淋球菌的质粒谱与耐药谱分析

淋病是我国性传播疾病(STD)的主要病种,越来越引起人们的广泛关注,淋球菌是淋病的病原菌。淋病治疗过程中抗生素的滥用以及用药的不规范,产生了新耐药菌株和新的耐药谱,给临床治疗用药带来了困难。为了解我区淋球菌的耐药情况以及耐药与质粒的关系,我们于2 0 0 2年从深圳市龙岗区各医院STD门诊病人中分离到4 0株淋球菌,并对其质粒谱与耐药谱进行了研究。现报道如下:1　材料与方法1.1　标本及菌株来源　规范采集深圳市龙岗区各医院STD门诊病人标本,按照文献[1 ] 介绍的方法,分离出淋球菌4 0株。1.2　标准分子量质粒菌株　E.coli V 5 17…     

用DNA microarray快速检测淋球菌耐喹诺酮类药物基因突变

研究DNA microarray的制备及其检测淋球菌耐喹诺酮类药物基因突变的准确性。方法根据淋球菌药敏及测序结果分别对淋球菌gyrA和parC基因的序列设计特异引物和探针并制作DNA microarray。对淋球菌临床拭子进行PcR扩增并荧光标记包含gyrA和parC基因的目的DNA片段，与芯片杂交，同时以测序法进行双盲淋球菌耐喹诺酮类药物基因突变的检测。结果87份泌尿生殖道试子全部可用DNA microarray检测出来，芯片检测结果与药敏结果符合率为100％，与测序结果符合率为97．7％。结论用DNA microarray来检测淋球菌gyrA和parC基因突变快速、特异性高和灵敏度高，可以应用于临床耐药性检测。     

一次荧光定量PCR方法检测三种病原体

奈瑟淋球菌(NG)、解脲支原体(uu)及沙眼衣原体(CT)是引起性传播疾病的淋菌性尿道炎和非淋菌性尿道炎常见病原体。常见的检测方法有培养法、涂片法及金标方法。培养法特异性最高，但受时间的限制不能做到快速诊断，而其它方法的敏感性较差。实时荧光定量PCR技术是近几年出现的新技术，本研究利用实时荧光定量PCR技术检测     

淋球菌膜蛋白疫苗的研究

目的设计淋球菌膜蛋白疫苗并构建原核表达系统,测定表达蛋白的免疫活性.方法PCR扩增淋球菌膜蛋白(PIA)基因片段,构建重组质粒,重组质粒宿主菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE分析PIA的表达情况.淋球菌标准株免疫BALB/c小鼠,体外凝集检测动物血清的免疫效果及ELISA法检测PIA的免疫活性.结果成功构建表达PIA蛋白的重组质粒,SDS-PAGE电泳图上显示1条相对分子量(Mr)约为40KDa的新生条带,能与免疫血清发生特异性结合反应.结论淋球菌膜蛋白疫苗原核表达系统的设计和构建正确,表达蛋白PIA具有免疫活性,为淋病疫苗的开发奠定了基础.     

淋病双球菌在不同培养基上的生长试验比较

目的：研制无需血淋球菌培养基。方法：同一检体在不同培养基上生长试验比较。结果：相同浓度淋球菌菌液在血琼脂和牛奶琼脂平板上菌落数无显著性差异，和T—M琼脂上菌落数相比均有显著性差异。结论：牛奶琼脂和血琼脂效果相当，且牛奶培养基制备更简单，价格更便宜，值得在基层推广。     

2005年广州地区淋球菌对6种抗生素耐药性结果分析

目的了解2005年广州地区淋球菌对6种抗生素的耐药性及PPNG和TRNG的流行状况。方法用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)以及用纸片碘量法检测β-内酰胺酶。结果110株淋球菌检出PPNG38株(34.5%)、TRNG56株(50.9%);环丙沙星的耐药率达96.4%,青霉素耐药率的达93.6%;头孢妥仑MIC50为0.125mg/L,MIC90为0.5mg/L。头孢曲松、壮观霉素没有发现耐药菌株,且抗菌活性最强。结论头孢曲松和壮观霉素在临床上是治疗淋病的首选药物,持续监测淋球菌的耐药性十分重要。     

淋球菌外膜蛋白NspA基因重组子的构建与表达

目的构建淋球菌标准株外膜蛋白NspA基因重组子，在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达外膜蛋白NspA。方法提取淋球菌标准株基因组DNA，PCR扩增其NspA基因，插入表达质粒载体pET-30c（＋）中，构建pET-NspA重组子，转化表达宿主大肠杆菌BL21（DE3），异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达，SDS-PAGE和Western Blot检测表达蛋白。结果成功构建了淋球菌标准株的pET-NspA大肠杆菌表达重组子，经IPTG诱导表达后，该蛋白在大肠杆菌中高效表达。结论淋球菌外膜蛋白NspA在大肠杆菌中的成功表达，为研究该蛋白的免疫学性能、制备抗体和研制预防淋病的疫苗奠定了基础。     

涂片、培养和实时荧光定量PCR检测在妇科的临床应用

目的比较涂片革兰染色、培养和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测妇科性病淋球菌感染的临床应用价值,寻找一种快速而敏感的淋球菌检测方法.方法同时用涂片革兰染色、培养和FQ-PCR检测临床疑诊淋病123例女性阴道标本中的淋球菌,以培养法为"金标准",将另外两种方法与之比较,分别计算其敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值.结果涂片检出率为76.4%、培养法检出率为66.7%、FQ-PCR检出率为69.9%;经配对计数资料χ2检验,FQ-PCR与培养法的检出率比较差异无显著性(P＞0.05).涂片法和FQ-PCR法的敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值分别为94.2%、66.7%、87.2%、82.8%和97.6%、89.7%、95.3%、94.6%.结论FQ-PCR检测淋球菌,可弥补涂片法较粗糙、培养法耗时长的缺点.FQ-PCR具有准确快速,敏感性和特异性较高的特点,是一种具有临床应用价值的淋球菌快速定量检测方法.     

胶体金法对淋病快速诊断的价值探讨

应用艾康生物技术(杭州)有限公司研发的淋病快速诊断试剂(胶体金法),对2001年1月～4月在我院STD门诊就诊的300例患者的分泌物进行了淋病检测,并同时进行淋球菌培养,以此来验证淋病快速诊断试剂(胶体金法)的特异性和敏感性.此外还对部分患者进行解脲支原体、人型支原体、沙眼衣原体的检测,以便观察其它病原体的存在对淋病快速诊断试剂的检测有无干扰作用.     

非衣原体性非淋球菌性尿道炎的病因研究和治疗

尿道炎是最常见的男性泌尿生殖道病征，可由感染性和非感染性因素所致。在性病门诊中男性尿道炎的常见病因有淋球菌和沙眼衣原体感染，由淋球菌感染之外的其他各种原因导致的尿道炎称为非淋球菌性尿道炎（NGU），但有大约50％的患者既检测不到淋球菌也无沙眼衣原体感染，称为非衣原体性非淋球菌性尿道炎（NCNGU）。