正钒酸钠对椎间盘软骨细胞功能的抑制作用

目的探讨正钒酸钠（Sodium Orthovanadate，Na3VO4）对椎间盘软骨终板软骨细胞的作用。方法使用酶消化法培养大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞，以10、20及30umol／L不同浓度Na3VO4干预第三代软骨细胞。培养7d后，用MTT法检测软骨细胞增殖率，RT-PCR检测Ⅱ型、Ⅸ型胶原和蛋白聚糖（Aggrecan）mRNA的表达，定量RT—PCR检测PTPN1、IGFRmRNA的表达。结果与对照组比较：（1）10umol／L Na3VO4组上述各项检测指标变化不明显，差异无统计学意义；（2）20及30umol／L Na3VO4组软骨细胞增殖率下降（q=31．51，81．42，P〈0．01）、Aggrecan（q=52．09，102．55，P〈0．01）和PTPN1（q=7．67，4．74，P〈0．01）mRNA表达降低；（3）30umol／L Na3VO4组Ⅱ型胶原（q=51．46，P〈0．01）、Ⅸ型胶原（q=8．62，P〈0．01）mRNA表达降低；（4）各浓度Na3VO4组IGFRmRNA均增加（q=13．96，7．67，4．74，P〈0．01）。结论20及30umol／L Na3VO4可抑制椎间盘软骨细胞增殖，降低Ⅱ、Ⅸ型胶原、Aggrecan以及PTPN1的mRNA表达，说明Na3VO4对软骨细胞中PTPs的活性有抑制作用，从而降低了软骨细胞生物学功能。但Na3Vo4对IGFR mRNA无抑制作用，并可能有一定的促表达作用。     

软骨细胞三维支架短期固定培养实验研究

目的 :观察兔肋软骨细胞聚羟基乙酸 (polyglycolic acid,PGA)三维支架短期固定培养对软骨细胞利用率、软骨细胞长满支架所需时间及软骨细胞支架复合体厚度等影响。方法 :设 PGA支架固定组和非固定组 ,固定组 :先用鼠尾胶把 PGA支架粘附在盖玻片上 ,再往固定后的 PGA支架上滴加软骨细胞悬液 ,3～ 4天后支架与盖玻片分离。非固定组 :把软骨细胞悬液直接滴加到 PGA支架上进行复合培养。固定组和非固定组软骨细胞 PGA支架复合体培养 2周后分别行同种异体皮下移植 ,3月后取出标本 ,光镜观察软骨形成情况。结果 :固定组中 PGA支架在加培养液过程中 ,不会在培养液内漂动 ,支架内软骨细胞无大量流失现象 ;相反 ,非固定组中 PGA支架在加培养液和移动培养皿过程中 ,会在培养液内飘动或晃动 ,支架内很多软骨细胞重新漂浮至培养液中。固定组 PGA支架内软骨细胞分裂、增殖 1周时 ,软骨细胞已充满 PGA网眼 ;在非固定组 ,2周时 ,软骨细胞才长满 PGA支架内网眼。固定组软骨细胞支架复合体同种异体移植后能形成成片软骨 ;非固定组软骨细胞支架复合体移动后无软骨形成。结论 :软骨细胞 PGA三维支架短期固定培养 ,能有效减少支架内软骨细胞流失 ,缩短软骨细胞长满 PGA支架网眼的时间 ,增加软骨细胞支架复合体厚度 ,有利于组     

DNMT3A对骨关节炎软骨细胞SOX9基因DNA甲基化修饰的影响

目的 探讨DNMT3A对SOX9基因DNA甲基化修饰的影响。方法 培养正常软骨细胞和OA软骨细胞,显微镜下观察软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,qRT-PCR、Western Blot检测DNMT3A、SOX9 mRNA和蛋白表达水平,亚硫酸氢盐测序检测SOX9基因DNA甲基化状态,慢病毒沉默DNMT3A观察SOX9基因DNA甲基化修饰的变化。结果 正常软骨细胞形态规则,体积较大,数量较多,OA软骨细胞形态不规则,体积较小,数量较少。与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中DNMT3A mRNA和蛋白表达量增高（P＜0.05）,SOX9 mRNA和蛋白表达量明显降低（P＜0.05）,SOX9基因DNA甲基化百分比增高。在OA软骨细胞中沉默DNMT3A后,SOX9基因DNA甲基化百分比明显降低。结论 DNMT3A调节SOX9基因DNA甲基化修饰参与OA软骨细胞病变。     

骨关节炎软骨细胞凋亡调控基因的研究

目的　比较分析正常人及老年性骨关节炎患者软骨细胞bax和bcl 2的表达及细胞凋亡状况。　方法　取 9例骨关节炎患者的关节软骨做实验标本 ,以 6例无骨关节炎病史的意外死亡者关节软骨作为正常对照 ;采用逆转录 /聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测bax和bcl 2mRNA表达 ,免疫组化检测bax和bcl 2蛋白 ;应用TUNEL方法进行凋亡细胞原位检测。　结果　骨关节炎患者和正常对照软骨细胞都能表达bax和bcl 2mRNA ;骨关节炎关节软骨细胞baxmRNA表达量较正常对照显著增高 (P <0 0 1) ,bcl 2mRNA表达量也高于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,两组间bax/bcl 2表达量的比值差异无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;免疫组化可检测到相应表达水平的蛋白 ;骨关节炎软骨细胞凋亡 (4%～ 14% )多于正常对照 (0～ 2 % )。　结论　软骨细胞凋亡受bax和bcl 2共同调节 ;bax和bcl 2的共同调节结果可能是OA患者软骨细胞凋亡增加 ,但凋亡率不高、病理过程进展缓慢的一个重要的原因     

BMP/Smads信号传导通路在兔下颌持续前导后髁突的表达

目的：探讨免下颌持续功能前导后髁突软骨中BMP／Smads信号传导通路表达与髁突改建的关系。方法：60只8周龄的日本大耳白兔，随机分成实验组（n=36）和对照组（n=24），实验组动物每日24h戴用咬合前导矫正器。实验动物分别在第3天、1周、2周、4周、8周及12周时处死并取材，用免疫组化方法观测髁突组织内BMP-2和Smad1／5、4、6的分布和表达，并对其表达进行灰度测定。结果：BMP-2和Smad1／5、4、6主要在髁突软骨过渡层和肥大层软骨细胞中表达，钙化层的软骨细胞和成骨细胞中也可见BMP-2和Smad1／5、4、6的表达。实验组兔髁突软骨BMP-2和Smad1／5、4、6的表达强度在早期高于同期对照组（P〈0．05），与髁突骨组织改建的活跃程度同步。结论：下颌持续前导后，Smad1／5、4、6作为BMP-2的细胞内信号传导分子，与下颌髁突适应性生长改建关系密切。     

藻酸包埋异体关节软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损

目的 探讨异体关节软骨细胞作为软骨种子细胞修复关节软骨缺损的可行性。方法 无菌取成年新西兰大白兔四肢关节软骨，酶消化法分离细胞，条件培养基体外培养扩增，藻酸钙凝胶包埋培养1周，植入兔膝关节股骨髁间软骨缺损，对照组缺损旷置。术后3、6个月分别取材，观察缺损修复情况；切片特染和免疫组化观察修复组织病理，并Wakitnni评分评估修复质量。结果 7／8缺损为成熟透明软骨组织修复，1／8为纤维软骨修复；Wakitani平均评1．75分；空白对照组评7．65分。实验组3个月组标本未见淋巴细胞或白细胞浸润，6个月组标本未见明显退变；所有标本均未见藻酸残留。结论 用藻酸包埋异体关节软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损的方法是可行的，异体关节软骨细胞在适当的处理后可成为关节软骨组织工程种子细胞。