血管生成素-Ⅱ在胃癌中的表达及其意义

目的：研究血管生成素-Ⅱ（Ang-Ⅱ）在胃癌和癌周正常组织中蹬表达及影响其表达的病理因素。方法：采用RT-PCR和免疫组化法检测72例胃癌组织和癌周正常组织中Ang-Ⅱ和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：Ang-Ⅱ在胃癌组织中的表达与癌周正常组织相比有显著差异（P<0.01）。在肿瘤组织中，Ang-Ⅱ和VEGF的表达相关（r=0.996，P<0.05）。Ang-Ⅱ的表达与肿瘤的分期（r=0.792，P<0.01）、血管侵犯（r=0.829，P<0.01）相关，而与肿瘤组织的分化类型（r=0.289，P=0.250）、淋巴结转移程度（r=0.290，P=0.259）、浆膜层侵犯（r=0.374，P=0.126）无关。结论：Ang-Ⅱ在胃癌中的表达与VEGF的表达、肿瘤的分期、血管侵犯相关。     

HLA-DRB1~* 1501与我国北方汉族儿童结核病的易感性研究

为了研究中国北方儿童结核病与HLAⅠ类基因的关联,我们采用PCR-SSO方法检测了97例北方汉族结核患儿和91例正常对照的HLA-DRBl,DQAl,DQBl等位基因.发现中国北方汉族儿童结核病与HLA-DRBl·1501有显著关联.进一步比较DR分子结构发现β链第86位氨基酸对结核病的易感性可能有重要意义.     

β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅱ、Ⅴ表达的亚细胞结构定位研究

为了研究β-1,4-半乳糖基转移酶 和 (β-1,4-Gal T- and )蛋白表达的亚细胞结构定位 ,本实验构建了β-1,4-Gal T- 和 融合绿色荧光蛋白 (GFP)表达质粒 ,分别将构建的质粒转染到 PC12细胞和肝癌 772 1细胞中 ,在荧光显微镜下观察β-1,4-Gal T- 和 在其中表达的亚细胞结构定位。发现 ,β-1,4-Gal T- 和 主要表达在这两种细胞的细胞核旁的 Golgi复合体 ,说明它们主要分布在 Golgi复合体上。提示它们可能是在 Golgi复合体参与蛋白质的糖链修饰     

钙调神经磷酸酶参与心衰患者心肌重构的信号转导

目的：探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)介导的钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路参与心力衰竭（CHF）患者心肌重塑的机制。方法:选择因瓣膜性心脏病接受二尖瓣置换术的CHF病人39例，正常对照38例(其中8例来自意外伤亡的器官捐献者)。彩色多普勒超声心动图仪检测心脏扩大和心功能参数。放免法检测血浆及心肌组织Ang Ⅱ浓度，免疫沉淀法测心肌组织CaN、活化T细胞核因子(NFAT₃）、锌指转录因子(GATA₄)磷酸化及蛋白表达，RT-PCR检测肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA表达。结果:AngⅡ分别与心脏扩大参数呈显著正相关，而与心功能参数呈显著负相关。CHF患者心肌组织CaN蛋白表达、CaN磷酸化、GATA^₄蛋白表达及β-MHC mRNA表达明显高于对照组，随心功能恶化其表达逐渐增加；NFAT₃磷酸化随心功能恶化而减弱。结论：肾素血管紧张素系统（RAS）激活的CaN信号通路在CHF患者心肌重构机制中可能起重要作用。     

长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制

目的 探讨长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 选取2018年1月—2019年10月南京江北医院骨科脊柱骨折患者手术切除的正常椎间盘标本18例,其中男11例、女7例,年龄为22~46 （38.3±4.3）岁,PfirrmannⅠ级6例、Ⅱ级12例。取椎间盘标本常规分离、培养髓核细胞,使用10 ng/mL IL-1β处理髓核细胞获得退变髓核细胞。将退变髓核细胞分为沉默对照组、KLHL7-DT沉默组、过表达对照组、KLHL7-DT过表达组。4组细胞分别对应转染沉默对照序列、siRNA-KLHL7-DT沉默序列、过表达对照序列、KLHL7-DT过表达序列。取转染后4组退变髓核细胞采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）蛋白的表达情况。结果 （1）KLHL7-DT过表达组EdU染色阳性细胞/DAPI染色阳性比值（0.147±0.002）低于过表达对照组（0.203±0.007）,而KLHL7-DT沉默组比值（0.428±0.050）高于沉默对照组（0.240±0.032）,差异均有统计学意义（t=14.25、-5.44,P值均<0.05）。（2）KLHL7-DT过表达组细胞凋亡率（19.01%±0.41%）高于过表达对照组（14.38%±0.31%）,KLHL7-DT沉默组细胞凋亡率（16.08%±0.59%）低于沉默对照组（17.42%±0.36%）,差异均有统计学意义（t=15.69、3.36,P值均<0.05）。（3）Western blot结果显示,KLHL7-DT过表达组细胞Aggrecan和Col Ⅱ蛋白的相对表达量（分别为0.34±0.29、0.57±0.11）均低于过表达对照组（1.00±0.22、1.05±0.10）,KLHL7-DT沉默组Aggrecan和Col Ⅱ蛋白的相对表达量（分别为1.77±0.14、1.63±0.12）均高于沉默对照组（1.10±0.18、0.98±0.08）,差异均有统计学意义（t=3.10、5.54、-5.05、-7.66,P值均<0.05）。结论 上调KLHL7-DT的表达可抑制退变髓核细胞的增殖,促进退变髓核细胞的凋亡,其机制可能是通过调节细胞外基质Aggrecan、Col Ⅱ蛋白的合成,进而参与椎间盘退变的发展。     

宫内胎肝细胞移植形成血小板GPⅡb Bak a/b嵌合体的研究

目的　探讨宫内胎肝细胞移植是否形成人工血小板杂合子嵌合体 ,评估其在治疗血小板无力症的临床应用前景。方法　选择血小板膜GPⅡbBaka/b(GPⅡb异亮氨酸 84 3丝氨酸多态性 )作为遗传标记 ,采用等位基因特异引物PCR和FOKⅠ限制性内切酶消化技术从 4 2名引产妇筛选一例纯合子GPⅡbBaka/a作为供者 ,一例纯合子GPⅡbBakb/b作为受者 ,制备供者胎肝细胞 ,取 4ml(2 2× 10 5细胞 )在B超引导下通过脐静脉穿刺输给受者。结果　移植后 2 1天 ,用PCR FOKⅠ消化技术检测引产后受者外周血DNA和血小板RNA ,发现已形成Baka/b嵌合体。结论　我们认为宫内胎肝细胞移植可能提供一种治疗血小板无力症和其他遗传性疾病的方法。     

糖尿病患者胰岛素基因启动子的突变检测和临床应用

目的 :探讨胰岛素基因启动子突变是否与中国人 2型糖尿病相关。方法 :随机选择黑龙江省中国汉族人 89例 2型糖尿病 ,应用聚合酶链式反应———单链象多态性 (PCR -SS CP)检测方法检测胰岛素启动子突变。结果 :89例 2型糖尿病中未发现 1例异常泳动变化。结论 :胰岛素基因启动子突变可能不是中国人 2型糖尿病的重要遗传因素。文献报道美国黑人中胰岛素基因启动子突变 ( 8个碱基TGGTCTAA的重复序列 )与 2型糖尿病相关 ,本研究结果提示此种相关有明显的种族异质性     

胶体金层析法检测恶性疟原虫HRPII抗原的应用研究

目的 :建立一种简易快速 ,适于基层或流行病学调查的自测式胶体金免疫层析法 (GICA)用于检测恶性疟原虫中 H RPII抗原 ,判定是否现症感染。方法 :用 GICA测试条检测全血及滤纸血样中的 H RPII抗原。结果 :40例恶性疟全血及滤纸血 H RPII抗原阳性检出率均为 1 0 0 ,与镜检结果相符合 ;2 5例间日疟均为阴性。结论 :GICA检测血中恶性疟原虫 H RPII抗原特异性强、灵敏度高、简便快速 ,无需特殊仪器设备 ,滤纸血的应用使样本的采集、保存和运输更为便利 ,适合大规模流行病学调查和基层使用 ,有广泛应用价值。     

洛沙坦抗高血压及左室肥厚的疗效观察

目的 :观察血管紧张素 受体拮抗剂—洛沙坦的降压效果及对高血压病合并左室肥厚的影响。方法 :4 6例合并左室肥厚的 期高血压病患者服用洛沙坦 5 0 mg/ d,观察其血压的变化及治疗前和 6个月后左室质量 (L VM)。结果 :用洛沙坦后 4 d～ 6d血压开始下降 ,2周血压趋向正常 ,4周血压继续缓慢下降 ,6周时达到最大降压效果。 L VM在 12周时无明显变化。 2 4周表现轻度 L VM减少。结论 :洛沙坦是抗高血压的一个有效治疗药物 ,对左心室肥厚有轻度逆转作用     

Ca~(2+)经钙激活非选择性阳离子通道进入ECV304内皮细胞

目的　研究钙离子进入ECV30 4内皮细胞株的途径和血管紧张素Ⅱ (AⅡ )对钙内流的影响。方法　用膜片钳的细胞贴附式和全细胞方式记录ECV30 4内皮细胞的通道活动。结果　 (1 )在记录单通道电流时电极液含 1 2 0mmol·L- 1 CaCl2 ,细胞浴液不含K+ 、Na+ 时 ,Ca2 + 经非选择性阳离子通道 (CAN)内流的电导为γ0 =(1 2 90± 2 1 1 ) pS(n =4)。1× 1 0 - 7mol·L- 1 AⅡ可显著增强通道电流幅度和延长通道开放时 ,其电导增大为γ1 =(2 2 1 8± 2 2 9)pS(n =4)。全细胞记录得到的结果与单通道的一致。 (2 )用全细胞方式记录到ECV30 4内皮细胞的电压依赖性钙通道电流 ,记录到该峰值电流为 (2 9 32± 3 56)pA(n =4) ,2 0 μmol·L- 1 nifedepine能抑制这个峰值电流 ,被抑制后的电流峰值为 (6 0 0± 3 94)pA(n =4)。 2 μmol·L- 1 BayK8644能显著激活通道活动。结论　Ca2 + 经CAN进入ECV30 4细胞 ,AⅡ可显著增强CAN的钙流