嗜黏蛋白阿克曼菌脂多糖对小鼠巨噬细胞的影响

目的 提取、鉴定嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila, AKK）的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,初步探讨AKK的LPS对小鼠巨噬细胞的影响。 方法 试剂盒法提取AKK的LPS并纯化,ELISA法定量;BCA法、紫外分光光度法、SDS - PAGE和银染鉴定提取的LPS的纯度和结构;鲎试剂法检测LPS活性。体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,分为正常对照组、大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli） LPS组和AKK LPS组。经LPS作用后,CCK - 8法检测细胞活性;RT - qPCR测定NF - κB、IL - 1β、IL - 6、TNF - α的mRNA表达水平。 结果 纯化的细菌LPS平均产率为7.14%,蛋白、核酸含量分别为0.005 6‰和2.12%;银染结果显示AKK的LPS条带分布与E.coli的LPS不同;鲎试剂测定其活性为7.10×107 EU/ml;部分干预浓度下,AKK LPS干预组细胞存活率低于E.coli LPS组;刺激6 h、12 h、24 h后,与正常对照组相比,AKK LPS干预组细胞内NF - κB的mRNA表达水平在干预6 h后显著上调,差异具有统计学意义（Z = - 3.606,P = 0.001）;两种LPS干预组的IL - 1β、TNF - α、IL - 6 的mRNA表达水平在各时间点均高于对照组。 结论 提取的AKK的LPS纯度较高,生物活性良好; AKK 的LPS干预小鼠巨噬细胞,上调相关炎症因子IL - 1β、IL - 6、TNF - α及早期核转录因子NF - κB的转录表达。     

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞Gsα和Giα蛋白亚型的影响*

目的：观察脂多糖（LPS）对大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVECs)G蛋白的影响及甲基强的松龙的干预作用。方法：用流式细胞技术（FCM）检测G蛋白亚型的变化。结果：①10μg/ml LPS作用于RPMVECs30和90min后,Gsα蛋白水平较对照组显著下降。甲基强的松龙干预30和90min后,对LPS致RPMVECs膜Gsα蛋白水平的变化有显著抑制作用。②10μg/ml LPS作用于RPMVECs30和90min后,Giα蛋白水平较对照组显著下降。甲基强的松龙干预30和90min后,对LPS致RPMVECs膜Giα蛋白水平的变化有显著抑制作用。结论：①LPS诱导RPMVECS Gsα和Giα蛋白水平的变化可能是LPS诱导RPMVECs单层通透性增加的机制之一。②甲基强的松龙参与抑制LPS诱导RPMVECs单层通透性增加的作用。     

美洲大蠊提取物对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞炎症的抑制作用

目的 探究美洲大蠊提取物对脂多糖(LPS)刺激人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)炎症的抑制作用。方法 采用原代培养法获得HPDLFs细胞,经免疫组化鉴定为牙周膜成纤维细胞。分别以600、300、150、75、37.5、18.25μg/mL美洲大蠊水提物和醇提物进行处理,采用MTT法检测12、24、36、48 h HPDLFs细胞存活率,选择合适的实验时间及剂量。建立LPS诱导牙周膜成纤维细胞炎症模型,相应剂量药物给药,RT-qPCR法检测IL-1β、IL-6 mRNA相对表达,ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS水平,Western blot法检测p-NF-κB、NF-κB、p-p38、p38蛋白表达。结果 与对照组比较,在36 h、150μg/mL剂量以下,美洲大蠊水提物、醇提物组细胞存活率随剂量升高而增加(P<0.05,P<0.01)。与LPS组比较,美洲大蠊水提物和醇提物组细胞IL-6、IL-1β mRNA表达,TNF-α、IL-6水平,p-NF-κB、NF-κB、p-p38、p38蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论 ...     

不同品系小鼠对福氏2a痢疾杆菌膜成份免疫应答的差异

用福氏2a菌（F2a)全菌作为免疫原观察8种纯系小鼠对F2a菌膜成份[LPS和外膜蛋白（OMP)]免疫应答的差异。免疫后小鼠抗血清分别是与F2a菌超声破碎抗原和经蛋白酶消化的超声破碎抗原做ELISA和免疫印迹分析，结果表明CBA／N和C57BL／6J两种小鼠只对F2a菌OMP反应。而对LPS不反应或反应很弱，因此，这两种小鼠可作为分析F2a菌OMP生物功能和制备McAb的脾细胞供体用。     

霍乱弧菌LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF的研究

本研究采用霍乱弧菌古典生物型５６９Ｂ菌株及ＥＩ-Ｔｏｒ生物型菌株，以Ｗｅｓｔｐｈａｌ的热酚-水法及高速离心等方法提取ＬＰＳ，血凝法测其效价，并比较不同菌株的ＬＰＳ刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生ＴＮＦ的情况。实验表明５６９Ｂ菌株ＬＰＳ血凝效价较高，诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生ＴＮＦ的能力较强。     

脂多糖调节TNF-α在细胞滋养细胞的表达及其临床意义

目的:探讨脂多糖对TNF-α在细胞滋养细胞表达的调节作用.方法:留取正常早孕绒毛,分离细胞滋养细胞,用无血清FD培养基培养,并给予不同浓度的脂多糖(0、25、50、100、200 ng/ml)作用24小时.然后,采用免疫荧光激光共聚焦技术和酶联免疫吸附实验检测TNF-α的表达情况.结果:脂多糖促进TNF-α在细胞滋养细胞的表达.荧光显微镜下见,脂多糖作用下的细胞滋养细胞内TNF-α的绿色荧光信号明显增强于未给予脂多糖的细胞滋养细胞.酶联免疫吸附实验证实脂多糖以剂量相关的模式促进TNF-α在细胞滋养细胞的表达.各浓度组TNF-α的含量分别为(179.95±35.58)、(334.75±74.09)、(390.36±79.14)、(447.72±27.81)和(482.37±39.14) pg/ml,各组间差异有统计学意义,P＜0.01.结论:脂多糖促进TNF-α在细胞滋养细胞的表达.     

脂多糖肺损伤CD4+T细胞及其亚型TH1、TH2细胞的凋亡

目的观察CD4     

岩黄连总碱下调miR-223表达调控人牙龈成纤维细胞增殖与凋亡的分子机制研究

目的:探讨岩黄连总碱对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞增殖与凋亡的影响及其可能作用机制。方法:体外培养人牙龈成纤维细胞,分为对照组(NC组)、Pg-LPS组、5μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS组、10μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS组、20μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS组、miR-NC+Pg-LPS组、miR-223+Pg-LPS组、anti-miR-NC+Pg-LPS组、anti-miR-223+Pg-LPS组、20μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS+miR-NC组、20μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS+miR-223组。采用EDU、流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡;RT-qPCR法检测miR-223的表达量;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)、pro-caspase-3、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)蛋白表达。结果:岩黄连总碱(5、10、20μg/ml)和下调miR-223表达可显著...     

人截断型LBP基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

目的 构建人N端截断型脂多糖结合蛋白（tLBP)基因的杆状病毒表达载体,为后续的蛋白表达及其抗内毒素保护作用研究奠定基础。方法 采用PCR技术从人全长LBP基因cDNA中扩增长度为695bp的基因片段,经pGEM-T载体亚克隆筛选和序列分析后,应用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统,基因重组和外源基因转座分别构建转移质粒pFASTBACtLBP和穿梭质粒pBac-midtLBP。结果 经PCR、琼脂糖凝胶电泳、酶切分析及序列测定,所克隆的基因片段为700bp左右的tLBP,并证实其目的基因重组载体发生了特异转座和病毒重组。结论 本实验成功克隆了tLBP目的基因片段并构建其杆状病毒表达载体。     

L—精氨酸／一氧化氮合酶途径在介导脂多糖对人肾系膜细胞增殖中的作用

目的：探讨L－精氨酸／一氧化氮合酶途径在脂多糖（LPS）对人肾系膜细胞增殖中的作用。方法：利用四甲基偶氮唑（MTT）法检测L－精氨酸对脂多糖刺激的人肾系膜细胞活力的影响;利用硝酸还原酶法测定细胞上清液中亚硝酸盐含量,推测L－精氨酸代谢产物一氧化氮（NO）对LPS刺激的人肾系膜细胞增殖的影响。结果：L－精氨酸抑制LPS刺激的人肾系膜细胞增殖;细胞上清液中亚硝酸盐含量无明显变化。结论：LPS不能刺激人肾系膜细胞产生大量NO,L－精氨酸对LPS刺激的人肾系膜细胞增殖的抑制作用与L－精氨酸／一氧化氮合酶途径无关。