3β（GSK3B）、肿瘤坏死因子（TNF）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑因子1A（CDKN1A）、环磷酸腺苷（cAMP）依赖性蛋白激酶催化亚基α（PRKACA）、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）、环腺苷酸反应元件结合蛋白1（CREB1），发挥胃肠动力、抗抑郁、抗炎、抗肿瘤等作用；分子对接表明川陈皮素、新橙皮苷、橙皮内酯、柚皮苷、D-柠檬烯与筛选出的10个核心靶点有较好的结合能力，体现了江枳壳Q-Marker较好的生物活性。结论 从挥发性和非挥发性成分两方面着手全面预测江枳壳Q-Marker，为江枳壳药材质量的控制和进一步研究其药效相关机制提供参考。     

川陈皮素抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭能力的机制探讨

目的:观察川陈皮素（nobiletin，Nob）对胃癌SGC-7901细胞侵袭能力的影响，并探讨其可能的作用机制。方法:不同浓度的川陈皮素（0、30、60、120 mg/L）体外处理SGC-7901细胞。CCK8法检测细胞增殖能力；Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变；免疫印迹法检测细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物（E-cadherin、Vimentin、Fibronectin）蛋白、MMP-9、STAT3、p-STAT3蛋白表达的改变。结果:CCK8和Transwell小室法检测结果显示，与对照组（0 mg/L）比较，川陈皮素可显著抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭能力；免疫印迹结果显示，随着川陈皮素浓度的增加，SGC-7901细胞E-cadherin蛋白表达逐渐上调，同时Vimentin、Fibronectin蛋白的表达量降低，MMP-9蛋白表达下调,STAT3总量未发生变化，但p-STAT3表达逐渐降低。结论:川陈皮素可降低胃癌SGC-7901细胞侵袭能力，其机制可能为通过抑制STAT3通路，继而抑制EMT。     

川陈皮素温敏型鼻用原位凝胶体外释药行为研究

分别采用扩散池法、无膜溶出法以及渗析池法考察川陈皮素温敏型鼻用原位凝胶的体外释药特性与机制.结果表明,川陈皮素原位凝胶通过扩散释放的药物量较少,150 min仅为1.4%;通过无膜溶出法药物释放完全,120 min时药物基本释放完全,且药物的释放量与溶蚀量具有良好的相关性.渗析池法药物的释放量较扩散池法多,120min可释放8%的药物.因此,本实验室研制的川陈皮素温敏型鼻用原位凝胶可能主要通过溶蚀方式释药.     

川陈皮素自组装前体脂质体的制备及其大鼠体内药代动力学研究

本文研制川陈皮素自组装前体脂质体, 并以混悬剂为对照考察其经大鼠灌胃给药后的药代动力学行为。采用一种新型前体脂质体法制备川陈皮素自组装前体脂质体, 考察其水合后粒径、包封率和稳定性等理化性质; 大鼠分别灌胃给予川陈皮素混悬剂和水合后的脂质体, 以尼莫地平为内标, 采用HPLC法测定血浆中药物浓度, 用Kinatica 4.4程序计算药代动力学参数。制得的川陈皮素前体脂质体经水合后包封率可达80%以上,平均粒径为212.1 nm, 稳定性好; 药代动力学研究显示,与混悬剂相比川陈皮素脂质体在体内吸收较快, 相对生物利用度为264.3%, MRT增加。结果表明, 川陈皮素自组装前体脂质体制备工艺简单可行; 川陈皮素制成自组装前体脂质体后, 大鼠口服吸收显著增加。     

HPLC 法同时测定陈香露白露片中7个成分的含量

目的 构建同步测定陈香露白露片中甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、木香烃内酯和去氢木香内酯含量的HPLC法。方法 采用ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱,流速1.0 ml/min,柱温35 ℃,检测波长237 nm（检测甘草苷、甘草酸铵、木香烃内酯、去氢木香内酯）、283 nm（检测橙皮苷）、330 nm（检测川陈皮素、橘皮素）,进样量10 μl,对采集的16批次样品进行7种成分的含量检测。结果 甘草苷、橙皮苷、甘草酸铵、川陈皮素、橘皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯的线性范围分别为1.110~55.72（r=0.9992）、22.15~1108（r=0.9995）、6.140~307.2（r=0.9995）、1.130~56.25（r=0.9997）、0.3700~18.75（r=0.9982）、0.5200~26.01（r=0.9991）、1.180~58.95（r=0.9999）μg/ml。回收率（n=9）分别为98.71%、98.12%、98.44%、98.22%、99.17%、99.18%、97.93%,RSD分别为0.16%、0.67%、0.57 %、0.62%、0.48%、0.56%、0.58%。16批样品中甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯的含量分别为0.1250~1.174、2.354~7.426、1.822~27.21、0.0370~1.399、0.0723~0.4433、0.0140~0.1990、0.2207~1.407 mg/g。结论 该方法准确性高、重复性好、耐用性强,可用于陈香露白露片的质量控制和评价。     

柑橘类黄酮成分的同步HPLC检测

目的建立检测柑橘类黄酮(柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、橙黄酮、川陈皮素)的中药材质量控制用快速HPLC方法.方法用仅含甲醇和水的无盐流动相梯度洗脱,Kromasil反相分析柱(100-5C18-250A,4.6 mm×250 mm,5 μm),结合二级阵列管紫外扫描做峰识别.结果对于要检测的5种柑橘类黄酮均得到满意的分辨率和线性范围,其加样回收率95%～102%;重现性RSD 1.88%～2.93%分析了6种酸橙类柑橘中药材黄酮含量.结论建立了多成分柑橘类黄酮快速HPLC检测方法并可用于LC-MS.     

柑橘黄酮川陈皮素的抗肿瘤作用研究

目的研究橘皮中提取的黄酮化合物川陈皮素的抗肿瘤作用:抑制小鼠移植瘤生长、与化疗药物的协同及抗肿瘤转移作用。方法采用多种肿瘤模型,川陈皮素ig给药。结果川陈皮素8～32mg/kg剂量对小鼠黑色素瘤B16的抑瘤率为42.24%～65.95%;对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率为38.84%～59.09%;对小鼠S180肉瘤的抑瘤率为36.02%～45.98%。川陈皮素与小剂量的紫杉醇、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)和阿霉素(ADR)联合用药时,表现明显的协同效应。川陈皮素对小鼠Lewis肺癌腋皮下接种肺转移的抑制率为33.63%～38.94%;对小鼠Colon26结肠癌腹腔接种腹膜转移的抑制率为37.74%～43.40%。结论川陈皮素具有一定的抗肿瘤生长作用,与临床常用化疗药物有协同作用,并可有效抑制实验性肿瘤转移。     

新型AT_1受体拮抗剂Ⅰb对血管紧张素Ⅱ的拮抗作用

目的:研究新型AT1受体拮抗剂Ⅰb对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的拮抗作用。方法:采用放射性受体配体分析法、家兔离体主动脉环法以及大鼠静脉输注AngⅡ测定血压变化的方法,评价Ⅰb对AngⅡ的拮抗作用。结果:Ⅰb剂量相关性抑制125I-AngⅡ与血管平滑肌细胞膜AT1受体的结合,IC50为0.96nmol/L;Ⅰb(1×10-8.5,1×10-8,1×10-7.5mol/L)可以使AngⅡ的浓度效应曲线向右移动的同时也使最大效应降低,减活指数pD2′为7.29;预先静脉推注化合物Ⅰb(0.01,0.1,1mg/kg)后,AngⅡ的浓度效应曲线右移,ED50分别为1.6μg/kg,1.9μg/kg和2.7μg/kg。结论:化合物Ⅰb对AngⅡ有显著的拮抗作用。     

川皮苷对小鼠黑色素瘤试验性转移的抑制作用及相关机制

采用小鼠肺高转移黑色素瘤细胞K111尾静脉注射肺转移模型，研究川皮苷的抗肿瘤转移作用，并在体外试验中研究其对K111细胞分泌明胶酶MMP2和MMP9的影响。结果表明，川皮苷对试验性小鼠黑色素瘤肺转移有较好的抑制作用，剂量为32mg／kg时抑制率47．3％。明胶酶谱法检测结果表明，川皮苷125和62．51μmol／L对MMP2和MMP9的分泌均表现抑制作用，表达率为对照组的30％和50％。定量PCR试验表明，用125μmol／L川皮苷处理的K111细胞，MMP2和MMP9的mRNA水平均低于对照组。提示川皮苷可在转录水平抑制MMP2和MMP9的表达，并对小鼠试验性转移模型有抑制作用。     

Evaluation of the effects of swainsonine, captopril, tangeretin and nobiletin on the biological behaviour of brain tumour cells in vitro

Although intrinsic tumours of the brain seldom metastasize to distant sites, their diffuse, infiltrative-invasive growth within the brain generally precludes successful surgical and adjuvant therapy. Hence, attention has now focused on novel therapeutic approaches to combat brain tumours that include the use of anti-invasive and anti-proliferative agents. The effect of four anti-invasive agents, swainsonine (a locoweed alkaloid), captopril (an anti-hypertensive drug), tangeretin and nobiletin (both citrus flavonoids), were investigated on various parameters of brain tumour invasion such as matrix metalloproteinase (MMP) secretion, migration, invasion and adhesion. A standard cytotoxicity assay was used to optimize working concentrations of the drugs on seven human brain tumour-derived cell lines of various histological type and grade of malignancy. A qualitative assessment by gelatin zymography revealed that the effect of these agents varied between the seven cell lines such that the low grade pilocytic astrocytoma was unaffected by three of the agents. In contrast, downregulation of the two gelatinases, MMP-2 and MMP-9 was seen in the grade 3 astrocytoma irrespective of which agent was used. Generally, swainsonine was the least effective whereas the citrus flavonoids, particularly nobiletin, showed the greatest downregulation of secretion of the MMPs. Furthermore, captopril and nobiletin were most efficient at inhibiting invasion, migration and adhesion in four representative cell lines (an ependymoma, a grade II oligoastrocytoma, an anaplastic astrocytoma and a glioblastoma multiforme). Yet again, the effects of the four agents varied between the four cell lines. Nobiletin was, nevertheless, the most effective agent used in these assays. In conclusion, the differential effects seen on the various parameters studied by these putative anti-invasive agents may be the result of interference with MMPs and other mechanisms underlying the invasive phenotype. From these pilot studies, it is possible that these agents, especially the citrus flavonoids, could be of future therapeutic value. However, further work is needed to validate this in a larger study.