心康胶囊对血管紧张素Ⅱ所致平滑肌细胞基质金属蛋白酶变化影响随机平行对照等效性研究

[目的]观察心康胶囊对血管紧张素Ⅱ所致平滑肌细胞基质金属蛋白酶变化影响。[方法]将清洁级雄性SD大鼠颈动脉放血处死,取主动脉胸段,常规细胞培养2～3周,待细胞长成致密单层后传代。选择健康雄性SD大鼠15只,笼养3 d后,按7.2g/kg心康生药材灌胃,2次/d,连续7 d,于末次给药后2～3h,股动脉放血无菌分离血清,经56℃、30min灭活后,-70℃保存备用。按随机数字表方法将细胞培养液分组,对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、卡托普利(CP)组、氯沙坦(LT)组、心康(XK)组,血管紧张素Ⅱ按不同浓度及不同作用时间进行干预,观测对VSMC MMPs影响。[结果]血管紧张素Ⅱ可诱导血管平滑肌细胞MMPs表达,MMP-9表达较MMP-1和MMP-2出现早;卡托普利、氯沙坦钾、心康对血管紧张素Ⅱ作用有明显抑制,心康更明显。[结论]心康与氯沙坦和卡托普利作用相似且更明显,心康对MMPs作用可能与RAS系统有一定关系。     

异种角膜基质的研究现状及问题

在角膜3层(上皮层+Bowman's膜、基质层、内皮层+Descemet's膜)膜中,按等量计算,基质层的免疫原性是最低的.应用脱细胞的异种角膜基质移植后,神经和基质细胞可以再生,术后未见排斥反应,植片获得透明.因此,异种角膜基质有望成为板层角膜移植的供体和组织工程角膜的载体.现就异种角膜基质的研究现状及问题综述如下.     

京尼平交联脱细胞纤维环基质/壳聚糖水凝胶与兔纤维环源干细胞的生物相容性

BACKGROUND:To improve the mechanical properties and uncontrollability of degradation of decellularized matrix, we manufactured genipin cross-linked decellularized annulus fibrosus matrix/chitosan hydrogels as annulus fibrosus tissue-engineered scaffold.     

脱细胞基质材料制备方法及在骨关节软骨损伤修复中的应用

BACKGROUND: It has been reported that tissue-engineered acellular matrix can induce and promote epithelial cells and smooth muscle cells to evolve into a part of body in vivo compared with the normal extracellular matrix. OBJECTIVE: To investigate the effect of tissue-engineered acellular matrix in articular cartilage repair. METHODS: Totally 30 New Zealand rabbits were randomly allotted to fibroid tissue and acellular matrix groups (n=15 per group), and then articular cartilage defect models, 4 mm in diameter, were established at the white rabbit femoral condyle. Acellular cartilage matrix scaffold was prepared using bovine knee cartilage, and model rats in the acellular matrix group were repaired with acellular cartilage matrix scaffold and the others in the fibroid tissue group repaired with fibroid tissues. Finally, repair effects between two groups were compared. RESULTS AND CONCLUSION: The dark blue and porous tissue-engineered acellular matrix material could be found, with a diameter of 5 mm and moderate hardness, and exhibited certain flexibility after cross-linking. Hematoxylin-eosin staining showed that cell debris, blue-stained nuclear materials and residual extracellular matrix disappeared. Toluidine blue staining found that the porosity of the blue scaffold was 90%, and the swelling ratio was (1 314±337)%. The absorbance value in the acellular matrix group was significantly higher than that in the fibroid tissue group at 1, 3, 5, 7 and 9 days (P < 0.05). In the fibroid tissue group, defects filled with newborn fibrous scars were overt. By contrast, in the acellular matrix group, the white tissues covered the defect region with smooth surface, and the wound was basically healed, with an unclear boundary after 12 weeks. Moreover, blue-stained, small flattened cells appeared, subchondral bone structure was connected well with the cartilage, and the scaffold was directly degraded. In conclusion, the tissue-engineered acellular matrix material exhibits good biocompatibility, cell adsorption and hydrophilicity, and can promote the defect repair after articular cartilage injury. Therefore, it is a suitable substitute for articular cartilage repair.     

软骨脱细胞基质-Ⅱ型胶原纳米支架复合BMSC修复兔关节软骨缺损的实验研究

目的 观察软骨脱细胞基质(Cartilage acellular extracellular matrix,CAEM)-Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,COLⅡ)纳米支架,复合骨髓基质干细胞(Bone marrow stem cells,BMSCs)修复兔关节软骨缺损的效果。方法 CAEM和COLⅡ按质量比1∶1混合,通过静电纺丝技术制备组织工程纳米支架。将第二代BMSCs种植到该支架上,培养箱内静置2 h。12只日本大耳白兔随机分为实验组和对照组,将细胞支架复合物植入实验组兔膝关节软骨缺损处,对照组仅行膝关节软骨缺损建模。12周后实验动物取材,大体观察修复效果,并行HE染色、Ⅱ型胶原染色观察。结果 大体观察见实验组软骨缺损修复良好,对照组软骨缺损处由肉芽样组织充填。HE染色显示,实验组关节软骨缺损处可见软骨陷窝形成,对照组关节软骨缺损处仅有纤维组织充填。实验组修复区Ⅱ型胶原染色为阳性,对照组为阴性。结论 CAEM-COLⅡ纳米支架复合BMSC,对兔关节软骨缺损具有较好的修复能力,具有潜在的临床应用价值。     

增强型绿色荧光蛋白标记兔脂肪干细胞体外复合膀胱黏膜下层的生长特性

背景:绿色荧光蛋白作为细胞示踪标记已得到广泛应用,作者所查尚未见到以增强型绿色荧光蛋白作为标记方法用于研究脂肪干细胞与膀胱脱细胞基质复合后体外生长特性的报道.目的:利用绿色荧光蛋白标记兔来源的脂肪干细胞,观察其作为种子细胞复合膀胱脱细胞基质体外培养的生长特性,为复合物回植体内时间提供参考.设计、时间及地点:细胞标记示踪实验,于2009-01/05在上海组织工程研究与开发中心及上海第六人民医院实验动物房完成.材料:取2只新西兰大白兔,制备膀胱脱细胞基质.取2只新西兰大白兔脂肪分离脂肪干细胞.方法:体外培养增殖后脂肪干细胞转染增强型的绿色荧光蛋白,转染前后根据增殖速度,绘制生长曲线.然后将增强型绿色荧光蛋白转染的第3代脂肪干细胞以30×106的浓度接种于1 cm×1 cm大小的膀胱脱细胞基质支架材料上培养.主要观察指标:观察细胞转染后的生长特性,检测复合后的细胞总数,荧光显微镜观察复合后细胞形态.结果:脂肪干细胞经转染后生长增殖速度未受明显影响.细胞DNA检测示复合培养7 d细胞增殖状态最佳.荧光显微镜观察显示培养7 d细胞增殖良好,10 d后呈现老化形态.结论:增强型的绿色荧光蛋白转染不影响脂肪干细胞传代、增殖.脂肪干细胞-膀胱脱细胞基质复合物体外培养7 d左右回植较合适.     

冷冻后真空抽干膀胱脱细胞基质的生物相容性

背景:膀胱脱细胞基质因其制作工序简单,具有良好的生物相容性及细胞黏附性,越来越多的被应用在组织工程生物支架方面.目的:验证冷冻后真空抽干的膀胱脱细胞基质的牛物学特性.设计、时间及地点:生物材料相容性实验,于2008-05/11在上海组织工程研究与开发中心实验室及上海第六人民医院实验动物房完成.材料:取2只新西兰大白兔,制备膀胱脱细胞基质.方法:正中切开兔膀胱,仔细剥下膀胱黏膜层,置入三蒸水中浸泡24 h.放入含0.1%的聚乙二醇辛基苯幕醚及0.15%氨水的脱细胞液中,定期更换脱细胞液,浸泡14 d.对照组为直接体积分数为75%的乙醇浸泡保存,实验组为-80℃冷冻24 h后真空抽干24 h,体积分数为75%的乙醇浸泡保存.主要观察指标:分别通过苏木精一伊红染色、Masson染色、扫描电镜及力学测定研究其理化件质;采用兔膀胱平滑肌细胞作为种子细胞,通过细胞黏附实验、细胞活力测定(MTT法)、皮下埋植实验对2种膀胱脱细胞基质的各种生物学特性进行评价比较.结果:苏木精-伊红染色及Mason染色显示2种膀胱脱细胞基质无细胞成分残留,保持较完整的胶原成分:电镜扫描表面均呈裂隙状结构,以胶原为主,适合细胞黏附;力学检测实验组膀胱脱细胞基质保持了原来膀胱脱细胞基质的力学特征,且具有史好的拉伸率;MTT法测定细胞毒性均为0级;与膀胱平滑肌细胞均有良好的黏附性:兔皮下埋植1个月,均与皮下组织黏附良好,有肌肉黏附及血管增生.结论:经冻干后真空抽干的膀胱脱细胞基质具有良好可操作性及拉伸率,且保持了原有的生物相容性,制作简单,是理想的组织工程生物支架.     

灌注法制备大鼠全肾脏脱细胞基质的研究

目的 探讨灌注法制备大鼠全肾脏脱细胞基质(ACM)支架的可行性.方法 取12周龄的Wistar大鼠的肾脏,保留输尿管、肾静脉及肾动脉,沿肾动脉插入留置针建立灌注通道.灌注压强为100 cmH2O,依次灌注肝素化PBS溶液,1%十二烷基磺酸钠(SDS)溶液,去离子水,1%TdtonX-100溶液以及含青链霉素的PBS溶液.经脱细胞处理后,采用HE染色法光镜观察及扫描电镜观察支架微观结构,DAPI染色法荧光显微镜观察残留细胞核成分.结果 所有经SDS及TritonX-100联合处理后的脱细胞基质支架在HE染色光镜观察下未发现细胞残留,扫描电镜观察仪见基膜及胶原蛋白等细胞外基质形成网状结构而无细胞,DAPI染色荧光显微镜观察未见DAPI与细胞核结合后所发出的强荧光.结论 灌注法用于制备大鼠全肾脏脱细胞基质支架,简便可靠,该支架无细胞成分残留,是一种理想的细胞支架.     

牛心包组织工程心脏瓣膜支架脱细胞方法的比较

目的对比去污剂-酶消化法、胰蛋白酶消化法和去氧胆酸钠法去除新鲜牛心包组织上细胞的效果和保护基质的能力，为组织工程心脏瓣膜的构建提供较满意的平台。方法应用3种方法处理新鲜牛心包组织，用光学显微镜、扫描电镜观察脱细胞效果和胶原纤维、弹力纤维改变；用热皱缩实验、拉力测试观察基质的物理性能变化；用DNA抽提比较脱细胞前后细胞数量差异。结果3种方法均能完全去除细胞，与去污剂-酶消化法比较，另2种方法对基质破坏明显。结论去污剂-酶消化法脱细胞效果好，且有良好的保护基质的能力。     

采用肌卫星细胞及异种无细胞基质构建组织工程膀胱的研究

目的探讨应用组织工程膀胱进行膀胱替代修复的可行性。方法采用自体肌卫星细胞（MDSC）和猪膀胱无细胞基质（PBAM）构建兔组织工程膀胱。应用Percoll非连续密度梯度离心法分离纯化培养兔MDSCs，采用去污剂洗涤法对新鲜猪膀胱进行脱细胞处理获得PBAM。MDSCs接种于PBAM表面并进行短暂体外培养，获得组织工程膀胱。雄性新西兰兔行膀胱大部分切除术，分别采用PBAM及构建的组织工程膀胱进行替代修补，每组6只，1、4、8、12周后进行膀胱造影并取材观察修复组织再生情况。结果非连续密度梯度离心法所得细胞纯度〉90％。酶消化法能有效去除膀胱中细胞成分，光镜及电镜观察无细胞成分残留，细胞毒性测定为1级，细胞相容性好。1周后所构建组织工程膀胱修补吻合区生长良好，12周后修补区组织结构基本接近正常膀胱。容积达到正常膀胱的80％，2组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论采用MDSC及PBAM构建的组织工程膀胱是理想的膀胱替代修补材料。