凋亡敏感基因在短暂性缺氧再复氧复注血清后的大鼠星形胶质细胞中的表达及其意义

目的研究一种新发现的抗氧化蛋白质--凋亡敏感基因(SAG)在短暂性缺氧再复氧复注血清诱导的细胞坏死和凋亡中的作用.方法用短暂性缺氧再复氧复注血清来诱导原代培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞损伤,用免疫细胞化学方法检测凋亡敏感基因的表达,并作图像分析;用流式细胞仪检测胶质细胞在短暂缺氧再复氧复注血清后不同时间点的凋亡率.结果凋亡敏感基因在缺氧15 min再复氧复注血清5 h后表达最高,在复氧复注血清16 h后恢复至对照组水平;细胞凋亡率在缺氧15 min再复氧复注血清1h时达到最高,而在再复氧复注血清5 h后降至对照组水平.结论凋亡敏感基因具有抗凋亡的作用,可减轻星形胶质细胞的缺血再灌注损伤.     

褪黑素对急性胰腺炎相关性肺损伤中趋化因子MIP-2表达的影响

目的观察褪黑素(MT)对ANP大鼠肺组织趋化因子巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)表达的影响,探讨MIP-2在ANP相关肺损伤发病机制中的作用。方法35只SD大鼠随机分为假手术组(SO组),ANP 3h、6h、12h组和MT 3h、6h、12h组,每组5只。采用4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射制备ANP动物模型,MT组在ANP诱导前30min腹腔注射MT 20mg/kg体重。检测血淀粉酶,观察肺组织病理学改变,采用实时定量RT-PCR法和免疫组化检测肺组织中MIP-2 mRNA和蛋白的表达。结果与SO组相比,ANP 3h、6h和12h组肺组织MIP-2 mRNA表达分别增加48%,137%和230%。ANP组MIP-2蛋白表达量分别为3.40±0.84,5.80±0.55和6.40±0.45。MT干预组肺组织损伤得到改善,MIP-2 mRNA表达分别为ANP相应时间点的87%,77%和84%,MIP-2蛋白表达分别为2.20±0.84.4.20±0.45和5.20±0.50,与ANP相应时间点比较,相差显著(P<0.05)。结论MIP-2在ANP相关肺损伤发病中起一定作用,MT可能通过下调MIP-2的表达以减轻ANP相关肺损伤的程度。     

Regional gene therapy for full-thickness articular cartilage lesions using naked DNA with a collagen matrix.

A novel gene therapy approach for treating damaged cartilage is proposed that involves placing endotoxin-free cDNA containing the gene for bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) in type I collagen sponges and then transferring the naked plasmid DNA construct to the injury site. A full-thickness cartilaginous defect in rabbits implanted with plasmid containing a marker gene (beta-galactosidase) showed expressed protein as detected by immunostaining. At 1 week postimplantation, mesenchymal cells subjacent to the defect had incorporated the implanted naked plasmid DNA and, once transfected, served as local bioreactors, transiently producing the gene product. Plasmids containing the gene for BMP-2 implanted in collagen sponges in cartilage lesions stimulated hyalinelike articular cartilage repair at 12 weeks postimplantation, nearly equivalent in quality to that induced by collagen sponges with recombinant BMP-2 protein. Our approach circumvents the risks of inflammation and immunogenic response associated with the use of viral vectors. Naked plasmid DNA as a vehicle for transferring therapeutic genes has been shown to be effective in a therapeutic model within rabbit articular cartilage and appears to be safe and cost effective.     

VEGF基因体外转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

目的:探讨脂质体介导血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCS)应用于基因治疗的可行性、安全性。方法:体外分离、培养、鉴定MSCs,PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染MSCs,转染后用免疫荧光和ELISA检测MSCs表达VEGF蛋白的情况,MTT检测MSCs对VEGF质粒转染的敏感性。结果:骨髓中分离得到MSCs,流式细胞检测显示MSCs不表达CD34和CD45,但表达CD90。透射电镜观察可见细胞浆中含大量粗面内质网和分泌颗粒。VEGF基因转染MSCs后第5天抗VEGF免疫荧光染色约90%的MSCs呈阳性,ELISA检测结果显示PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染组细胞培养上清液中VEGF含量明显高于对照组,并于转染后第5天达到峰值。MTT检测结果显示VEGF质粒转染对MSCs增殖无影响。结论:MSC可作为VEGF基因转染的靶细胞用于基因治疗。     

利多卡因混合不同剂量肾上腺素局部浸润麻醉对全麻下鼻内窥镜手术患者血液动力学的影响

目的 观察利多卡因混合不同剂量肾上腺素局部浸润麻醉对全麻下鼻内窥镜手术患者血液动力学的影响。方法 69例拟在全身麻醉下行鼻内窥镜手术的患者随机分为3组（n=23），采用含不同剂量肾上腺素的1％利多卡因进行鼻粘膜下多点浸润注射。Ⅰ组：含1：20万肾上腺素的1％利多卡因4ml（20μg）；11组：含1：10万肾上腺素的1％利多卡因4ml（40μg）；Ⅲ组：1％利多卡因4ml（不含肾上腺素）。采用阻抗心动图（ICG）测量并记录浸润麻醉开始前（基础值）、浸润麻醉开始后0．75、1．5、2．25、3、3．75、4．5、5．25、6min平均动脉压（MAP）、心率（HR）、心脏排血指数（CI）、外周血管阻力指数（SVRI）和加速度指数（ACI），同时评价术中出血状况。结果与基础值比较，Ⅰ组和Ⅱ组在浸润麻醉开始后1．5min时MAP下降，HR增快（P〈0．01）；从浸润麻醉开始后1．5minSVRI下降，CI、ACI上升，到浸润麻醉开始后6min时仍未恢复（P〈0．05或0．01）。与Ⅱ组比较，Ⅰ组在浸润麻醉开始后2．25、3、3．75minMAP下降，从2．25min起CI下降（P〈0．01或〈0．05）。与Ⅲ组比较，Ⅰ组、Ⅱ组出血较少（P〈0．01）；Ⅰ组和Ⅱ组之间差异无统计学意义。结论 全身麻醉下鼻内窥镜手术中局部浸润麻醉时，局麻药中肾上腺素的吸收会引起明显的血液动力学变化，推荐在鼻内窥镜手术中使用含有5μg/ml肾上腺素的利多卡因。     

自锁髓内钉治疗肱骨干骨不连

肱骨干骨不连临床上多见，传统的方法是钢板内固定并植骨术。但由于组织创伤大，且术后多需石膏外固定，常遗留肩肘关节功能障碍，更有部分病例骨折仍不愈合，而需再次手术。我们自2000年4月-2004年5月，采用自锁髓内钉治疗肱骨干骨不连18例，获得满意效果，现总结报告如下。     

p14ARF基因通过p53途径对肝癌细胞的生长的影响

目的　探讨 p14 ARF对含有野生型 p5 3(wtp5 3)的肝癌细胞生长的影响及其作用机制。方法　将含p14 ARF的基因转染到人肝癌细胞HepG2中 ,通过流式细胞仪及生长曲线观察其对HepG2细胞周期及细胞生长的影响。利用Western Blotting方法及 p2 1waf1启动子荧光素酶活性检测p14 ARF对HepG2细胞 p5 3蛋白表达的影响。 结果　转染p14 ARF基因的HepG2细胞的生长速度从第 3天开始较空载体 pcDNA 3组减慢 ,处在G0 G1期细胞数 ( 70 .6 6 % )与空载体组 ( 6 1.5 5 % )相比明显增加 ,转染 pcDNA3p14 ARF( 1.0 92 3± 0 .0 370 ) p2 1waf1启动子荧光素酶活性较空载体组( 0 .76 73± 0 .0 180 )明显升高 ( P <0 .0 5 )。Westernblotting结果表明 ,p5 3表达也明显增加。 结论p14 ARF基因通过上调HepG2细胞的 p5 3表达导致 p2 1waf1的表达升高使细胞阻滞于G0 G1期 ,从而抑制细胞的生长。     

氮芥抗药性人早幼粒白血病HL60细胞亚系的建立及其生物特性

用逐步递增药物浓度和软琼脂细胞克隆技术，药物连续作用１４个月后获得氮芥（ＨＮ２）抗药性人早幼粒白血病ＨＬ６０细胞亚系，抗件达５～７倍（ＨＬ６０／ＮＨ２６），在无ＨＮ２培养液中５倍以上抗性维持１０个月以上，抗性细胞亚系的生物学特性除倍增时间稍长和克隆形成率略低外其生长曲线，细胞周期细胞ＤＮＡ指数，形态学，组织化学和染色体分析均与亲代细胞相似。     

广东省SARS流行株M基因序列分析

目的：测定广东省不同流行时期13份SARS病毒(SARS CoV)标本的M基因序列，通过分析该基因序列的变异情况，初步了解广东省SARS病毒在流行过程中是否发生了变异。方法：提取病毒RNA，用M基因特异引物进行RT-PCR，将产物纯化后直接测定核苷酸序列。结果：13份标本M基因核苷酸序列同源性很高，为99．7％～100％，M基因核苷酸序列只在2个位点(80和203位)发生变异，1株80位点的变化引起编码的氨基酸从苯丙氨酸(F)变为半胱氨酸(C)，3株203位变化为无义突变。结论：M基因核苷酸序列变异不大，初期和后期M基因核苷酸序列与流行高峰期的毒株相差1个碱基，但氨基酸序列相同；从香港感染病人分离的1株病毒M基因与广东本地感染分离株存在1个氨基酸的差异。     

64层螺旋CT三联检查在急性胸痛诊断中的应用

目的探讨64层螺旋CT（MSCT）三联检查显示急性胸痛患者肺动脉、胸主动脉和冠状动脉病变的能力及其临床应用价值。方法70例患者进行64层MSCT回顾性心电门控肺动脉、胸主动脉和冠状动脉联合检查。采用多平面重组（MPR）、最大密度投影（MIP）、曲面重组（CPR）及容积再现（VR）多种重组技术显示肺动脉、胸主动脉和冠状动脉，评价成像质量能否满足临床诊断需要。结果平均扫描时间（8．5±1．0）s，总对比剂用量100ml。肺动脉和主动脉增强后CT值均≥200HU者占95．7％（67／70）；冠状动脉显影图像质量优的节段占85．8％（720／839），图像质量良的节段占8．6％（72／839），图像质量差的节段占5．6％（47／839）。共检出冠状动脉狭窄≥50％者20例，肺动脉栓塞2例，主动脉夹层2例。结论64层MSCT三联检查能够在8s左右1次扫描完成肺动脉、胸主动脉和冠状动脉检查，图像质量可以满足临床诊断需要，在急性胸痛病因诊断中具有很高的临床应用价值。