α-Synuclein磷酸化修饰提高MN9D细胞内TH的活性

目的观察突触核蛋白(α-Synuclein,α-SYN)第129位丝氨酸(Ser129)磷酸化修饰对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)活性的影响。方法应用重叠延伸PCR定点突变法将129位丝氨酸编码碱基TCT突变为天冬氨酸(Asp,D)编码碱基GAT,获得编码模拟磷酸化α-Syn(S129D α-SYN)的DNA序列,插入逆转录病毒真核表达载体(pLNCX2)。包装逆转录病毒颗粒并感染多巴胺能神经细胞MN9D。通过实时定量RT-PCR鉴定α-SYN基因表达,Western blot检测TH磷酸化水平。结果pLNCX2-α-SYN(wild type/S129D)质粒测序结果正确,并在MN9D细胞中均过表达。野生型α-SYN过表达组同正常对照组相比TH磷酸化水平降低(P<0.01),而S129D α-SYN组TH的磷酸化水平同正常对照组相比明显升高(P<0.05)。结论在MN9D细胞中,野生型α-SYN抑制TH的活性,而α-SYN Ser129磷酸化后TH活性明显升高。     

GABA能神经成分对大鼠咀嚼肌本体觉传入进行初级整合的形态学…

本文作者普证明，三叉神经感觉主核背内侧区和三叉上核尾外侧部是大鼠三叉神经本体觉三级传入通路中继站。为证实此二处的ＧＡＢＡ能丘脑投射神经元和中间神经元是否参与三叉神经本体觉的传导和初级整合并阐明其整合机制，用ｒｉｃｉｎ毁损三叉神经中脑核神经元及其终末，ＨＲＰ逆行标记此区的丘脑投射神经元以及抗ＧＡＢＡ免疫组化三者结合的方法，在电镜下发现：（１）中脑核神经元的溃变终末与该二区神经毯中的ＧＡＢＡ能三叉－丘     

大鼠咽肌前运动神经元的跨突触定位

支配咽肌的运动神经元位于疑核，控制凝核的前运动神经元位于孤束核。孤束核中的前运动神经元在控制吞咽运动中起着重要作用。但支配咽肌的前运动神经元位于孤束核的什么部位还不清楚。文内用假狂犬病毒研究字大鼠咽肌前运动神经元在孤束核中的定位。     

大鼠小脑皮质内突触素P38免疫反应产物的分布及年龄变化

用免疫组织化学方法结合图像分析研究突触素Ｐ３８免疫反应产物在Ｗｉｓｔａｒ大鼠小脑皮质的分布及年龄变化，结果显示：小脑皮质内的突触素Ｐ３８免疫反应产物呈板层分布，各层之间的 产物密度差异很大；在三个年龄组，小脑Ｖ，Ⅶ叶分子层突触素Ｐ３８免疫反应产物校正光密度值以青年组最大，成年组次之，老年组最小，各组间差异显著。     

关于海马内突触小球超微结构的辨认

用电镜技术对大白鼠海马ＣＡｌ区的突触小球超微结构作了观察，发现有二种形态的突触小球。一种是小球的突触神经成分均封闭在球内，另一种是小球内的苔状纤维终末与球外神经毯内的树突于形成轴－树突触。小球的中央轴突终末即是苔状纤维终末，它不仅与树突侧棘形成轴－棘突触，而且与树突形成轴－树突触。树－树突触在小球内亦可见到。本文就突触小球的结构成分和突触小球的概念等问题进行了讨论。     

延髓后角脑啡肽超微结构定位和非突触部位释放——脑啡肽突触前抑制痛觉传递的形态学基础

阿片肽在后角镇痛的作用机理,被认为是通过突触前抑制一级传入纤维P物质释放的结果,然而始终未获得形态学的证实。鉴于一级传入纤维存在大量阿片受体的事实,曾提出阿片肽突触前抑制可能是通过非突触的轴-轴作用。为了验证这一设想,本文用免疫组化方法,详细观察了大鼠延髓后角浅层亮氨酸脑啡肽(L-ENK)轴突终末的突触结构和胞吐释放。电镜观察显示,延髓后角ENK终末可分为两类,第一类终末除了含圆形小清亮囊泡外,还有较多的大颗粒小泡(一般7个以上),主要分布于Ⅰ层,很少看到此类终末形成突触;第二类终末,一般含较多圆形清亮小泡和少量大颗粒小泡(一般不超过3个),它们分布于Ⅰ层和Ⅱ层,此类终末主要形成轴-树突触和少量的轴-体突触。只见到一例轴-轴突触,其突触后成分为未标记的R型终末,此外还见到ENK阳性树突成为中央终末的突触后成分。在去传入神经条件下,上述各类终末皆可见到ENK阳性大颗粒小泡的胞吐形成,它们皆位于非突触区,而在突触部位可见到清亮小泡胞吐像,上述结果提示后角ENK非突触部位释放可能是哭触后抑制一级传入纤维P物质释放的形态学基础。     

微波辐射对PC12细胞突触素Ⅰ表达的影响及其机制

目的:探讨微波辐射对PC12细胞突触素Ⅰ表达及其磷酸化水平的影响,并通过对其相关影响因子BDNF及其受体TrkB改变的探讨,初步揭示突触素Ⅰ改变的机制.方法:采用30 mW/cm2微波辐射PC12细胞,于辐射后1 h,通过HPLC检测氨基酸递质释放的改变;于辐射后3 h、9 h、1 d和2 d,通过RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学检测突触素Ⅰ,BDNF和TrkB表达以及突触素Ⅰ磷酸化的改变;通过免疫共沉淀检测BDNF和TrkB相互作用的改变.结果:30 mW/cm2微波辐射后1 h,PC12细胞释放的Asp、Glu、GABA和Gly均减少(P<0.01);突触素Ⅰ mRNA于辐射后3～9 h减少,1 d增加(P<0.01或P<0.05),2 d基本恢复;其蛋白于辐射后9 h～2 d减少(P<0.01或P<0.05);磷酸化的突触素Ⅰ在辐射后3～9 h减少,1 d增加,2 d又见减少(P<0.01或P<0.05).BDNF mRNA于辐射后3～9 h减少,1 d增加,2 d又见减少(P<0.01或P<0.05);其蛋白于辐射后3 h减少,1～2 d又见增加(P<0.05或P<0.01).TrkBmRNA在辐射后3 h和2 d减少;其蛋白于辐射后3 h～1 d增加(P<0.05或P<0.01),2 d基本恢复.BDNF和TrkB的相互作用于辐射后3～9 h增强,1～2 d减弱(P<0.05或P<0.01).结论:微波辐射可引起PC12细胞氨基酸递质释放障碍,突触素Ⅰ表达及其磷酸化水平降低,BDNF和受体TrkB表达及其相互作用异常,参与微波辐射所引起的PC12细胞信息传递障碍及其修复过程.     

选择性破坏胰腺A细胞的模型大鼠大脑皮层神经毡突触的电镜观察

目的　探讨选择性破坏胰腺A细胞的模型大鼠胆碱能神经元的变化。方法　选用硝酸钴和利血平选择性破坏大鼠胰腺A细胞后电镜观察大脑皮层神经毡胆碱能神经元突触的变化。结果　硝酸钴组模型大鼠脑突触内含胆碱能神经递质乙酰胆碱的清亮小泡比对照组明显减少 (P <0 .0 1) ,利血平组清亮小泡比对照组明显增多 (P <0 .0 5 )。结论　这种内源性乙酰胆碱的变化可能与胰腺A细胞损伤有关 ,提示胆碱能神经除受其上级中枢调节外 ,还受某些内分泌细胞的影响     

Genistein对体外培养的Parkinson病模型大鼠多巴胺能神经元及突触素的影响

为了探讨genistein(GST)对离体培养的Parkinson病模型大鼠多巴胺能神经元以及突触素的影响,取孕14~16d SD大鼠胚胎中脑腹侧部,常规体外培养。将培养的中脑腹侧细胞分为四组:正常对照组、雌二醇(E2)+MPP+组、GST+MPP+组、MPP+组。进行四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力和代谢状态。采用TH和突触素(synaptophysin,SYN)免疫荧光组织化学染色技术,观察各组TH阳性神经元的生长状况以及突触数量的变化。结果显示:与正常对照组、E2+MPP+组以及GST+MPP+组相比,MPP+组TH阳性神经元数量少,SYN免疫活性产物表达亦减少,细胞活力差。而E2+MPP+组、GST+MPP+组中上述指标与正常对照组相比,差异无统计学意义。以上结果提示Genistein对体外培养的多巴胺能神经元具有类似雌激素样的神经保护作用。     

帕金森病大鼠纹状体神经元及黑质网状部神经递质变化的研究

本研究采用免疫细胞化学方法和形态计量学技术，观察了由6－OHDA单侧微量注射制成的帕金森病大鼠纹状体头部P物质神经元和体部GABA能神经元的变化，以及黑质网状部突触岛内P物质终末数和GABA终末数及终未总数的改变，以探讨神经递质在帕金森病发病中的作用。结果显示：6－OHDA注射侧纹状体面积、纹状体P物质神经元和GABA能神经元数量均较正常对照侧明显减少；注射侧黑质网状部突触岛单位树突膜长度内终末总数较正常侧减少54％；P物质终末数和GABA终末数亦分别减少44％和33％。本研究表明帕金森病大鼠黑质与纹状体之间团有的神经递质失衡，这可能是帕金森病发病的重要因素之一。