Die posteriore, lumbale, interkorporelle Fusion in unilateraler transforaminaler Technik

Zusammenfassung Operationsziel Beseitigung von schmerzhaften Wirbels?uleninstabilit?ten und Dekompression nervaler Strukturen durch interkorporelle Fusion. Wiederherstellung der Form und Wirbels?ulenfunktion. Indikationen Segmentale Instabilit?t(en) bei chronischen, therapieresistenten Lumboischialgien infolge von Diskushernie und-protrusion, Osteochondrose, Spondylolisthese oder Spinalstenose. Kontraindikationen Kyphotische und fixierte Fehlstellungen der Lendenwirbels?ule, anatomische Anomalien oder Vernarbungen im oder um das Foramen intervertebrale, Kreuzschmerzen ohne neurologische Symptome, ungünstige psychosoziale Bedingungen. Operationstechnik Einseitige ?ffnung des Foramen intervertebrale und Ausr?umung der Bandscheibe nach Teilresektion von Gelenkanteilen des kranialen und kaudalen Wirbelk?rpers. Bilaterale Distraktion zur Erweiterung des Bandscheibenfaches mit einem Schrauben-Stab-System. Implantation von autogenem Knochen und zwei metallischen Abstützk?rpern. Wiederherstellung der Segmentstabilit?t durch Kompression der dorsalen Instrumentation gegen die vorderen Abstützk?rper. Ergebnisse Von Oktober 1993 bis August 1996 wurden 191 Patienten operiert, 89 M?nner und 102 Frauen im Durchschnittsalter von 53 Jahren (zw?lf bis 82 Jahre). Diagnosen siehe Tabelle 1, fusionierte Segmente siehe Tabelle 2, intra- und postoperative Komplikationen siehe Tabelle 3. Postoperative Kontrollen nach drei, sechs und zw?lf, zum Teil nach 24 Monaten. Schmerzstatus nach Denis siehe Tabelle 5. Die besten Resultate wurden bei degenerativer Spondylolisthese und isthmischer Defektspondylolisthese erzielt. Beim Postnukleotomiesyndrom “nur” in 60% gute bis befriedigende Resultate.     

经皮脊柱内镜下可视化置钉在Endo-LIF椎弓根螺钉置钉中的应用价值

研究经皮内镜下可视化置钉在经皮内镜下后路腰椎融合术（End-PLIF）椎弓根螺钉置钉中的应用价值。方法 纳入2020年10月—2021年4月我院有腰椎融合手术指征的腰椎间盘源性腰痛、腰椎管狭窄症伴腰椎不稳、腰椎间盘突出症伴腰椎不稳、腰椎滑脱症（Meyerding分级I、II）患者共50例。50例患者随机分为甲、乙两组,每组25例。甲组的手术方式为经皮内镜下后路腰椎融合术+经皮脊柱内镜下可视化椎弓根螺钉置钉,乙组的手术方式为经皮内镜下后路腰椎融合术+传统X线透视下经皮椎弓根螺钉置钉。比较两组X线透视总次数、导丝置入时间、手术时间、术后住院时间;采用Gertzbein-Robbins标准评价置钉优良率;术前及术后24 h VAS评分和ODI指数、改良Macnab标准及术后并发症的发生率评价疗效。同时对经皮内镜下改进的置钉器械进行3D打印制造并验证其可行性、实用性。通过上述指标观察其医患X线辐射情况、微创性、置钉的优良率及手术效果。结果 全部患者均完成了手术和随访。甲组患者X线透视总次数、手术时间、导丝置入时间,均少于乙组（P＜0.05）,两组术后住院时间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。两组术前、术后24 h VAS、ODI比较差异无统计学意义（P＞0.05）,但两组术后24 hVAS、ODI均较术前改善（P＜0.05）。末次随访时,两组患者改良Macnab标准的优良率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。甲组经皮内镜置钉优良率优于乙组（P＜0.05）。两组患者术后并发症发生率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 经皮内镜下置钉能减少医患X线辐射次数,降低医患辐射暴露风险,且置钉的优良率较高;同时,3D打印的经皮内镜下置钉器械具有可行性和实用性     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白抑制狼疮肾炎患者外周血单个核细胞B7分子表达及

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA-4Ig)对活动期狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)细胞表面B7-1(CD80)和B7-2(CD86)表达的影响及其对抗双链DNA(dsDNA)抗体和免疫球蛋白产生的影响。方法将18例活动期LN患者的抗凝血标本随机分为LN的CTLA-4Ig处理组(LN-T组9例)和普通培养组(LN-NC组9例)。另以14例正常人的抗凝血标本为对照,随机分为正常人的CTLA-4Ig处理组(NC-T组7例)和普通培养组(NC-NC组7例)。用密度梯度离心法分离PBMC。处理组加入CTLA-4Ig(10ng/L)、普通培养组加入等量普通培养基37℃孵育72h后,采用流式细胞仪技术检测PBMC细胞表面B7-1和B7-2分子的表达;ELISA法检测孵育液中抗dsDNA抗体、IgG及IgM水平。结果活动期LN患者CTLA-4Ig处理组与普通培养组比较,PB-MC表面B7-2分子表达明显下降(P<0.01);B7-1分子表达无显著变化(P>0.05);孵育液中抗dsD-NA抗体、IgG及IgM的生成均明显减少(P<0.01)。而正常人的两组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CTLA-4Ig可抑制活动期LN患者的PBMC表面B7-2分子的表达,并可减少其抗dsDNA抗体、IgG及IgM的分泌。     

人CD226分子胞膜外区D1和D2真核表达载体的构建、表达和鉴定

目的 构建含有人CD226分子胞膜外区结构域1(D1)和结构域2(D2)的真核表达载体,表达并纯化重组蛋白.方法用特异性引物分别扩增CD226 D1和D2的基因,定向插入真核表达载体pSecTag2B-Fc,进行酶切和DNA测序鉴定,重组质粒瞬时转染293T细胞,收集上清,纯化蛋白及SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果利用PCR方法克隆出CD226胞膜外区D1和D2的基因,并正确插入pSecTag2B-Fc载体中,真核表达载体瞬时转染293T细胞,Western blot结果证实转染293T细胞的培养上清液中含有hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc融合蛋白,培养上清经亲和层析柱纯化,可获得较高纯度的重组蛋白.结论 成功的构建了分泌型融合蛋白hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc真核表达载体,获得纯度较高的融合蛋白,为进一步探讨其配受体的相互作用机制奠定了基础.     

Efficient generation of monoclonal antibodies for specific protein domains using recombinant immunoglobulin fusion proteins: pitfalls and solutions

Monoclonal antibody production (mAb) first requires the availability of large amounts of pure immunogen for animal immunisation and fusion screening procedures. To overcome this obstacle, we have developed a simple method for rapid generation of pure antigen by generation of recombinant protein containing the antigen of interest fused to the hinge and Fc domains of human immunoglobulin (Ig). The Fc domain forms a convenient 'tag' to enable detection of the protein in supernatant of transfected cells and for purification of immunogen by protein A affinity chromatography. The only requirement for immunogen preparation using this methodology is that a DNA sequence encoding a portion of the molecule of interest is known and that a suitable PCR template is available. Antibody production can be tailored to specific protein domains, for example functional domains, by expressing solely those domains in the fusion protein. We illustrate the technique with two different fusions used to raise antibodies against the porcine and human analogues of a complement (C) regulatory protein, decay accelerating factor (DAF) (CD55). Use of the specific Ig-fusion protein and a control protein facilitated screening of fusions by ELISA. We demonstrate two expression systems used to generate Ig fusion proteins, the first utilised a commercial vector to incorporate an amino terminal leader sequence and carboxy terminal Ig domains. Low levels of expression required subcloning into a high expression vector and resulted in yields of fusion protein at between 2 and 10 mg per litre of supernatant. The second expression system utilised the high expression vector directly, Ig domains of the chosen immunoglobulin isotype were amplified from peripheral blood mononuclear cell (PBMC) RNA and ligated into the vector in frame with DNA encoding the antigen. We describe potential pitfalls that may be encountered while using Ig fusion proteins as immunogen and demonstrate ways in which to tailor their design for optimal mAb production.     

利用比较基因组杂交技术分析横纹肌肉瘤中染色体基因组的变化特征

目的 探讨横纹肌肉瘤(RMS)基因组DNA的变化特征.方法 在一步法RT-PCR检测所有标本PAX3/PAX7-FKHR mRNA融合基因表达情况的基础上,应用比较基因组杂交技术分析25例原发性RMS患者,其中腺泡状横纹肌肉瘤(ARMS)10例,胚胎性横纹肌肉瘤(ERMS)12例,多形性横纹肌肉瘤(PRMS)3例.根据融合基因表达情况、组织学分型、临床分期、组织学分级、性别和年龄进行分组比较.同时收集RMS细胞株A204(腺泡型)、RD(胚胎型)作为对照.结果 25例RMSCGH分析结果显示:(1)RMS中发生DNA拷贝数扩增最常见的部位是2p和12q,其他依次为6p、9q、10q、1p、2q、6q、8q、15q和18q(30%),发生DNA拷贝数丢失最常见的部位是3p、11P和6p(30%).(2)ARMS扩增最常见的染色体臂是12q、2p、6、2q、4q、10q和15q(30%),缺失最常见的染色体臂是3p、6p、1q、5q(30%);ERMS扩增最常见的染色体臂是7p、9q、2p、18q和1 p、8q(30%),缺失最常见的染色体臂是11p.基因组变化在不同的组织学分类中差异无统计学意义(P0.05).(3)伴有融合基因组扩增最常见的染色体臂是12q、2、6、10q、4q和15q(30%),缺失最常见的染色体臂是3 p、6p、5q(30%);不伴有融合基因组扩增最常见的染色体臂是2p、9q、18q(30%),基因组缺失最常见的染色体臂是11p和14q(30%).12q扩增在这两组间的差异有统计学意义(P<0.05),并多见于伴有融合基因的RMS.(4)在临床分期分组中,9q扩增在Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期间差异有统计学意义(P<0.05),且多见于Ⅱ期患者.结论 (1)2p、12q、6p、9q、10q、lp、2q、6q、8q、15q、18q扩增及3p、11p、6p缺失可能与RMS发病相关;(2)12q扩增可能与融合基因相关;(3)9q扩增可能与RMS发病早期有关.     

53例慢性髓系白血病细胞遗传学和bcr/abl融合基因检测

目的了解我院慢性粒细胞白血病(慢粒)染色体变异及融合基因表达与临床诊断和分期间的关系。方法染色体制备采用骨髓或外周血短期培养法,G显带,分析核型;融合基因检测则用逆转录-聚合酶链反应法(PCR法)。结果发现慢粒急变期的染色体,除具典型的Ph染色体外,还有 8、 9、i(16)q、i(17)q、-18等其它染色体改变。bcr/ab l融合基因显示慢粒急变期的患者,同时具有165bp和90bp扩增带。结论我们宜将细胞遗传学和PCR法结合,对慢粒白血病进行检测,即有助于对其诊断、预测急变、判断疗效及预后情况的深入了解。     

人FascDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达的研究

为获得高质量及充足的Ｆａｓ蛋白，采用ＰＣＲ技术调整Ｆａｓ基因的开放阅读框架，使之与生物素化蛋白基因阅读框架一致；缺失了ＦａｓｃＤＮＡ基因的起始密码子并增加一个大肠杆菌偏性终止密码子，构建ＦａｓｃＤＮＡ和生物素化融合原核表达质粒ＰｉｎＰｏｉｎｔ－Ｆａｓ。将重组质粒转入大肠杆菌ＨＢ１０１，经５００ｍｍｏｌＩＰＴＧ在３７℃条件下诱导４ｈ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测融合蛋白在大肠杆菌得以高效表达，表达量为细菌总蛋白的１３．８％。用亲和层析树脂对生物素化融合蛋白进行亲和层析纯化，得到Ｆａｓ重组的蛋白，且表达的Ｆａｓ融合蛋白具有抗体结合活性。此蛋白的表达成功将解决Ｆａｓ膜蛋白不易提取的难题，为深入研究Ｆａｓ提供了良好材料来源     

CD80融合蛋白修饰的H22细胞激发抗肿瘤免疫

目的 探讨CD80-IgG1 Fc段融合蛋白修饰的H22细胞对淋巴细胞抗肿瘤免疫的影响.方法 应用福建省临床免疫研究所构建的CD80-IgG1 Fc段融合蛋白,修饰小鼠肝癌细胞株H22细胞,用流式细胞术检测修饰的H22细胞上CD80的表达.将修饰的H22细胞与小鼠脾细胞悬液混合后进行培养,分别应用MTT比色法、乳酸脱氢酶释放试验,检测经CD80-IgG1Fc段融合蛋白修饰的H22细胞对脾淋巴细胞增殖及其细胞毒性的影响.结果 CD80-IgG1 Fc段融合蛋白可有效地结合于H22细胞膜上(P＜0.05),融合蛋白修饰的H22细胞可明显刺激脾淋巴细胞活化增殖并增强CTL的细胞毒活性(P＜0.05).结论 CD80在抗肿瘤免疫中起着重要作用,用CD80-IgG1Fc段融合蛋白修饰的H22细胞能明显增强淋巴细胞的特异性抗肿瘤免疫,为CD80用于肿瘤免疫治疗的研究提供了实验依据,为下一步体内免疫治疗肿瘤奠定了基础.