左归丸、右归丸对失眠和多睡模型大鼠血浆中单胺类神经递质的影响

目的探讨左归丸、右归丸改善睡眠失衡状态的可能作用机制。方法 25只SD大鼠随机分为正常对照组、失眠模型组、多睡模型组、左归丸组、右归丸组,每组5只。失眠模型组和左归丸组大鼠给予中缝背核内微量注射1A型5-羟色胺(5-HT1A)受体阻断剂WAY 100635建立失眠模型,多睡模型组和右归丸模型组大鼠微量注射5-HT1A受体激动剂8-OH-DPAT建立多睡模型,正常对照组中缝背核微量注射等量的生理盐水,连续3天。于末次注射2h后左归丸组大鼠给予左归丸溶液17.5 g/(kg·d)灌胃,右归丸组给予右归丸溶液18.5 g/(kg·d)灌胃,其余3组大鼠给予10 ml/(kg·d)蒸馏水灌胃,每天1次,共7天。采用高效液相谱法检测各组大鼠血浆中单胺类神经递质多巴胺(DA)、二羟基苯乙酸(DOPAC)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量,并计算5-HIAA/5-HT。结果与正常对照组比较,失眠模型组大鼠血浆DA、DOPAC、5-HIAA含量及5-HIAA/5-HT升高(P<0.01);多睡模型组大鼠血浆DA、DOPAC、5-HIAA含量及5-HIAA/5-HT降低(P<0.05或P<0.01)。与失眠模型组比较,左归丸组大鼠血浆DA、DOPAC、5-HIAA含量及5-HIAA/5-HT均降低(P<0.05或P<0.01);与多睡模型组比较,右归丸组大鼠血浆DA、DOPAC、5-HIAA含量及5-HIAA/5-HT升高(P<0.05)。各组大鼠血浆5-HT含量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论左归丸能有效降低失眠大鼠兴奋性神经递质,右归丸能有效升高多睡大鼠兴奋性神经递质,二者可能通过平衡神经递质改善睡眠失衡状态。     

沉默Cx43基因对左归丸促MC3T3-E1细胞分化作用的影响

目的:研究沉默Cx43基因对左归丸含药血清促MC3T3-E1细胞分化作用的影响。方法:采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默Cx43基因,将培养细胞分为正常对照A组、含药血清B组、基因沉默C组。细胞培养第3、5、7、9天进行ALP活性测定、第21天矿化结节茜素红染色,进行组间对比。结果:左归丸含药血清可以促进MC3T3-E1细胞的分化,与A组比较:ALP活性增强,其中第5、7、9天差异显著(P0.05);茜素红染色面积增加(P0.01)。C组与B组比较:ALP活性降低,其中第7、9天差异显著(P0.05);茜素红染色面积明显减少(P0.05)。结论:沉默细胞Cx43基因导致左归丸含药血清促MC3T3-E1细胞分化作用明显下降。     

左归丸含药血清对MC3T3-E1细胞分化过程中Cx43表达及GJIC功能的影响

目的:研究左归丸含药血清对培养MC3T3-E1细胞分化成熟过程中Cx43表达及GJIC功能的影响。方法:胰蛋白酶消化法传代培养MC3T3-E1细胞,通过血清药理学方法,设立正常对照组、左归丸组(5%、10%、15%)。分别用RT-PCR、Western blot法检测培养细胞第7、14、21天Cx43mRNA、蛋白表达;第21天划痕染料标记示踪法检测细胞GJIC功能。结果:随着培养时间增加,各组MC3T3-E1细胞Cx43mRNA、蛋白表达逐渐增强;GJIC染料标记检测中,可见绿色荧光在划痕两侧扩散,荧光定量分析存在组间差异。各浓度左归丸含药血清均可促进培养细胞的Cx43mRNA和蛋白表达、增强GJIC功能,并与含药浓度正性相关,其中以10%组作用最显著(P0.05或P0.01)。结论:左归丸含药血清能增强MC3T3-E1细胞Cx43mRNA、蛋白表达及GJIC功能,这可能是其促进MC3T3-E1细胞分化成熟的重要机制之一。     

唑来膦酸联合左归丸在预防人工全髋关节置换术后假体无菌性松动中的应用

目的:探讨唑来膦酸联合左归丸对人工全髋关节置换(total hip arthroplasty,THA)术后假体无菌性松动的预防效果及其安全性。方法:2012年7月至2013年7月,采用唑来膦酸联合左归丸对27例接受单侧THA治疗的老年股骨颈骨折患者进行术后干预。男11例,女16例;左侧13例,右侧14例;年龄(66.28±4.36)岁。术后第5天,唑来膦酸注射液静脉滴注1次;术后1周开始采用左归丸加减水煎口服,每日早晚各1次,30 d为1个疗程,共服6个疗程。用药期间严密观察患者生命体征,监测血常规、尿常规、心电图及肝、肾功能,并观察记录患者有无发热、肌肉酸痛等流感样不良反应。分别于术后半年、术后1年采用双能X线骨密度仪测量患侧髋关节骨密度,对股骨假体周围骨密度进行定量分析。观察有无假体松动发生。并分别于术前、术后3个月、术后1年依据Harris髋关节功能评分标准评价患髋功能。结果:27例患者顺利完成治疗,均获随访,随访时间1年。股骨假体周围骨密度T值,术后半年(0.65±0.03),术后1年(0.76±0.05)。均无假体松动发生。Harris髋关节功能评分,术前(15.2±3.4)分,术后3个月(75.6±6.2)分,术后1年(92.5±8.8)分。用药期间血常规、尿常规、心电图及肝、肾功能均未见异常。注射唑来膦酸注射液后出现发热、肌肉酸痛等不良反应3例,经补液及对症处理后症状好转。结论:股骨颈骨折THA术后联合应用唑来膦酸和左归丸,可减少股骨假体周围骨量的丢失,预防假体松动,有利于术后髋关节功能的恢复。     

老年大鼠学习记忆相关基因egr1表达变化的机制及补肾益气方药的调整作用

目的探讨DNA甲基化老年大鼠学习记忆相关基因egr1表达变化的机制及补肾益气方药——左归丸、益气聪明汤的调整作用。方法以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,随机分为老年对照组、老年补肾组、老年益气组、老年合剂组和老年拮抗组,另设一组青年对照组(5月龄)。采用RT-PCR法及Western印迹法观察大鼠学习记忆相关基因egr1 mRNA和蛋白表达变化,采用亚硫酸氢盐转化结合高通量测序法检测基因egr1启动子区甲基化状态,同时观察补肾益气方药对上述指标变化的调整作用。结果与青年对照组相比,老年大鼠egr1基因mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),其启动子区甲基化增高,左归丸、益气聪明汤能不同程度地改善egr1的表达,并降低egr1启动子区甲基化率。结论补肾益气方药改善老年大鼠增龄性学习记忆退化可能与抑制基因egr1启动子DNA甲基化而提高egr1的表达有关。     

脑络欣通和左归丸药物血清体外培养神经干细胞的增殖与分化

BACKGROUND:Because of limited source and a relatively weak ability of differentiation and proliferation, how to take positive and effective measures to promote neural stem cell proliferation, differentiation has become the focus of research. OBJECTIVE:To investigate the effects of drug-contained sera of Naoluo Xintong versus Zuogui pill on the proliferation and differentiation of in vitro cultured rat neural stem cells. METHODS:Embryonic neural stem cells of Sprague-Dawley rats were isolated and cultured in vitro, and then were co-cultured with the serum medium containing 10% Naoluo Xintong and 10% Zuogui pill, respectively. Comparative observations were performed between two groups by inverted microscope and immunofluorescence staining. RESULTS AND CONCLUSION:Under the inverted microscope, the cells began to grow in cluster and gather into a ball, but the diameter was relatively small after 24-hour culture; the neurospheres expended further, with relatively regular shape, but no neurosphere differentiation appeared after 48 hours of culture. The average prominent length of the neurospheres in the Zuogui pill group was significantly greater than that in the Naoluo Xintong group after 5 days of culture (P < 0.05). The rate of rat neural stem cells differentiating into MAP-2-positive cells in the Zuogui pill group was significantly lower than that in the Naoluo Xintong group (P < 0.05), but the rate of differentiated cells positive for glial fibrillary acidic protein in the Zuogui pill group was significantly higher than that in the Naoluo Xintong group (P < 0.05). After 48 hours of culture, neurospheres were cultured in the different drug-contained media, and 12 hours later, the neurospheres adhered to the wall, and a small amount of cell migration occurred. Then, cell migration began to increase with time. Under the immunofluorescence staining: prominent neurons with long protrusions were increased in both two groups, but there were no significant differences in the proportion of neurons and astrocytes between two groups (P > 0.05). These findings suggest that drug-contained sera of Naoluo Xintong and Zuogui pill can both not only promote the proliferation and differentiation of in vitro cultured rat neural stem cells, but also provide a suitable microenvironment for neural cell proliferation. Additionally, there are significant differences between the two drugs. Consequently, it is feasible to induce neural cell proliferation and differentiation by Naoluo Xintong and Zuogui pill.     

左、右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化中TGF-β1 mRNA的影响

目的:研究左、右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用.方法:将28只大鼠随机分为4组,分别以左归丸(ZGW)、右归丸(YGW)、阳性对照药戊酸雌二醇片(estradiol valerate tablets,EVT)和蒸馏水给大鼠灌胃,各组灌胃剂量分别为18.9,20.52 g·kg-1,0.36 mg· kg-,1.0 mL·kg-1,日2次,于第4天给药2h后,腹主动脉取血,离心,56℃水浴灭活30 min后,大鼠含药血清制备完成.再配制10％各组含药血清的α-MEM分别加入诱导剂(YDJ)(10-7mol· L-1地塞米松、50μmol· L-维生素C、10 mmol·L-1β-甘油磷酸钠)与单纯诱导剂组共5组对BMSCs(1×105/L)进行干预9d,用Westernblot法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原(type Ⅰ collagen,COL Ⅰ)蛋白表达,用RT-PCR法检测转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-1)mRNA表达.结果:Control组比较:ZGW+ YDJ组、YGW+ YDJ组、EVT+ YDJ组均可促进BMSCs的ALP,COLⅠ蛋白的表达,上调BMSCs TGF-β1 mRNA表达(P＜0.05);与YDJ组比较:ZGW+ YDJ组、YGW+ YDJ组可促进BMSCs的ALP,COL Ⅰ蛋白的表达,上调BMSCs TGF-β1mRNA表达(P＜0.05);且ZGW+ YDJ组优于YGW+ YDJ组(P＜0.05).结论:左、右归丸含药血清能协同诱导剂促进BMSCs成骨分化,且左归丸组更为有效,表明中医“滋肾阴”对BMSCs的成骨诱导更为有效.     

中西医结合治疗崩漏50例

目的观察中西医结合治疗崩漏的临床疗效。方法将90例患者分中西医结合治疗组50例和对照组40例。结果中西结合治疗组总体疗效优于单用西医治疗组。结论中西结合治疗比单用西医治疗疗效好。     

低出生体重小鼠模型制备及左、右归丸对其骨髓细胞数量及功能的影响

目的:研究左、右归丸对先天之精不足之低出生体重小鼠骨髓细胞数量及功能的影响,探究左、右归丸补肾作用的生物学实质。方法:通过孕鼠饥饿法得到低出生体重小鼠,仔鼠自5～10周,分别灌胃左、右归丸后,检测骨髓有核细胞数、骨髓各系造血祖细胞集落产率、骨髓基质细胞粘附能力并与正常和灌胃生理盐水及未灌胃组比较。结果:模型组新生仔鼠体重极显著低于正常组新生仔鼠;各模型组的骨髓有核细胞数均低于正常小鼠;右归丸组的骨髓有核细胞数量显著高于生理盐水组;模型小鼠各组的CFU-GM、CFU-E、BFU-E祖细胞集落产率和生理盐水组、空白组的CFU-Meg集落产率均极显著低于正常小鼠;右归丸组CFU-GM集落产率、左归丸CFU-E、CFU-Meg集落产率分别高于生理盐水组;基质细胞体外培养的7、14、21天,空白组和生理盐水组的基质细胞黏附能力均显著低于正常组,在第7天,左、右归丸组基质细胞黏附能力均显著低于正常组、显著高于模型空白和模型盐水组;在14天和21天时,左右归丸组与正常组相比无差异;且在14天时,右归丸高于生理盐水组;在21天时,左、右归丸组均高于生理盐水组。结论:孕鼠饥饿法得到的低出生体重小鼠骨髓细胞数量和部分功能显著低于正常小鼠,左、右归丸能不同程度、不同角度地促进低出生体重小鼠骨髓细胞数量提高和功能恢复。这可能是左、右归丸对先天之精不足小鼠发挥"补肾"作用的途径之一。     

左归丸通过线粒体途径抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡

目的:观察左归丸对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的保护效应,探讨其作用机制是否与其干预线粒体途径有关。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)成骨细胞MC3T3-E1氧化应激模型,实验分为空白组,t-BHP组,左归丸+t-BHP组,补佳乐+t-BHP组。孵育24,48,72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对t-BHP诱导MC3T3-E1细胞存活的影响;孵育48 h后,采用吖啶橙溴乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡,采用Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化,采用罗丹明123荧光染色法观察线粒体膜电位的改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法分析线粒体蛋白家族B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,t-BHP组显著抑制细胞增殖(P0.05,P0.01),细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显下调(P0.01);与t-BHP组比较,左归丸加t-BHP组促进暴露于t-BHP诱导的MC3T3-E1氧化损伤细胞的存活(P0.01),48 h者尤佳,逆转细胞凋亡情况,提高细胞线粒体膜电位,上调Bcl-2蛋白表达(P0.05),抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:左归丸含药血清能够抗t-BHP诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,其作用机制可能与其干预线粒体途径有关。