缺氧缺血性脑损伤新生大鼠基质金属蛋白酶-9和紧密连接蛋白occludin的表达变化

目的 研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)mRNA及紧密连接(tightjunction,TJ)蛋白occludin mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用和意义.方法 36只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为对照组及HIBD 3h、6h、24h、48h、72h组,每组6只.观察HIBD后结扎侧大脑半球的大体形态变化,同时采用Real-time Q-PCR方法测定脑皮层组织MMP-9 mRNA和occludin mRNA的表达水平.结果 (1)新生大鼠HIBD后24～48 h结扎侧大脑半球脑水肿明显.(2)对照组大鼠MMP-9 mRNA表达水平极低(0.793 3±0.0859),在HIBD 3h组其表达开始增高(1.153 3±0.1291),24h达高峰(3.488 3±0.1759),72h仍维持较高的水平(1.6250±0.1157),与对照组比较,HIBD各时间点MMP-9 mRNA的表达均明显升高,差异有显著性(P＜0.05).(3)对照组大鼠occludin mRNA表达水平较高(21780±0.0773),在HIBD 3h组其表达开始降低(1.718 6±0.1168),24h降至最低(0.9066±0.0602),72h仍维持较低水平(1.5966±0.0799),与对照组比较,HIBD各时间点occludin mRNA的表达均明显降低,差异有显著性(P＜0.05);(4)缺氧缺血后各时间点MMP-9mRNA的表达与occludin mRNA的表达呈负相关(γ=-0.815,P＜0.05).结论 脑缺氧缺血后MMP-9表达升高,TJ蛋白occludin表达减少,提示它们可能参与了HIBD的发病过程.     

The second extracellular loop dictates Occludin-mediated HCV entry

Recent findings have implicated tight junction (TJ) protein Occludin (OCLN) as an essential factor for hepatitis C virus (HCV) to enter human hepatocytes. To gain insights into OCLN-mediated HCV entry, we created a panel of OCLN deletion mutants and found that without impairing OCLN's cell surface localization, removal of the extracellular loop 2 (EL2) from OCLN abolished both its ability to mediate HIV-HCV pseudotypes' (HCVpp) entry as well as its ability to coprecipitate HCV glycoprotein E2. Recombinant OCLN EL2, however, failed to robustly bind soluble E2 (sE2) in pull-down assays. Subsequent studies revealed that OCLN formed complex with Dynamin II, an important GTPase for endocytosis, in an EL2-dependent fashion. HCVpp, as well as cell culture grown HCV (HCVcc), was sensitive to Dynamin knockdown or inhibition. We conclude that OCLN EL2 dictates the Dynamin-dependent HCV entry. Furthermore, OCLN could function to bridge virions to Dynamin-dependent endocytic machineries.     

Occludin在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织中闭合蛋白（Occludin）的表达水平及其临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测73例NSCLC组织及其配对正常肺组织中Occludin蛋白表达水平，分析Occludin蛋白的表达差异及其与临床病理参数的相关性。结果:Occludin蛋白在肿瘤组织中的阳性表达率显著低于配对正常肺组织（P＜0.05）。Occludin蛋白的表达水平与患者性别、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学类型、Ki-67表达水平显著相关。结论:Occludin蛋白表达下调与NSCLC细胞的增殖、转移能力相关，在肿瘤进展中发挥重要作用。     

葛根芩连汤调控MMP-9/p38 MARK途径修复溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜上皮屏障功能

目的 探讨葛根芩连汤对溃疡性结肠炎（UC）小鼠肠黏膜上皮屏障功能的保护作用，并通过基质金属蛋白酶-9（MMP-9）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路探究其治疗UC的作用机制。方法 48只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组（0.3 g·kg^-1）及葛根芩连汤高、中、低剂量组（2.84，1.42，0.71 g·kg^-1）。采用3%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液构建UC小鼠模型，葛根芩连汤和柳氮磺吡啶于造模后第8天灌胃给药，连续7 d，正常组给予等量生理盐水处理。末次给药后取结肠组织，苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理变化，免疫组化（IHC）观察结肠组织紧密连接（TJ）蛋白，如闭合蛋白（Occludin），闭锁连接蛋白-1（ZO-1）的表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-1β（IL-1β），MMP-9 mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中磷酸化（p）-p38 MAPK，p38 MAPK和MMP-9蛋白的表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠体质量显著下降（P<0.01），疾病活动指数（DAI）评分显著升高（P<0.01），结肠黏膜上皮破损并可见黏膜和黏膜下层炎细胞浸润明显，Occludin，ZO-1蛋白表达显著降低（P<0.01），TNF-α，IL-1β，MMP-9 mRNA相对表达量显著升高（P<0.01），p-p38 MAPK和MMP-9蛋白表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，柳氮磺吡啶组、葛根芩连汤各剂量组小鼠体质量和DAI评分均有明显改善（P<0.05，P<0.01），结肠组织损坏明显改善，Occludin，ZO-1蛋白明显增多（P<0.05，P<0.01），TNF-α，IL-1β，MMP-9 mRNA相对表达量显著下降（P<0.01），p-p38 MAPK和MMP-9蛋白表达显著下降（P<0.01），其中葛根芩连汤各组中以中剂量组的变化最为明显。结论 葛根芩连汤能够通过抑制MMP-9和炎性细胞因子TNF-α，IL-1β的表达，阻断p38 MAPK信号通路的激活，增加TJ蛋白的表达，从而修复肠道黏膜屏障功能。     

健脾通里中药芪黄煎剂对胃切除大鼠肠上皮紧密连接的影响

目的 观察健脾通里中药芪黄煎剂对大鼠胃切除创伤模型肠黏膜紧密连接蛋白的影响,并探讨其作用机制。方法 将45只大鼠随机分为假手术组、标准肠内营养组、中药组,每组15只。假手术组大鼠仅腹壁切开,未切除胃;其余两组采用胃切除手术方案建立大鼠模型。假手术组术后正常饮食饮水,标准肠内营养组术后注射肠内营养液,中药组注射肠内营养液+中药煎剂。干预7 d后取材,透射电镜下观察大鼠肠黏膜上皮紧密连接形态及其结构的连续性和完整性,并测量肠黏膜上皮细胞间紧密连接宽度;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测紧密连接蛋白（zonula occludin-1,ZO-1）、封闭蛋白、咬合蛋白mRNA表达水平。结果 与假手术组比较,标准肠内营养组大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接宽度显著减小（P＜0.05）,小肠组织中ZO-1、封闭蛋白、咬合蛋白mRNA表达水平均显著下调（P＜0.05）;与标准肠内营养组比较,中药组大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接宽度显著增加（P＜0.05）,小肠组织中ZO-1、封闭蛋白、咬合蛋白mRNA表达水平均显著上调（P＜0.05）。结论 芪黄煎剂可以减轻胃切除术后大鼠肠黏膜上皮细胞间紧密连接的损伤,其作用机制与调节ZO-1、封闭蛋白、咬合蛋白mRNA的表达有关。     

Effect of Yang-activating and stasis-eliminating decoction from Traditional Chinese Medicine on intestinal mucosal permeability in rats with ulcerative colitis induced by dextran sulfate sodium

Objective

To evaluate the effect of decoction prepared with Yang-activating and stasis-eliminating medicinals from Traditional Chinese Medicine (TCM) on the intestinal mucosal permeability in rats with ulcerative colitis induced by dextran sulfate sodium (DSS).

大鼠Occludin基因克隆及其在肺泡Ⅱ型上皮细胞中的表达

目的 克隆大鼠紧密连接蛋白Occludin基因,构建哺乳动物表达载体.为进一步研究该基因的功能提供手段.方法 采用RT-PCR法克隆大鼠Occludin基编码序列,定向克隆法构建该基因哺乳动物表达载体.脂质体介导该栽体转染人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞,Western-blot法检测Oecludin蛋白表达.结成功克隆Occludin基因,构建pCMV-Occ哺乳动物表达载体并在A549细胞中表达.结论 pCMV-Occ载体可介导Occludin基因在人肺Ⅱ型上皮A549细胞表达.     

苯并［b］荧蒽对小鼠血脑屏障通透性及紧密连接蛋白表达的影响

目的 探讨苯并［b］荧蒽（Benzo［b］fluoranthene, B［b］F）暴露对小鼠血脑屏障通透性和紧密连接蛋白表达的影响。方法 C57BL/6J小鼠灌胃暴露于不同剂量的苯并［b］荧蒽（20、200、2 000 μg/kg）条件下21天,测定小鼠体重、脑比重变化;使用伊文思蓝染色法（Evans Blue）测定小鼠血脑屏障通透性变化;通过H&E染色检测B［b］F对小鼠脑组织的影响;采用免疫组化检测紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达。结果 在不同B［b］F暴露剂量下,小鼠体重和脑比重均无显著差异。随着B［b］F暴露剂量的增加,小鼠血脑屏障通透性增加。200 μg/kg和2 000 μg/kg染毒剂量下,海马DG区可见锥体细胞皱缩,细胞染色加深,胞核胞质分界不清。在200 μg/kg和2 000 μg/kg染毒剂量下,B［b］F降低Occludin蛋白表达（P<0.05）,而ZO-1蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 B［b］F能增加小鼠血脑屏障通透性,并降低紧密连接蛋白Occludin表达,具有潜在血脑屏障损伤毒性。     

MicroRNA-429靶向抑制occludin及对糖尿病小鼠肠上皮屏障功能的影响

 目的: 探讨microRNA-429(miR-429)在体内对糖尿病(DM)小鼠肠上皮细胞(IECs)内闭合蛋白(occludin,Ocln)表达及肠上皮屏障功能的影响。方法: 构建糖尿病小鼠模型(腹腔内注射链脲佐菌素);通过尾静脉注射antagomiRNA-429抑制DM小鼠IECs内miR-429的表达;real-time PCR检测miR-429和Ocln mRNA的表达变化;Western blotting及免疫组化检测Ocln蛋白表达变化;气相色谱法检测小鼠尿液乳果糖/甘露醇比值;显色基质鲎试剂法检测小鼠血浆LPS浓度。结果: 尾静脉注射antagomiRNA-429能显著抑制DM小鼠IECs内miR-429的表达,注射后6 d恢复至正常小鼠IECs表达水平。抑制DM小鼠IECs内miR-429表达后,Ocln表达显著提高(P<0.05),小鼠尿液乳果糖/甘露醇比值及血浆LPS水平均明显下降(P<0.05)。结论: AntagomiRNA-429能有效抑制DM小鼠IECs内miR-429的表达,进而使小鼠IECs内Ocln的表达升高,从而使肠上皮屏障功能部分恢复。     

GW0742对凝血酶诱导的体外血脑屏障破坏的保护作用

目的 探讨GW0742对凝血酶诱导的体外血脑屏障破坏的保护作用。方法 选取新生3～7日龄的SD大鼠若干,提取原代脑微血管内皮细胞（BMEC）及星形胶质细胞（AC）。于体外构建BMEC单层培养模型和BMEC+AC共培养模型,分为BMEC单层培养模型组、BMEC+AC共培养组及Blank组（只加培养基）;取体外血脑屏障（BBB）共培养模型,分为Control组和脑出血组（ICH组）,Control组加入完全培养基处理,ICH组加入40 u/mL凝血酶处理,分别处理12 h模拟体外ICH模型,并通过4 h渗漏试验、荧光素钠通透性试验评价BBB及ICH模型的通透性。另取BBB共培养模型大鼠分成5个组：Control组、ICH组,以及GW0742低、中、高剂量组（1.25、2.50、5.00μmol/L）,给药24 h后采用Western blotting检测MMP-9、ZO-1、Occludin蛋白表达。结果4 h渗漏试验结果显示：与Blank组比较,BMEC单层培养组能维持一定的液面差;与BMEC单层培养组比较,BMEC+AC共培养组能维持较好的液面差。荧光素钠通透性试验结果显示各组通透性为...