中国东北汉族一个先天性白内障家系致病基因的鉴定

目的鉴定一个先天性白内障家系的致病基因。方法根据已知与先天性白内障有关的12个致病基因的染色体上的定位,分别选取3～4个的微卫星标记位点,对该家系进行连锁分析。通过测序鉴定致病基因。结果在1q21.1GJA8位点显示最大Lod值2.44。致病基因定位于1q21.1区的GJA8基因,构成缝隙连接的缝隙连接蛋白Connexin50。DNA序列分析鉴定显示其第2外显子的第191个碱基杂合突变T>G导致其蛋白产物第64位缬氨酸转变为甘氨酸。结论Connexin50的V64G新生突变是导致该家系的致病原因。     

氧化砷和维甲酸对PLZF-RARa阳性U937细胞的作用

目的：研究氧化砷（As2O3）和全反式维甲酸（AT—RA）对PLZF-RARα阳性细胞的作用。方法：稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞（U937／PLZF）经As2O2、ATRA处理后，Wright—Giemsa染色观察细胞形态，MTr法检测细胞生长增殖状态，流式细胞术（FCM）检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b、CD64、CD14等的表达变化，荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达，细胞化学染色和硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验观察细胞功能分化情况。结果：U937／PLZF细胞在去除四环素条件培养后，PLZF—RARα表达明显增加。As2O3（0．51μmol／L）联合ATRA（1μmol／L）使U937／PLZF细胞核质比缩小，核仁减少但未消失；生长增殖受抑；S期细胞减少；CD11b表达增高；PLZF—RARα蛋白表达减弱，分布以胞核弥漫细小颗粒为主。细胞化学染色和NBT反应变化不明显。结论：0．5μmol／L As2O3联合1μmol／LATRA可使PLZF—RARα阳性U937细胞产生轻微的形态学分化趋势，尚不足以引起其发生功能分化。     

全反式维甲酸下调慢性阻塞性肺病患者NGAL、MMP-9/TIMP-1比率的研究

目的探讨慢性阻塞性肺病(COPD)患者外周血中性粒细胞(PMN)中NGAL活性和血浆中MMP-9、TIMP-1与COPD病变的关系及体外ATRA干预后NGAL、MMP-9和TIMP-1的变化,以揭示ATRA逆转的作用机制。方法以30例COPD患者为实验组,20例发作期哮喘为阳性对照组,20例健康成年人为健康对照组,均进行肺功能检查,RT-PCR测定COPD组及哮喘组和健康对照组PMN中NGALmRNA的表达强度,ELISA测定其血浆MMP-9和TIMP-1的表达水平。COPD组PMN分为ATRA组和未干预对照组,RT-PCR测定细胞沉淀中NGALmRNA的表达强度,ELISA测定上清液中MMP-9和TIMP-1的表达水平。结果COPD组和哮喘组血浆中MMP-9、NGAL水平和MMP-9/TIMP-1比例显著高于未干预对照组(P<0.05);TIMP-1水平显著低于未干预对照组(P<0.05)。COPD组与哮喘组间有统计学意义(P<0.05)。COPD组患者肺功能与MMP-9和NGAL成负相关,与TIMP-1成正相关。ATRA干预后,COPD患者中MMP-9、NGAL水平较前下降,TIMP-1较前上升,MMP-9/TIMP-1比例降低。结论COPD组NGAL、MMP-9和MMP-9/TIMP-1摩尔比例升高,TIMP-1降低;可作为COPD患者PMN活性的诊断依据。ATRA通过下调MMP-9、NGAL,上调TIMP-1的表达,纠正MMP-9/TIMP-1失衡,可能对肺气肿的治疗提供新的途径。     

血管紧张素Ⅱ经AT1受体和ERK1/2上调心肌细胞Cx43间隙连接

目的：探讨血管紧张素Ⅱ对培养新生鼠心室肌细胞Cx43间隙连接的影响及其机制。 方法： AngⅡ处理培养心肌细胞24 h。缬沙坦、PD98059在AngⅡ刺激细胞前1 h加到培养基中，对照组加等体积药物溶剂DMSO。用Western blotting分析、代谢标记和免疫沉淀测定、电镜观察心肌细胞Cx43表达、合成和间隙连接。 结果： Western blotting分析显示用10-9-10-6 mol/L AngⅡ刺激细胞24 h，Cx43的表达与对照组相比呈浓度依赖性增加；用AngⅡ 0.1 μmol/L刺激心肌细胞24 h，磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)活性高于对照组（P<0.01），AT1受体拮抗剂缬沙坦（1 μmol/L）能完全阻断AngⅡ增加P-ERK1/2活性；用AngⅡ 0.1 μmol/L刺激心肌细胞24 h，Cx43表达及P-ERK1/2活性均高于对照组(P<0.01)，ERK1/2激酶特异性抑制剂PD98059(1 μmol/L) 能阻断AngⅡ上调Cx43表达和增加P-ERK1/2活性。代谢标记和免疫沉淀测定显示AngⅡ处理组放射渗入Cx43的量明显高于对照组（P<0.01）,缬沙坦(1 μmol/L)能完全阻断AngⅡ增加放射渗入Cx43的量。电镜观察表明用AngⅡ 0.1 μmol/L刺激心肌细胞24 h，AngⅡ处理组细胞间隙连接数目和大小大于对照组（P<0.05）。 结论： AngⅡ通过AT1受体和ERK1/2促进培养心肌细胞合成Cx43，上调Cx43表达和增加间隙连接数目及大小。     

维甲酸调变的巨噬细胞在体外对A549癌细胞的作用

The tumoricidal activity of mouse macrophage (M phi) activated with retinoic acid (RA) and the effect of RA in combination with CP on mouse M phi were studied with phase contrast microscopy, light microscopy, and 3HTdR labelling technique. The results of our studies suggest that: (1) RA can activate mouse peritoneal M phi both in vivo and in vitro, and the RA-activated M phi are cytostatic and cytolytic to A549 cells. The degree of activation is related to the concentration or dosage of RA given, and (2) RA can enhance the function of CP-activated M phi. A summation effect was obtained by giving RA in combination with CP. This effect was related to the dosage of RA. When optimal dosage was given in combination with CP, a synergistic action in activating M phi could be obtained. Morphological changes could be seen under phase contrast microscope and light microscope in killed tumor cells.     

大鼠骨髓间质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞Cx43通讯连接功能检测

目的： 探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）体外诱导分化为心肌样细胞Cx43的分布与通讯连接功能状态。方法： 取健康SD大鼠骨髓，用5-氮杂胞苷体外诱导培养。取诱导培养2、3、4周的MSCs为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，另取急性分离的心肌细胞为对照组，用激光共聚焦技术检测Cx43的分布及平均荧光漂白恢复率。结果： 对Cx43在细胞内分布检测发现，随诱导培养时间的延长，细胞内蛋白颗粒密度逐渐增加；诱导培养4周后MSCs内蛋白颗粒密度与对照组比较无显著差异（63.87±12.43，64.87±12.15，P>0.05）。各组细胞平均荧光漂白率的变化趋势与Cx43分布变化相似，即随诱导培养时间的延长，细胞平均荧光漂白率逐渐增加；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组分别为19.59%±6.08%、37.17%±3.84%、46.82%±2.69%、49.71%±5.53%，Ⅲ组与对照组比较无显著差异（P>0.05）。结论： 大鼠MSCs在体外诱导培养4周后已分化为心肌样细胞，其细胞Cx43的分布与通讯连接功能与正常心肌细胞相似。     

人冠状病毒229E、OC43与SARS-CoV血清学相关性的研究

目的 检测正常人和SARS患者血清中3种人冠状病毒（229E、OCA3和SARS-CoV）特异性抗体．分析3种冠状病毒血清学相关性。方法 采用免疫印迹、免疫荧光和ELISA方法检测100例健康献血员、34例SARS患者恢复期以及11例SARS患者双份血清中229E、OCA3和SARS-CoV3种冠状病毒核衣壳（N）蛋白抗体。结果 用免疫荧光方法检测100例健康献血员血清中229E、OCA3和SARS-CoV IgG阳性率分别为98％、100％和1％，34例SARS患者恢复期血清中3种冠状病毒IgG的阳性率均为100％；免疫印迹检测100例健康献血员血清中229E、OCA3和SARS-CoVN蛋白IgG阳性率分别9r7％、99％和2％，34例SARS患者恢复期血清中229E、OCA3和SARS-CoVN蛋白IgG阳性率分别97％、100％和100％；11例SARS患者的急性期和恢复期双份血清中，免疫荧光检测有5例出现229E IgG滴度4倍或以上升高，10例出现OC43 IgG滴度4倍或以上升高，ELISA检测2例出现229EN蛋白IgG滴度4倍以上升高，没有一例出现OCA3N蛋白抗体滴度升高。结论 正常人群中普遍存在229E和OCA3两种人冠状病毒抗体，SARS-CoV感染者存在对人冠状病毒229E和OCA3血清学交叉反应，提示核衣壳蛋白不是引起血清学交叉反应的主要抗原，结果对研究SARS溯源有重要意义。     

一个遗传性非综合征型耳聋家系的突变分析

目的分析一个遗传性非综合征型耳聋家系的突变，并探讨缝隙连接蛋白beta2(gap junction protein beta 2，GJB2)基因235delC突变是否会加重线粒体A1555G突变导致的非综合征型耳聋症状。方法对一个母系遗传性非综合征型耳聋核心家系72个成员取外周血提取DNA，经聚合酶链反应扩增后，利用Alw26Ⅰ限制性内切酶酶切及直接测序验证，对其线粒体DNA突变进行研究；利用ApaⅠ限制性内切酶酶切及直接测序验证，筛查核心家系中GJB2基因235delC突变情况，并对GJB2基因235delC和线粒体A1555G突变的关系进行研究。结果在27名母系成员中均发现具有线粒体A1555G突变，呈母系遗传；具有耳聋表型的为21人(77．8％)，家族外显率高；所筛查的包括配偶在内的72名个体中，仅3例具有GJB2基因235delC杂合子突变，且均出现在母系成员中，但3例的耳聋表型却不同。结论线粒体A1555G突变是本家系耳聋遗传易感性的基础，在该家系中GJB2基因的235delC杂合子突变未加重线粒体A1555G突变导致的非综合征型耳聋。     

学习记忆与突触可塑性及相关物质的研究

突触可塑性反映了行为的可塑性，与学习记忆密切相关。一氧化氮(NO)、神经生长相关蛋白(neuronal growth associated protein，GAP-43)、神经细胞粘附因子(neural cell adhesion molecule，NCAM)和生长抑素(somatostatin，SOM)对突触可塑性具有重要意义。NO介导了兴奋性神经传导，对海马、小脑等神经元上突触可     

维甲酸对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的抑制作用

探讨维甲酸（RA）对二乙基亚硝胺（DENA）诱发大鼠肝癌发病过程的作用,从第11周开始,对DENA诱癌的Wistar大鼠隔日腹腔注射RA,每只动物连续给药10次,并设对照组,在诱癌满16周时,每组处死7只,观察比较各组大鼠肝脏形成的大于等于3mm和大于等于5mm的结节数和所见最大结节的体积,给药结束后大加其他措施直至死亡,计算生存时间,在给药前,结束时和给药后20d分别记录大鼠体重,实验发现,治疗组肝切面结节数显著小于对照组（P＜0．05）,结节体积也显著小于对照组（P＜0．05）,与对照组相比,治疗组的生存时间延长55．8％（P＜0．05）,但体重差异不明显,结果提示,RA可明显减轻DENA诱发大鼠肝硬化的程度,形成肝癌结节的数目的大小,并延缓其发展,而且可延长荷瘤大鼠的生存时间。