银杏外种皮多糖对SGC-7901细胞p53基因的表达及端粒酶活性的影响

目的　研究银杏外种皮多糖对人胃癌SGC 790 1细胞 p5 3基因表达及端粒酶活性的影响。 方法　应用免疫组织化学ABC法检测 p5 3基因的表达 ;应用TRAP ELISA法检测端粒酶活性。结果　银杏外种皮多糖 (80～ 16 0mg·L-1,4 8h)能抑制人胃癌SGC 790 1细胞突变型 p5 3基因的表达及其端粒酶活性。结论　银杏外种皮多糖抑制SGC 790 1细胞增殖的作用机制可能与其下调突变型 p5 3基因的表达和对端粒酶活性的抑制作用有关     

半边旗多糖对人肺腺癌细胞株SPCA-1凋亡和端粒酶的影响

目的研究半边旗多糖对人肺腺癌细胞系SPCA-1的诱导凋亡作用和对端粒酶活性及亚单位mRNA表达的影响。方法用MTT法、流式细胞术、细胞形态学等方法观察半边旗多糖对SPCA-1细胞的诱导凋亡作用，TRAP-ELISA法测定端粒酶活性，RT-PCR观察端粒酶亚单位mRNA的表达。结果半边旗多糖对SPCA-1细胞有较强的抑制作用，具明显的时间和剂量效应(0．09375-3mg／ml,24h-72h)；可使G0／G1期比例明显升高．G2／M期比例下降、S期先降后升；细胞形态变化较大，有凋亡细胞出现；端粒酶活性明显下降；端粒酶亚单位TP1和hTRTmRNA无明显变化．hTERTmRNA表达减少。结论半边旗多糖可能通过影响细胞周期时相分布、诱导凋亡以及下调端粒酶hTERTmRNA表达，降低端粒酶活性而抑制SPCA-1细胞增殖。     

冬凌草甲素对K562细胞端粒酶活性调控及细胞周期的影响

目的研究冬凌草甲素(ORI)对K562细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响。方法免疫细胞化学法测定K562细胞中hTERT和C-myc蛋白的表达；TRAP-PCR-ELISA法检测了端粒酶活性变化；流式细胞仪测定细胞周期各时相百分比。结果用3.43 μmol·L^-1 ORI作用于Ｋ562细胞48 h后，hTERT和C-myc蛋白的表达降低；在一定的浓度范围内，ORI可下调K562细胞端粒酶活性。同时细胞周期各时相分布发生变化，G₀/G₁期或G₂/M期细胞增多，S期细胞减少。结论ORI可下调K562细胞的端粒酶活性，其机制可能与其细胞周期阻滞作用及抑制hTERT和C-myc蛋白的表达有关。     

尼美舒利对食管癌细胞株ECa-109端粒酶活性的影响

目的：研究特异性COX-2抑制剂尼美舒利对食管癌细胞株ECa109端粒酶活性和凋亡的影响，为特异性COX-2抑制剂运用于食管癌的防治提供新的理论依据。方法：采用人食管癌细胞株ECa109作为研究对象，体外药物敏感实验(MTT)检测不同浓度和作用时间的尼美舒利对细胞的增殖抑制效应和凋亡的影响，用PCR-ELSIA半定量法检测细胞端粒酶活性。结果：尼美舒利对人食管癌细胞株的杀伤率和诱导细胞产生凋亡的强弱具有时间和计量依赖性，同时能显著抑制细胞的端粒酶活性，并呈计量依赖关系。结论：尼美舒利能抑制食管癌细胞株ECa109的端粒酶活性，从而促进细胞凋亡，产生抗肿瘤的作用。     

喉癌及癌旁组织端粒酶活性检测在喉癌手术切缘定界中的意义

目的探讨喉鳞状细胞癌、相应癌旁切缘组织的端粒酶活性表达及其在喉癌手术定界研究中的意义.方法采用多聚酶链反应-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)对47例喉鳞状细胞癌、21例不同距离的相应癌旁组织、20例喉炎性息肉组织的端粒酶活性进行定量检测.结果47例喉癌组织中39例端粒酶呈阳性(83%),而20例喉炎性息肉组织端粒酶均为阴性,两组具有显著性差异(P＜0.001).21例癌旁5 mm处的切缘组织中有6例端粒酶呈阳性(28.6%),但其活性水平均低于相应原发肿瘤组织.而10 mm处的切缘组织端粒酶均呈阴性,两组差异有显著性(P＜0.001).结论端粒酶在喉癌组织中有较高的表达,在不同距离的癌旁切缘组织中有不同程度的表达.喉癌及癌旁组织端粒酶活性可能作为预测喉癌浸润性的指标.可望从分子水平评估喉癌手术的切缘状态,以期为指导喉癌手术分子定界提供客观而有价值的资料.     

肿瘤端粒酶靶向腺病毒载体的表达活性

目的　构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体 ,研究其介导目的基因在肿瘤细胞内的定向表达能力。方法　将端粒酶逆转录酶 (hTERT )启动子克隆入质粒 pDC3 12的多克隆位点构成外源基因表达盒 ,在基因表达盒上下游分别插入 1个绝缘子序列 ,构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体pSG TPE ;采用Luciferase报告基因进行hTERT启动子的活性分析 ;以pSG TPE携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因 ,重组腺病毒AdTPE EGFP ,观察其介导EGFP在肿瘤细胞内的定向表达能力 ,并与CMV启动子控制的腺病毒AdCMV EGFP作对照。结果　hTERT启动子在正常细胞内几乎没有活性 ,而在肿瘤细胞内的活性与SV 40启动子相近。腺病毒AdTPE EGFP能介导EGFP在肿瘤细胞内定向而稳定表达 ,在正常细胞内不表达 ,而对照腺病毒AdCMV EGFP在肿瘤和正常细胞内均表达EGFP。结论　靶向端粒酶阳性肿瘤的腺病毒载体 pSG TPE ,不但提高了对基因表达调控的特异性 ,而且降低了对正常细胞毒性作用。绝缘子的应用隔断了外源基因表达盒和病毒基因表达调控序列之间的互相干扰 ,进一步提高目的基因的表达效率。该载体对肿瘤的靶向基因治疗具有重要的应用价值。     

三磷酸腺苷氯化镁对肺癌细胞(A549)端粒酶活性的影响

目的:探讨三磷酸腺苷氯化镁(ATP-MgCl2)对肺腺癌细胞的影响及其作用机理.方法:采用连续细胞记数方法观测ATP-MgCl2对A549肺腺癌细胞生长的抑制情况,应用端粒重复序列扩增法(TRAP)观察ATP-MgCl2对癌细胞端粒酶活性的影响,并与ATP作对比.结果:ATP-MgCl2显著抑制癌细胞生长(P＜0.01),且使大量癌细胞死亡,而加药后前两天ATP-MgCl2的抑制、杀伤癌细胞程度较ATP明显(P＜0.05).ATP-MgCl2组和ATP组的端粒酶阳性表达率明显低于对照组(P＜0.01),而前两者间无明显差异(P＜0.05).结论:ATP-MgCl2对肺腺癌细胞有抑制、杀伤(细胞毒)作用.其抗癌作用机理与ATP相似,与抑制癌细胞端粒酶活性有关.MgCl2与ATP结合形成一种活性复合物,增强了ATP的抗癌作用,ATP-MgCl2具有较好的临床应用价值.     

乳腺肿物hTERT蛋白表达与激素受体的相关研究

近年来人类已证实端粒酶hTERT基因在干细胞及肿瘤细胞中比正常细胞高表达,其活性被认为与癌细胞永生化有关.因此它和肿瘤相关[1-3].但仅限于基因方面的研究,关于端粒酶蛋白与乳腺癌的研究鲜见报道.为了探讨乳腺癌及乳腺增生病变hTERT蛋白表达情况及其与激素受体的关系,研究其对乳腺癌诊断,预后的临床意义,我们用免疫组化方法分析了148例乳腺癌,癌前病变及良性病变中的hTERT蛋白的活性表达,并与hTERT基因及p53,ER,PR蛋白表达进行比较.     

反义端粒酶PNA对肺癌细胞株生长的体外抑制作用

目的　探讨反义端粒酶肽核酸 (PNA)片段对肺癌细胞株端粒酶活性及细胞株生长的抑制作用。方法　将人工合成的端粒酶反义PNA片段 ,应用脂质体转染法将反义端粒酶序列导入肺腺癌细胞株A5 49及小细胞癌细胞株NCI H44 6中 ,采用MTT法检测活细胞数 ,采用RT PCR ELLISA法检测端粒酶活性。结果　转染 72h后 ,A5 49、NCI H 44 6细胞株端粒酶活性 (A45 0值 )分别由 0 .5 82± 0 .0 3 9和 0 .5 71± 0 .0 43降低至 0 .2 94± 0 .0 48(P <0 .0 1)和 0 .2 76± 0 .0 5 1(P <0 .0 1) ;而两细胞株的活细胞数 (A5 80值 )分别由 0 .485± 0 .0 0 9和 0 .5 13± 0 .0 15降低至 0 .191± 0 .0 2 7(P <0 .0 1)和 0 .13 8± 0 .0 46(P <0 .0 1) ,细胞生长受到显著抑制。结论　反义端粒酶PNA片段具有抑制肺癌细胞株端粒酶活性的作用 ,并可抑制肺癌细胞的生长     

一种新型增殖型腺病毒治疗肝癌的体外研究

目的评价增殖腺病毒 CNHK500对肝癌细胞的治疗效果。方法利用病毒增殖实验、细胞活力实验(MTT)、蛋白印迹分析来检测增殖病毒 CNHK500在端粒酶阳性的肝癌细胞株 HepGⅡ、Hep3B、SMMC7721及正常细胞中选择性增殖和溶解细胞的特性。结果 CNHK500感染人肝癌细胞株 HepGⅡ、Hep3B、SMMC7721细胞后大量增殖,在感染后96小时增殖倍数分别为52000、396984.9和632911.3倍,同野生型5型腺病毒(wtAd5)类似。然而在正常细胞中,CNHK500的增殖能力较 wtAd5大大减弱,感染96小时后仅增殖3.1～100倍,而 wtAd5却高达3160～17357倍。MTT 实验观察到在肝癌细胞 HepGⅡ和 Hep3B 中,感染后第7天达到半数杀伤的 MOI 值(IC50)分别为2和0.01,而在正常成纤维细胞 BJ 细胞中却高达1000。在常氧情况下,用蛋白印迹可在肿瘤细胞中检测到腺病毒 E1A 蛋白的表达,但在正常细胞却检测不到。E1B 蛋白仅在缺氧条件下(0.1%O_2)的肿瘤细胞中表达。结论实验结果表明 CNHK500能有效地选择性在肝癌细胞中增殖、复制、杀伤,而在正常细胞中增殖和溶解细胞能力却大大减弱。联合治疗基因,CNHK500可能为肝癌的治疗提供一种新的策略。