一测多评法测定人参花中7种人参皂苷含量

目的 在同时测定人参花中7种人参皂苷含量的基础上,建立7种人参皂苷成分一测多评方法,验证一测多评方法在人参花中人参皂苷含量测定上的可行性。方法 采用HPLC-UV法,以10批不同来源的人参花药材为研究对象,以人参皂苷Re为内参物测定其与人参皂苷Rg₁、Rg₂、Rb₁、Rc、Rb₂、Rd的相对校正因子,计算出各皂苷的含量,比较计算值与外标法实测值的差异。结果 人参花中6种人参皂苷Rg₁、Rg₂、Rb₁、Rc、Rb₂、Rd的相对校正因子分别为1.07、1.05、0.81、0.80、0.64、0.84,10批药材中6种人参皂苷的相对校正因子重复性良好,含量用一测多评方法测定与采用外标法测定时的实测值差异不显著。结论 在短缺人参皂苷对照品的情况下,可采用一测多评法方法,通过相对校正因子测定人参花中人参皂苷Rg₁、Re、Rg₂、Rb₁、Rc、Rb₂、Rd的含量。     

Two new saponins from the leaves of Panax notoginseng

Two new saponins, notoginsenosides Ng1 (1) and Ng2 (2), together with seven known compounds (3–9), were isolated from the leaves of Panax notoginseng. Their structures were elucidated by UV, IR, HRESIMS, and NMR experiments. Compounds 6 and 7 showed moderate cytotoxic activities against HCT-116, with IC₅₀ values of 4.98 and 0.64 μmol/L, respectively.     

Leaf saponins of Quillaja brasiliensis enhance long-term specific immune responses and promote dose-sparing effect in BVDV experimental vaccines

Saponin-based adjuvants are promising adjuvants that enhance both humoral and T-cell-mediated immunity. One of the most used natural products as vaccine adjuvants are Quillaja saponaria bark saponins and its fraction named Quil A®. Despite that, its use has been restricted for human use due to safety issues. As an alternative, our group has been studying the congener species Quillaja brasiliensis saponins and its performance as vaccine adjuvants, which have shown to trigger humoral and cellular immune responses comparable to Quil A® but with milder side effects. Here, we studied a semi purified aqueous extract (AE) and a previously little characterized saponin-enriched fraction (QB-80) from Q. brasiliensis as vaccine adjuvants and an inactivated virus (bovine viral diarrhea virus, BVDV) antigen co-formulated in experimental vaccines in mice model. For the first time, we show the spectra pattern of the Q. brasiliensis saponins by MALDI-TOF, a novel and cost-effective method that could be used to characterize different batches during saponins production. Both AE and QB-80 exhibited noteworthy chemical similarities to Quil A®. In addition, the haemolytic activity and toxicity were assessed, showing that both AE and QB-80 were less toxic than Quil A®. When subcutaneously inoculated in mice, both fractions promoted long-term strong antibody responses encompassing specific IgG1 and IgG2a, enhanced the avidity of IgG antibodies, induced a robust DTH reaction and significantly increased IFN-ɣ production in T CD4⁺ and T CD8⁺ cells. Furthermore, we have proven herein that AE has the potential to promote dose-sparing, substantially reducing the dose of antigen required for the BVDV vaccines and still eliciting a mixed Th1/Th2 strong immune response. Based on these results, and considering that AE is a raw extract, easier and cheaper to produce than commercially available saponins, this product can be considered as candidate to be escalated from experimental to industrial uses.     

人参抗心律失常作用机制的研究进展

人参Panax ginseng作为传统中药,具有较好的抗心律失常作用。从多离子通道阻滞作用、抑制炎症反应、抑制心肌纤维化和重构以及调节自主神经方面,对近10年人参、人参皂苷及含人参的中成药抗心律失常作用机制的研究进展进行综述。为以人参为基础,探究高效、低毒的抗心律失常中药的实验研究及临床用药提供参考。     

竹节参总皂苷对妊娠期高血压胎盘滋养细胞氧化应激损伤与过度自噬的影响

目的探讨竹节参总皂苷对妊娠期高血压疾病胎盘滋养细胞氧化应激反应与自噬的影响及作用机制。方法采用100μmol/L亚硝基左旋精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methylester,L-NAME)处理人胎盘滋养细胞株HTR-8/SV-neo 48 h,并给予竹节参总皂苷(20、40、80μg/mL)干预24 h,采用CCK-8法检测各组细胞活力;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;采用试剂盒检测各组细胞上清液中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽(glutataione,GSH)水平;采用qRT-PCR和Western blotting法检测各组细胞脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein4,FABP4)m RNA和蛋白表达情况;采用Westernblotting法检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule associated protein 1 light chain 3 Ⅱ,LC3-Ⅱ)、LC3-Ⅰ、p62和自噬效应蛋白(Beclin-1)表达情况;采用免疫荧光法检测各组细胞LC3表达情况。结果与模型组比较,竹节参总皂苷组细胞活力显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.01);上清液中SOD和GSH水平显著升高(P0.01),MDA水平显著降低(P0.01);FABP4 m RNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05);LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达水平显著降低(P0.05),p62蛋白表达水平显著升高(P0.05);LC3荧光染色强度降低。结论竹节参总皂苷能够改善妊娠期高血压疾病胎盘滋养细胞中的氧化应激反应,并抑制过度自噬,其机制可能与调控FABP4表达有关。     

人参属植物高温蒸制前后人参皂苷含量的变化和细胞毒活性研究

目的研究人参属植物人参Panax ginseng、三七P. notoginseng和西洋参P. quinquefolium高温蒸制前后主要人参皂苷的含量变化,并测定高温蒸制前后样品对4株肿瘤癌细胞的细胞毒活性。方法采用HPLC建立了测定22种皂苷含量的分析方法,测定这些皂苷在人参属植物及其高温蒸制品中的含量。用MTT法测定人参属植物及其高温蒸制品对4株人类癌细胞(人类骨髓癌HL-60细胞、肝癌SMMC-7721细胞、肺癌A-549细胞、乳腺癌SK-BR-3细胞)的细胞毒活性。结果从人参、三七和西洋参及高温蒸制后的样品中鉴定出22个皂苷,包括人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd、Rk3、Rh4、Rk1、Rg5、Rb3、Rh3、Rk2,20(S)-人参皂苷Rh1、20(R)-人参皂苷Rh1、三七皂苷Fc、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷IX、20(S/R)-三七皂苷Ft1、20(S/R)-人参皂苷Rg3、人参皂苷Rs3、人参皂苷Rh2。人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2和Rd为人参的主要成分;人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd为西洋参的主要成分;人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd和三七皂苷R1为三七的主要成分,高温蒸制后这3种植物的主要成分全部转化为人参皂苷Rk3、Rh4、Rk1、Rg5和20(S/R)-人参皂苷Rg3,在高温蒸制后的三七中还检测到20(S)-人参皂苷Rh1和20(R)-人参皂苷Rh1。三七皂苷Fc、人参皂苷Rb3和绞股蓝皂苷IX为三七茎叶的主要成分,高温蒸制后转化为另外8个主要成分20(S/R)-三七皂苷Ft1,20(S/R)-人参皂苷Rg3、Rs3、Rk1、Rg5,20(S/R)-人参皂苷Rh2、Rh3和Rk2。细胞毒活性结果显示,高温蒸制三七的细胞毒活性比高温蒸制人参和高温蒸制西洋参强,高温蒸制三七的细胞毒活性比三七的活性强,说明高温蒸制后三七的细胞毒活性增强。结论人参、西洋参和三七经过高温蒸制后原来的主要成分基本消失,随之转化为其他主要成分,高温蒸制三七的细胞毒活性最强。     

三七联合现代医学常规疗法治疗脑出血术后临床研究

目的:观察三七联合现代医学常规疗法治疗脑出血术后患者的临床疗效。方法:将100例脑出血术后患者随机分成观察组和对照组各50例。2组患者均服用地奥司明片、阿司匹林肠溶片,并给予间歇充气加压装置(IPC)和常规护理措施,观察组加予三七粉鼻肠管给药。2组疗程均为7 d。治疗前、治疗7 d后评定Caprini风险评估量表评分,检测纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D)水平;记录治疗7 d后1个月内肺栓塞(PE)和深静脉血栓(DVT)的发生情况,记录皮下瘀血、下肢肿胀、下肢疼痛的发生情况。结果:治疗后,2组Caprini评分均较治疗前下降(P<0.01),观察组Caprini评分低于对照组(P<0.01)。2组PE发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组DVT发生率与静脉血栓栓塞症总发生率均低于对照组(P<0.05)。观察组皮下瘀血、下肢肿胀、下肢疼痛发生率均低于对照组,但组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2组FIB、D-D水平均较治疗前下降(P<0.01),观察组FIB、D-D水平均低于对照组(P<0.01)。结论:在常规医护措施的基础上对脑出血术后患者给予三七粉鼻肠管给药,可减轻血液高凝状态和纤溶亢进状态,降低静脉血栓栓塞的发生风险。     

基于稳定同位素指纹的春三七主根产地判别研究

研究建立春三七主根产地判别技术,为三七地理标志产品保护和溯源提供理论依据。采集广西百色片区、云南文山片区、云南新拓展片区三七主产县三年生春三七样品共44份,利用元素分析-稳定同位素质谱仪测定了其稳定性碳、氮、氢、氧同位素比率,结合Duncan多重比较分析、Fisher判别分析和逐步判别分析建立3个片区三年生春三七主根产地判别模型。3个三七产区地理气候环境具有明显的差异,从广西百色-云南文山-云南新拓展片区,经度、年均温、年降水逐渐降低,海拔、纬度呈增加的趋势。多重比较分析结果表明,3个片区春三七主根δ¹³C,δ¹⁵N,δ²H,δ¹⁸O有显著或极显著差异。Fisher判别分析和逐步判别分析结果表明,基于4种稳定同位素比率的产地判别模型,对3个产地春三七主根正确判别率分别80.05%,76.47%,90.91%,平均为84.09%。利用稳定同位素指纹特征结合化学计量学方法可以实现对春三七主根原料及产品的产地判别。     

三七总皂苷对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎诱导型一氧化氮合酶的影响

目的：探讨三七总皂苷对小鼠柯萨奇B3病毒所致病毒性心肌炎模型中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响,为病毒性心肌炎的治疗寻找新的理论依据。方法：选用近交系4～6周龄雄性BALB／C小鼠84只,随机分为3组：空白对照组（C组）24只,心肌炎组（V组）30只,治疗组（T组）30只。于病毒接种后第8天、第15天、第21天分别采血后处死小鼠并留取心脏标本,采用免疫组化法检测心肌iNOS蛋白表达,硝酸还原酶法测定血清NO含量,光镜及透射电镜观察心肌组织病理及细胞超微结构改变。结果：（1）V组和T组小鼠心肌细胞iNOS免疫组化染色表达呈阳性,c组iNOS免疫组化染色阴性;（2）T组与V组比较,心肌细胞iNOS表达在第15天及第21天明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05、P〈0．01）;（3）T组在第15天及第21天血清NO含量较V组明显降低（P〈0．05）;（4）光镜下T组炎症细胞浸润较V组轻,炎症积分在第15天及第21天明显低于V组（P〈0．05、P〈0．01）;（5）电镜下V组及T组可见肌原纤维溶解断裂,线粒体膜消失,含溶酶体丰富的单核巨噬细胞浸润,c组小鼠心肌未见上述变化。结论：三七总皂苷可降低小鼠病毒性心肌炎iNOS的表达,从而减少NO释放,可能对病毒性心肌炎有一定治疗作用。     

三七总皂甙对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的探讨三七总皂甙对血小板源生长因子刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响及其可能机制。方法运用血小板源生长因子刺激兔体外血管平滑肌细胞增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术及免疫细胞化学法观察三七总皂甙对其增殖活性、细胞周期及c-myc蛋白表达的影响。结果血小板源生长因子显著刺激血管平滑肌细胞增殖,三七总皂甙呈浓度依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖,对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖亦具有显著抑制作用;三七总皂甙作用下血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少,c-myc蛋白的表达亦降低。结论三七总皂甙对基础状态下及血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖均具有显著抑制作用,部分机制与其阻滞血管平滑肌细胞G1/G0期向S期转化以及下调c-myc基因表达有关。