Automated immunoturbidimetric assay of serum apolipoprotein A-II using the COBAS-BIO™ centrifugal analyser: Influence of hyperlipoproteinemia

A quantitative automated immunoturbidimetric procedure for the analysis of apolipoprotein A-II (Apo A-II) in human serum is described. Dilution of antibody with a 5% solution of PEG 6000 enhanced the quantification. The within- and between-assay coefficients of variation were less than 5%. Results correlated well with those obtained by classic electroimmunodiffusion and immunonephelometry. No extraction of samples with organic solvent was necessary, whatever the triglyceride concentration. Large lipoproteins such as VLDL and immunocomplexes did not affect the method, nor was there interference from icteric or hemolyzed serum or from serum with excessive hyperlipemia. Physiological values of Apo A-II were determined in a normal population. Concentrations were found to be age-dependent, and higher in women than in men. The procedure is very suitable for the rapid, precise, reproducible and inexpensive assay of Apo A-II.     

西安地区儿童血清胱抑素C浓度参考范围调查

目的调查西安市儿童血清胱抑素C(Cys C)浓度的参考范围。方法应用微粒子增强透射免疫比浊法测定300例健康受检者血清Cys C浓度;并对检测结果进行统计学分析。结果 300例健康儿童的血清胱抑素浓度与性别无关。0～1岁年龄段血清Cys C的浓度为0.46～1.10mg/L(95%可信区间),1～16岁年龄段血清CysC的浓度为0.58～1.94mg/L(95%可信区间)。西安地区健康儿童血清Cys C 0～1岁的参考范围是0.46～1.10mg/L;1～16岁Cys C的参考范围是0.58～1.94mg/L。结论各实验有必要建立自己的参考范围。     

胱抑素C抗体的质量评价及应用分析

目的将日本进口的胱抑素C（Cys C）抗体与某公司制备的兔抗Cys C抗体、羊抗Cys C抗体进行质量检测,初步应用试验评估这3种抗体能否用于定量检测血清Cys C （胶体金免疫比浊法）试剂盒的研发。方法分别用紫外分光光度法、二喹啉甲酸（BCA ）法检测3种Cys C抗体浓度;以聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度;采用酶联免疫吸附法（ELISA）测效价;然后将这3种Cys C抗体分别标记胶体金颗粒,以胶体金免疫比浊法测定血清Cys C ,比较其初步应用性。结果日本进口Cys C抗体浓度高达15．0～16．0 mg/mL ,某公司自制兔抗Cys C抗体、羊抗Cys C抗体浓度范围在3．0～4．0 mg/mL之间;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示3种抗体纯度相近,结果为85％。其抗体效价大于或等于1∶104;胶体金免疫比浊法测定Cys C的临床比对结果证实公司自制抗体与日本进口Cys C抗体有较好的可比性。结论某公司的兔抗Cys C、羊抗Cys C抗体与日本进口Cys C抗体虽浓度不同,但均具有高纯度和高效价的特点,可用于定量检测血清Cys C（胶体金免疫比浊法）试剂盒的研发。     

胶乳增强免疫比浊法测定胃蛋白酶原Ⅱ的不精密度和线性观察

目的对胶乳增强免疫比浊法测定胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)进行初步方法学评价,为临床应用提供依据。方法依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP5-A及EP10-A2文件提供的方法,对胶乳增强免疫比浊法测定PGⅡ进行初步的评价。结果 PGⅡ的低值样本批内变异系数(CV)为2.05%、批间CV为1.60%、日间CV为3.92%、总CV为4.70%;高值样本批内CV为1.70%、批间CV为1.21%、日间CV为3.79%、总CV为4.32%。当PGⅡ浓度分别为9.6、24.7、39.8μg/L时,相对偏倚分别为-0.18、-0.47、-0.39μg/L,总不精密度分别为4.98%、2.39%、2.71%。测试间的携带污染差异无统计学意义(P>0.05)。线性回归方程为Y=0.975 7X-0.016 8,决定系数(R2)=0.998 7。结论胶乳增强免疫比浊法测定PGⅡ的精密度符合EP5-A文件标准,具有良好的重复性。线性、偏倚、总不精密度及抗交叉污染能力均达到EP10-A2文件标准,符合临床应用要求,适用于实验室常规测定。     

人C-反应蛋白的分离纯化及初步应用

目的：从临床血清样本分离纯化获得人C-反应蛋白（CRP）。方法：运用盐析法、DEAE离子交换层析和亲和层析等方法从临床血清样本中分离纯化出CRP,用于免疫山羊制备多克隆抗体,初步建立免疫透射比浊法测定CRP并进行评价。结果：SDS-PAGE结果显示纯化产物出现相对分子质量约为23000的主带,Western Blotting结果显示纯化产物能与CRP单克隆抗体发生特异性结合,证实纯化产物为CRP,与商品CRP有很好的可比性性。以自提CRP制备出效价高、特异性强的多克隆抗体,运用该抗体建立的CRP免疫透射比浊法具有比较好的性能。结论：成功分离纯化出人CRP,可用于进行生产研究。     

定量测定抗链球菌溶血素“O”的检测分析

目的 探究定量测定抗链球菌溶血素“O”的检测效果。方法 选取2016年1月~2017年12月我院儿科收治的130例接受抗链球菌溶血素“O”测定的患儿作为研究对象,采用颗粒增强免疫比浊法检测抗链球菌溶血素“O”,比较不同性别和不同季度儿童抗链球菌溶血素“O”（ASO）检测的阳性率。结果 男性患儿抗链球菌溶血素“O”的阳性率为97.06%,高于女性患儿的29.03%,差异有统计学意义（P＜0.05）;第一季度和第四季度经过检测后抗链球菌溶血素“O”的阳性率分别为94.29%和96.88%,均高于第二季度和第三季度的41.18%和17.24%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 抗链球菌溶血素“O”阳性率与患儿自身性别以及季节可能有关,其中男性患儿以及冬春季节影响更甚。     

3TP法与ELISA法检测梅毒螺旋体抗体的价值对比研究

目的:比较乳胶凝集免疫比浊法( 3TP )与酶联免疫吸附法( ELISA)检测诊断梅毒的临床应用价值. 方法:对80份确诊为梅毒的患者血清与60份确诊梅毒特异性抗体检测阴性体检者血清标本分别采用3TP 法与ELISA法检测,比较两种检测方法检测结果. 结果:ELISA法检测出现3例假阴性、4例假阳性,检测梅毒的敏感性及特异性、阳性预测值分别为95.00%(57/60)、93.33%(56/60)、93.44%(57/61),3TP 法检测出现3例假阳性,未出现假阴性,检测梅毒的敏感性及特异性、阳性预测值分别为100.00%(60/60)、95.00%(57/60)、95.24%(60/63),两组检测方法诊断梅毒的敏感性、特异性及阳性预测值比较差异无统计学意义( P>0.05);梅毒血清标本全部稀释至3TP 法能检出最低的稀释浓度,此浓度下用ELISA法检测有47份标本S/CO在阳性范围内. 结论:3TP 法与ELISA法两种检测方法诊断梅毒的敏感性、特异性均较高,均能用于诊断梅毒血清学筛查,但是3TP 法相对在梅毒螺旋体低浓度时诊断敏感性更高一些,并且具有检测方法方便的优势.     

液相色谱串联质谱技术在载脂蛋白E室间质量评价中的应用

目的探讨液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)在载脂蛋白E(apo E)室间质量评价中的应用。方法分别将5份混合人血清样品冷链运送到76家实验室,用免疫比浊法(ITA)进行单次检测。以同位素标记精氨酸的肽段为内标,对标本进行变性、烷基化和胰蛋白酶酶解处理,液相色谱部分采用SB-C18色谱柱分离,质谱部分采用正离子模式和多反应监测定量。JMP13.0软件分析不同方法分组所对应的相对偏倚。结果对于所有样品,ITA检测apo E的方法组内不精密度在1.7%至20.4%之间。总不精密度在8%左右(s B~s E样品)。5个样品相对偏倚的均值分别是(按照样品浓度由低到高排列):-34.2%、-9.4%、-9.8%、-2.7%和-2.1%。高浓度样品比低浓度样品更接近LC-MS/MS检测结果。结论 LC-MS/MS检测apo E可评价免疫法的准确性,为临床应用提供帮助。     

新诊断的成人非症状性癫痫体液免疫变化及意义

目的：探讨体液免疫在新诊断的成人非症状性癫痫发病机制中的作用。方法采用胶乳增强免疫比浊法测定56例新诊断的成人非症状性癫痫（实验组）和141例正常成人（对照组）血清Ig A、Ig G、Ig M、C3、C4的水平。结果癫痫实验组血清IgA水平[（2.21±1.14）g/L]显著低于正常组[（2.32±0.75）g/L ，F＝9.76，P＜0.01]，而血清IgG、IgM、C3、C4水平在癫痫组及对照组间无显著差异（P＞0.05）。实验组内血清IgA水平按性别、发作类型及病因分类比较亦无显著差异（P＞0.05）。结论低水平血清Ig A可能为成人非症状性癫痫的血生化标志之一，对研究成人非症状性癫痫的发病机制，探索成人非症状性癫痫的免疫治疗途径、研发新药提供了理论基础。     

乳胶增强免疫比浊法测定血清胱抑素C

目的建立乳胶增强免疫比浊测定血清胱抑素C(Cystatin C)的全自动分析方法。方法采用乳胶增强免疫比浊法测定Cystatin C,根据美国临床实验室标准化协会相关文件,对方法进行精密度、线性、准确性等评价及临床初步应用。结果此方法批内CV<4.0%,批间CV<5.0%。抗干扰性强,血红蛋白小于或等于4.0g/L、胆红素小于或等于420μmol/L、类风湿因子小于或等于2 200 U/L、三酰甘油小于或等于10 mmol/L对测定无影响;与进口试剂相比,Y=1.007 5X+0.002 9,r=0.999 5,二者相关性良好。试剂开瓶稳定性良好。结论乳胶增强免疫比浊法测定血清Cystatin C,具有方法简便、快速、灵敏的优点,且结果准确,可用自动分析仪测试,适合临床检验应用。