表达屋尘螨Ⅰ类变应原Der p 1的基因工程菌的发酵条件探讨

目的 探讨发酵条件对大肠杆菌工程菌表达重组屋尘螨Ⅰ类变应原(Der p 1)的影响.方法 应用摇瓶发酵试验观察不同诱导时间和不同诱导时机对Der p 1表达量的影响.结果 (1)Der p 1基因在E.coli BL21(pBVDP8)菌密度A600 nm0.6左右时,42℃最佳诱导时间为4 h.(2)工程菌E.coli BL21(pBVDP8)在30℃培养至A600 nm为0.5～0.7时,42℃诱导4 h Der p 1表达量最高.结论 确定了最适诱导时间和诱导时机,初步形成了一套高表达Der p 1的发酵技术.     

Brevibacterium sp.DGCDC-82发酵罐中生产胆固醇氧化酶

用Brevibacterium sp.DGCDC-82在7L发酵罐中分批培养.分别对添加剂吐温-80、培养温度、培养基的pH、通风量和搅拌速度在胆固醇氧化酶的生产中的影响进行了研究.结果显示以上条件均对产酶有影响.在不同的发酵阶段改变发酵操作条件,发酵20 h最高酶活可达1203U/L,生产强度可达60 U/(L·h).既有效地提高了胆固醇氧化酶的产量,又防止了发酵过程中的泡沫外溢.     

假单胞菌胆固醇酯酶的生产Ⅰ.菌种筛选和发酵条件的研究

通过平板初筛和摇瓶复筛,从371株菌中筛得一株有工业生产价值的胆固醇酯酶产生菌,并对它进行了发酵条件的研究。用所获得的胆固醇酯酶配制的三酶试剂具有良好的稳定性,适用于临床检测。     

重症监护病房细菌耐药性监测

目的 了解重症监护病房(ICU)的常见细菌及细菌耐药情况,分析其耐药发展趋势,控制院内感染.方法 菌株来自2005～2006年本院微生物实验室首次分离株,药敏试验采用K-B纸片法,并根据美国临床实验标准化委员会指定的原则判定细菌耐药率.结果 鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌、嗜麦芽假单胞菌、铜绿假单胞菌是ICU常见感染菌.亚胺培南具有最高抗菌活性.阿米卡星、头孢哌酮、头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦及头孢吡肟耐药率分别为11%、20%、20%、21%、25%,非发酵菌感染呈上升趋势.结论 非发酵革兰阴性杆菌是ICU主要感染菌.亚胺培南的敏感性和抗菌活性最高.     

发酵黄腐酸抗炎作用初步研究

腐植酸(humic acid.HA)是植物残体经解离和再缩合形成的一类高分子有机弱酸,广泛分布土壤、泥炭、风化煤和褐煤中。HA可分为黄腐酸(fulvatum acid,FA)、棕腐酸和黑腐酸。其中FA分子量最小,溶解度最好,生物活性最高,毒性最弱,故在医药中最常用。目前我国用于医药主要为从泥炭和煤炭中提取的的矿源FA(MFA),在生产中需要宝贵的煤炭作为原料。而且由于不同地区形成的FA有很大差异,医疗效果可相差甚远。1993年我国出现的发酵FA(BFA)由于在人工控制条件下进行解离和缩合,产品质量较稳定。同时因生     

蛇足石杉内生真菌2F09P03B产石杉碱甲发酵条件的研究

 目的 研究发酵条件对蛇足石杉支顶孢属内生真菌2F09P03B 石杉碱甲生成的影响，并探讨发酵条件的优化。 方法 通过测定 2F09P03B 生长曲线、石杉碱甲积累曲线和培养液 pH 值随时间的变化情况，了解该菌株的培养特性；考察不同碳源和氮源对石杉碱甲积累的影响。在单因素试验的基础上，利用正交试验优化培养基碳源、氮源组成；考察 MgSO4、KH2PO4、NaCl、CaSO4 对石杉碱甲生成的影响，确定无机盐组成；优化接种量、发酵时间、培养温度、摇床转速等发酵工艺条件。 结果 菌株 2F09P03B 的最佳培养基组成为：马铃薯 150 g/L，玉米粉 30 g/L，麦芽糖 25 g/L，酵母膏 10 g/L，麸皮 30 g/L，KH2PO4 1.5 g/L，MgSO4 0.5g/L，NaCl 0.3 g/L，CaSO4 0.3 g/L，pH 自然；最佳发酵工艺条件为：接种量 8%，发酵时间 10 d，培养温度 28 ℃，摇床转数 140 r/min。在此条件下，发酵液中石杉碱甲含量为 8.17 μg/L，最高达到 8.32 μg/L，约为其干重的 0.07% 左右。 结论 发酵条件对菌株 2F09P03B 石杉碱甲产量有明显影响。优化后的发酵条件可使该菌株石杉碱甲产量明显提高，有望成为石杉碱甲新药源。     

临床分离产IMP-1型金属酶非发酵菌的耐药机制研究

从临床收集耐亚胺培南的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌共50株,进行头孢他啶和2-巯基乙醇的表型协同试验(CAZ ME),然后进行金属酶IMP-1基因的PCR检测。选取IMP-1阳性株测序,用PCR方法检测有无一类整合子基因(IntI1)。表型的检测发现有28株为协同阳性,其中铜绿假单胞菌27株,鲍曼不动杆菌1株。PCR和测序检测出其中一株铜绿假单胞菌含有IMP-1基因,同时也含有IntI1基因。首次在中国西部地区发现产IMP-1型金属酶、同时也含有一类整合子的铜绿假单胞菌,对于临床上研究细菌的耐药性传播具有重要意义。     

玉米浆用量、渗透压和耗糖速率对甘油发酵的影响

Candida krusei发酵生产甘油过程中,菌体生长由玉米浆限制,菌体对玉米浆的得率为1．63g/g,培养其中玉米浆浓度相同时,增加渗透压或通过流加补料限制生长阶段的菌体生长,可使甘油生产阶段的比耗糖速率减慢,比耗糖速率保持在不很高的水平,可以因消耗的葡萄糖用于生长,维持,甘油和副产物形成所占比例的变化而提高甘油得率。     

发酵桔梗急性毒性及药理学实验研究北大核心CSCD

考察发酵桔梗对小鼠的急性毒性及小鼠感染肺炎支原体后咳嗽的作用研究。采用最大给药量(maximum dosage,MAD)对小鼠进行急性毒性实验,观察小鼠体征,14 d后行剖检、血液生化检查和病理组织切片观察。发酵桔梗药理学实验中将60只健康雌、雄各半的BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、喷托维林组(0.013 g·kg^(-1)·d^(-1))、发酵桔梗高剂量组(5.2 g·kg^(-1)·d^(-1))、发酵桔梗中剂量组(2.6 g·kg^(-1)·d^(-1))、发酵桔梗低剂量组(1.3 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。除空白组外,其余5组BALB/c小鼠通过鼻腔滴入20μL 1×10^(6 )CCU肺炎支原体进行造模3 d,各组小鼠灌胃给予相应药物7 d;引咳实验观察并记录各组小鼠咳嗽潜伏期及3 min内咳嗽总次数;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Masson染色观察肺组织病理变化;免疫组化观察各组小鼠肺组织瞬时受体电位A1(transient receptor potential A1,TRPA1)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene rela-ted-peptide,CGRP)、P物质(substance P,SP)蛋白表达。利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence-based quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)阐明发酵桔梗对小鼠咳嗽因子TRPA1、CGRP、SP mRNA水平的变化。在急性毒性实验中无小鼠死亡,一般行为学和主要脏器病理学检查等均无变化;与空白组比较,血液生化指标差异无统计学意义。在发酵桔梗药理学实验中,与模型组相比,发酵桔梗高、中剂量组小鼠肺组织结构明显得到改善,结构清晰,组织形态规整。qRT-PCR和免疫组织化学检测显示,发酵桔梗组细胞因子TRPA1、CGRP、SP表达降低。发酵桔梗可通过抑制肺组织TRPA1、CGRP、SP表达从而发挥抑制咳嗽作用,确定了药物作用的靶点。