丹参对耳蜗辐射防护作用的实验研究

为探讨内耳辐射损伤的防治,采用丹参作为保护药物,用相同剂量的６０Ｃｏ γ射线照射丹参防护组和单纯放射组豚鼠耳颞部,２ 周后作形态与机能检查。结果发现：丹参防护组耳蜗机能与结构损害较轻,而单纯放射组耳蜗机能明显受损,血管纹和柯替氏器病变严重;复合动作电位（ＣＡＰ） 反应阈和毛细胞损伤率两组比较差异有显著性（ Ｐ ＜ ０ ．０１） 。表明丹参对内耳辐射损伤有保护作用。     

阳离子脂质体介导BFGF/GFP基因对药物性耳蜗损害的防治作用

目的 探讨阳离子脂质体(天然碱性脂SA)携带碱性成纤维细胞生长因子/绿色荧光蛋白(bFGF/GFP)基因在豚鼠耳蜗中的表达,以及对庆大霉素所致耳蜗损害的防治作用。方法 将36只豚鼠分为3组,预防组右耳园窗注入SA-bFGF/GFP复合物后次日肌肉注射庆大霉素150mg.Kg~(-1).d~(-1)8天,治疗组先用庆大霉素8d后次日右耳给药,对照组单用庆大霉素8d。分别于实验前后及处死前行听觉脑干诱发电位(ABR)测试。荧光显微镜下观察耳蜗GFP的表达;用耳蜗琥珀酸脱氢酶染色铺片,扫描电镜观察毛细胞的缺失情况。结果 荧光显微镜下见双侧耳蜗均有GFP表达。预防和治疗组处死前的双耳ABR阈值与对照组比较差异有显著意义(P<0.01,P<0.05),耳蜗内外毛细胞缺失数与对照组比较差异有显著意义(P<0.01,P<0.05)。结论 SA脂质体介导的bFGF/GFP基因单耳给药双侧耳蜗均有高效表达,并对庆大霉素所致的耳蜗损害有防治作用。     

条件声暴露后豚鼠耳埚外毛细胞F-激动蛋白的表达（英）

It has been found that in many mammalian animals,including mankind, non-traumatic"conditioning"noiseexposures can make the inner ear more resistant to trau-matic noise exposure. The possible mechanism underlyingthis phenomenon which is now known as"toughening",has been extensively studied . All the explanations aboutthis mechanism, however, have not been acceptable. Asa primary component of the structural filaments of the haircells and some supporting cells, filamentous actin (F-actin) are believed to be the basic unit in hair cell reac-tion. Furthermore, recent studies have shown that F-actinis involved in actin-mediated motile processes of the outerhair cells. Thus, F-actin may play an important role inthe process of"toughening". The present study is ①toobtain more information on the distribution of F-actin inthe guinea pig cochlea, ②to observe the effects of condi-tioning noise exposure on the expression of F-actin, and③to determine the relationship between the changes of F-actin expression in the outer hair cells (OHC) and the"toughening" phenomenon.     

不同强度噪声对豚鼠耳蜗HSP70表达特点的影响

[目的 ]观察无损伤的中等强度的习服声刺激后耳蜗中热应激蛋白 (heatshockprotein ,HSP)的表达特点。 [方法 ]习服组先接受 10d每天 6h习服声暴露 ;对照组静置饲养 10d ;习服 +高噪声暴露组先接受 10d每天 6h习服声暴露 ,休息 2d后 ,再暴露于高强度噪声 2h ;高噪声暴露组直接暴露于高强度噪声 2h。然后以免疫组织化学方法结合图像分析技术检测各组动物耳蜗HSP70表达情况。 [结果 ]习服组耳蜗中HSP70 (积分光密度为 2 2 .99,平均光密度为 0 .2 8)明显高于对照组 (积分光密度为 6.77,平均光密度为 0 .11) (P <0 .0 5 ) ;习服 +高噪声组明显低于高噪声暴露组 (P <0 .0 5 ) ,两组积分光密度分别为 2 0 .0 6和 43 .14 ,平均光度分别为 0 .3 0和 0 .40。 [结论 ]用无损伤的中等强度习服声诱导耳蜗中HSP70的表达高于正常状态时的表达而低于高强度噪声刺激时的表达 ,但习服过程诱导产生的HSP70却对听觉系统提供了一定的保护作用     

山莨菪碱对耳蜗辐射防护作用的动物实验研究

目的研究山莨菪碱对耳蜗辐射损伤的防护作用。方法健康豚鼠25只随机分成三组：对照组、单纯放射组和山莨菪碱防护组，每组观察10耳。放疗前30分钟，按每公斤体重20mg于山莨菪碱防护组豚鼠的股部肌肉注射山莨菪碱，对照组和单放组在上述部位注射等量生理盐水。用直线加速器所产生的6Mev电子线对山莨菪碱防护组和单纯放射组豚鼠的耳颞部予以分次照射，总剂量达到60Gy后作耳蜗毛细胞的光镜及扫描电镜观察。结果耳蜗基底膜铺片表明对照组照射耳耳蜗内外毛细胞排列整齐无缺如，单纯放疗组照射耳耳蜗外毛细胞有大量缺如，内毛细胞有少许缺如，山莨菪碱防护组照射耳耳蜗外毛细胞少许缺如，内毛细胞无缺如；扫描电镜表明对照组照射耳耳蜗外毛细胞的纤毛排列整齐无倒伏、缺失，单纯放疗组照射耳耳蜗外毛细胞的纤毛明显倒伏、缺失、排列紊乱，山莨菪碱防护组照射耳耳蜗外毛细胞的纤毛排列基本整齐，偶见倒伏现象。结论①分割剂量60Gy对豚鼠耳颞部照射可造成耳蜗毛细胞损害，②山莨菪碱对耳蜗辐射损伤具有保护作用。     

离子转运蛋白抑制-听觉实验研究NKCC1和Na,K-ATPase在耳蜗K+循环中的作用

目的通过离子转运蛋白抑制-听觉功能实验,探讨NKCC1和Na,K-ATPase在内耳K 循环及听觉中的作用,并验证耳蜗K 循环模式与听觉的关系。方法应用NKCC1抑制剂呋塞米(Furosemide)和Na,K-ATPase抑制剂乌巴因(Ouabain),对CBA/CaJ和Castel两种鼠系进行离子转运蛋白抑制-听觉实验,检测小鼠的听觉脑干反应(ABR)阈值。结果Furosemide 0.2 mg/g注射30 min后,小鼠的ABR阈值明显升高,与正常对照组比较差异有极显著性意义(P<0.01)。Ouabain 0.003μg/(g.d)连续注射5 d后,小鼠的ABR阈值也明显升高,与对照组相比较差异有极显著性意义(P<0.01)。而先后注射Ouabain和Furosemide,ABR阈值虽较正常对照组升高(P<0.05),但低于单独注射Ouabain组(P<0.05)和明显低于单独注射Furosemide组(P<0.01)。停药3 d后,小鼠的ABR阈值均恢复到接近正常对照组的阈值(均P>0.05)。结论在小鼠实体中验证了NKCC1和Na,K-ATPase是耳蜗K 循环的关键离子转运蛋白,其中任一功能失衡均可影响听觉功能。     

耳蜗前体细胞体外培养和诱导分化的实验研究

目的通过体外定向诱导耳蜗前体细胞分化，明确耳蜗前体细胞的位置取材，来源及增殖分化特性．建立完善的耳蜗前体细胞的培养体系。方法取耳蜗的Corti器位置，利用无血清培养和单细胞克隆技术，进行细胞培养，在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况，并用神经巢蛋白（nestin）、溴脱氧尿嘧啶（Brdu）、MyosinⅦA、P27^KIP1等免疫荧光方法。鉴定耳蜗前体细胞和由耳蜗前体细胞分化而来的内耳毛细胞和内耳支持细胞。同时进行细胞计数。结果从新生大鼠耳蜗分离的组织．经原代和传代培养后，可获得大量未分化，悬浮生长的Nestin阳性细胞团，并具有增殖的能力，诱导分化后的细胞经免疫荧光双标实验可表达Brdu、MyosinⅦA和P27^KIP1阳性。流式细胞仪细胞计数后，发现前体细胞向内耳毛细胞诱导分化的数量较少，向支持细胞分化的较多。结论从新生大鼠耳蜗分离的细胞是具有自我更新和分化潜能的前体细胞，可诱导分化为内耳毛细胞和内耳支持细胞。     

中等强度冲击波负压暴露后豚鼠耳蜗毛细胞核形态学观察

目的观察冲击波负压(BUP)暴露后早期豚鼠耳蜗毛细胞胞核的病理形态学变化。方法将豚鼠在负压峰值为-44.5~-48.8kPa的中等强度BUP暴露3次,于BUP暴露后7d解剖取出耳蜗,应用DNA荧光染料Hoechst 33342显示毛细胞核,在荧光显微镜下毛细胞病理损害情况并进行计数。结果BUP暴露后7d,豚鼠耳蜗毛细胞可见胞核肿胀、胞核缺失、胞核固缩3种病变,以核肿胀发生最高,其次是核缺失,核固缩最为少见,3种病变的总发生率达(17.3±3.2)%,明显高于正常对照组(P<0.001)。结论BUP暴露可导致耳蜗外毛细胞核明显的病理性改变,这种改变可能是造成听力损失的主要原因之一。     

豚鼠冲击波负压暴露后耳蜗毛细胞扫描电镜和透射电镜观察

目的 探讨冲击波负压(BUP)暴露后豚鼠耳蜗毛细胞的超微结构变化特点.方法 将豚鼠暴露于不同强度的实验性BUP 1次,8h～7d后应用扫描电镜和透射电镜技术观察耳蜗基底膜毛细胞的超微结构变化.结果 负压峰值为-22.4 ～-63.3kPa的BUP暴露后,豚鼠耳蜗毛细胞的超微结构变化发生了不同程度的病理性改变,主要表现为第2、3排外毛细胞散在性缺失,甚至节段性外毛细胞缺失、纤毛融合甚至巨纤毛形成及胞浆溢出,纤毛内微丝解聚、线粒体肿胀、溶酶体数量增多和胞浆内空泡形成.结论 不同强度的BUP暴露可导致豚鼠耳蜗毛细胞的超微结构病变,且BUP强度越高,病变越重.     

慢性肾衰竭对听力的影响及其机理研究

[目的]观察慢性肾衰对听力的影响并探讨其机理。[方法]将Wistar雄性大鼠29只,随机分为12天空白对照组6只,12天实验组8只,24天空白对照组6只,24天实验组9只。实验组分别进行12天和24天腺嘌呤(300mg/Kg)灌胃,造成慢性肾衰模型。以脑干听觉诱发电位(BAEP)评价各组动物听功能的变化;分别测定各组大鼠肾功能(血清Cr、BuN);光镜下肾组织形态学观察,并测定肾胶原含量;免疫组化观察NOSⅡ在耳蜗的表达情况。[结果]随着肾功能的损害,血清Cr、BuN、明显升高(P<0·001);BAEP阈值和潜伏期分别逐渐增高和延长;光镜下肾组织纤维化程度逐渐增高;耳蜗组织免疫组化显示,空白对照组NOSⅡ在耳蜗血管纹、内外毛细胞、螺旋神经节细胞均有不同程度的弱阳性表达,伴随肾功能的损害,上述各部位的表达逐渐增强,其中以血管纹的表达最强,依次是螺旋神经节细胞,内、外毛细胞。[结论]慢性肾衰可引起耳聋,其原因可能与代谢产物毒性作用有关。肾衰后耳蜗NOS活性增高,大量生成NO,对血管纹、螺旋神经节细胞、内外毛细胞产生毒性损害,可能是慢性肾衰引起耳聋的重要机制之一。