亲和磷酸蛋白组学——筛选LPS信号通路中调节蛋白的新方法

目的 建立并优化亲和磷酸蛋白组学方法,发现脂多糖(LPS)刺激Thp-1巨噬细胞所诱导的磷酸化蛋白图谱的差异,以初步筛选LPS通路中的新信号分子.方法 使用佛波酯刺激Thp-1单核细胞48 h使之分化成为成熟的巨噬细胞,静息48 h后,先后以等体积的培养基或100 ng/ml LPS刺激30min.采用PMAC富集磷酸化蛋白,经超滤除盐后进行二维凝胶电泳,比较对照组和LPS组的磷酸化蛋白图谱的差异并挑选部分斑点进行质谱鉴定.结果 相对于对照组,LPS刺激的细胞(LPS组)中,29个磷酸化蛋白斑点在双向电泳图谱中表现出重复的差异.其中8个斑点发生了上调,并且新出现了7个斑点;10个发生了下调,并且消失了4个斑点.选择新出现或消失的蛋白斑点进行质谱测试,鉴定出其中4个,这些蛋白参与信号转导和宿主防御反应等,其中LPS刺激后,proteasome C2亚基的磷酸化显著上调,这与文献报道的结果相符合,证实了该方法的有效性,而Z-DNA-binding protein 1的磷酸化尚未见诸报道,需要进一步的验证和研究.结论 亲和磷酸蛋白组学方法是筛选信号分子的有效策略,可以广泛应用于信号通路的系统性研究.     

血浆晚期氧化蛋白产物与HDL亚类组成的关系

目的 探讨血浆晚期氧化蛋白产物(AOPPs)对血浆高密度脂蛋白(HDL)亚类组成及含量的影响.方法 采用氯胺-T法和双向电泳免疫印迹检测法对346例受试者分别测定血浆AOPPs的相对含量和血浆HDL亚类的组成及含量.按AOPPs浓度均值加或减去一个标准差作为分割点,将受试者分为3组,即低AOPPs(AOPPs≤60μmol/L)组、中AOPPs(60 μmol/L＜ AOPPs ＜90 μmol/L)组、高AOPPs(AOPPs ≥90μmol/L)组.结果 与低AOPPs组相比,高AOPPs组中preβ1-HDL及HDL3a显著增多(P＜0.001),而HDL2a、卵磷脂胆固醇酰基转移酶及HDL2b显著降低(P＜0.001),各组胆固醇酯转运蛋白无变化.相关性分析表明AOPPs与血浆HDL亚类分布存在显著相关.结论 随着血浆AOPPs水平的升高HDL颗粒有变小的趋势,AOPPs可能阻碍了HDL的成熟代谢.     

先兆子癎患者胎盘组织滋养层细胞差异表达蛋白初步研究

目的：分析先兆子癎患者胎盘组织滋养层细胞差异表达蛋白,探讨差异蛋白与疾病发生的可能关系,为研究先兆子癎发病机制奠定基础.方法：分离、纯化、鉴定5例正常妊娠妇女和5例先兆子癎患者胎盘组织滋养层细胞,液氮反复冻融研磨提取细胞总蛋白.双向电泳技术对总蛋白进行分离,银染显色,获得蛋白质图谱.用PDQuest软件进行图像分析,寻找差异蛋白.结果：正常妊娠及先兆子癎患者胎盘组织滋养层细胞总蛋白双向电泳各重复3次,得到重复性好的蛋白图谱.PDQuest软件进行图像分析发现,先兆子癎患者胎盘滋养层细胞有34种蛋白在质或量上存在表达增高或减少.结论：先兆子癎患者胎盘组织滋养层细胞中存在差异蛋白,这些蛋白在先兆子癎的发生过程中可能有重要作用.