Survivin反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞凋亡的诱导效应

目的：利用骨肉瘤OS-732细胞，探讨survivin反义寡核苷酸（ASODN）对survivin基因表达的影响及其诱导肿瘤细胞凋亡的效应。 方法: 设计合成特异性靶向survivin的ASODN，以不同浓度和时间对OS-732细胞进行转染，并设空白、正义（SODN）对照组进行比较。采用RT-PCR、Western blotting、免疫细胞化学技术检测各组OS-732细胞中survivin mRNA、蛋白表达状态，吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡水平和形态变化，MTT法检测细胞生长抑制情况，激酶活性测定法检测细胞中caspase-3活性程度。 结果: 转染ASODN各组OS-732细胞survivin mRNA和蛋白表达均明显弱于空白对照组、SODN组；细胞凋亡率（AI）显著增加，细胞生长相应受抑，caspase-3活性显著提高；上述效应在ASODN各组存在一定的时间浓度依赖性；而SODN各组与空白对照组间各项指标均无明显差异。 结论: ASODN能够特异性下调OS-732细胞中survivin基因表达，激活凋亡效应蛋白酶caspase-3，在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖中发挥重要作用。     

快速cDNA末端扩增技术在钓取未知基因中的应用

全长ｃＤＮＡ的克隆是目前人类基因组研究中的一个重要方面。对一段不完整的ｃＤＮＡ序列，克隆其全长的方法，包括ｃＤ－ＮＡ文库筛选法［１］和快速ｃＤＮＡ末端扩增法（ｒａｐｉｄ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ　ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ，ＲＡＣＥ）［２］。ｃＤＮＡ文库筛选法烦琐、工作量大、费用昂贵；而ＲＡＣＥ技术灵敏、快速。ＭＳＰ２为本实验室应用ｍＲ－ＮＡ差异显示技术克隆到的可能参与肿瘤转移抑制过程的一种新的基因片段，长 ４８１ ｂｐ。经计算机分析它具有编码区特征，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　ｂｏｌｏｔ分析显示其 ｍＲＮＡ约…     

抗骨肉瘤药物纳米载体的研究进展

骨肉痛是最常见的恶性骨肿瘤,病死率较高。而生物医用纳米材料是纳米材料和生物材料交叉的一个全新领域,在生物医学上有着十分诱人的、广泛的应用前景。本文对纳米无机生物材料、纳米高分子生物材料、纳米复合生物材料作为抗骨肉瘤药物载体的研究进展作了较全面的综述。     

骨肉瘤发生中p53蛋白表达对细胞凋亡的调节

目的研究骨肉瘤发生中p53蛋白表达对细胞调亡的调节。方法利用原位脱氧核糖核酸末端转移酶(In situ terminal deoxynucleotide transferase;ISTdT)标记技术和SP免疫组织化学方法分别检测骨肉瘤和良性骨肿瘤组织中凋亡细胞和p53蛋白的表达。结果骨肉瘤中p53蛋白的阳性率(76.9%,50/65)和阳性表达强度明显高于良性骨肿瘤组织(21.1%,4/19)(分别为P＜0.01和P＜0.05),但4种亚型之间差异无显著性(P＞0.05)。骨肉瘤组织中凋亡细胞密度均明显低于良性骨肿瘤组织(P＜0.01),但各亚型之间两者亦均无明显差异(P＞0.05);骨肉瘤和良性骨肿瘤组织中p53蛋白表达与凋亡细胞密度呈明显的线性负相关(r=-0.8954,P＜0.01),其表达增强则凋亡细胞密度逐渐降低。结论在骨肉瘤发生中p53基因突变可能是一种频发事件。突变型p53基因可能是通过其蛋白过度表达抑制肿瘤细胞凋亡,导致骨肉瘤的发生和发展。     

骨肉瘤治疗进展

骨肉瘤是最常见的骨恶性肿瘤,病死率很高,新辅助化疗保肢手术和肺转移瘤清扫术的开展使骨肉瘤的治愈率显著提高,同时保留了患肢的功能,免疫治疗为进一步提高综合疗效提供了新的希望。     

不同浓度酒精灭活后的国人成骨肉瘤细胞超微结构的变化

目的 :探讨两种不同浓度的酒精灭活骨肉瘤细胞 (OS- 732 )后细胞内部结构变化和临床应用价值。方法 :75%和 95%酒精灭活骨肉瘤细胞 ,光镜和电镜下观察细胞形态 ,MTT法检测细胞活性。结果 :灭活后的细胞内部结构发生明显改变 ,形成不可逆性损伤。 MTT法检测证明处理后的肿瘤细胞已无生存能力。结论 :两种浓度的酒精对骨肉瘤细胞的灭活是有效的 ,为临床上骨肉瘤的保肢治疗提供良好的选择。     

人参皂苷对人体骨肉瘤细胞U2OS增压的影响

目的：为寻找人参中抑制骨肉瘤细胞增殖的活性成分,方法：采用细胞计数法检测了27种从人参中得到的单体化合物对体外培养的人体骨肉瘤细胞U2OS增殖的影响。以流式细胞术分析DNA含量, 抑制肿瘤细胞增殖作用的化合物对肿瘤细胞的细胞增殖周期的变化进行研究,另外,以荧光染色法检测了人掺皂苷对细胞死亡率变化的影响。结果对骨肉细胞增殖的抑制作用研究表明,在5μmol/L浓度下,人参皂苷－Ro-Rh1,-Rh2,F1和－L8较明显地抑制了肿瘤细胞的增殖,人参皂苷－Rg1,F3,Rf,PPT和PT显著地抑制了肿瘤细胞的增殖,进一步对骨肉瘤细胞有抑制作用的化合物检测其对细胞增殖周期影响发现;人参皂苷－Ro,-Rf,-Rg1,-F1-Rh2,PPT和PT使处于G0／G1期的细胞数目明显增多,伴随着S期和G2＋M期的细胞明显减少,说明这些化合物抑制了肿瘤细胞增殖周期的进行,与对照相比人参皂苷－Rf1-,Rg1-F1和PPT显著地促进了肿瘤细胞的细胞死亡现象。结论人参皂苷是通过阻止细胞增殖周期的G0／G1期或促使细胞死亡两种方式抑制了肿瘤细胞U2OS的增殖。     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p27^kip1在骨肉瘤中表达的研究

目的：探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p27^kip1在骨肉瘤发生中的作用。方法：应用免疫组织化学方法（S－P法）检测27例传统骨肉瘤、4例皮质旁骨肉瘤和12例良性骨肉瘤中p27^kip1的表达,表达程度采用半定量方式判定。结果：骨肉瘤中p27^kip1表达的阳性率为100％,良性骨肿瘤中表达的阳性率为75％,两者间有非常显著性差异（P＜0．01）。骨肉瘤不同分化与阳性半定量间无相关性（P＞0．05）。结论：p27^kip1蛋白表达与骨肉瘤的发生有关,但与骨肉瘤的分化程度无关。     

△Np63蛋白在骨肉瘤中表达的意义

目的：研究△Np63蛋白在骨肉瘤中的表达,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的可能作用。方法：应用免疫组化S-P法检测28例骨肉瘤石蜡标本中△Np63蛋白的表达情况。结果：在28例骨肉瘤中仅有1例高分化骨肉瘤出现弱阳性反应,还有1例骨肉瘤△Np63表达为阴性,二者癌旁组织呈阳性反应（ ）。对照组的15例骨软骨瘤中,共有3例阳性,其中2例为（ ）,另1例为强阳性（ ）。结论：△Np63在骨软骨瘤和骨肉瘤的癌旁正常组织中呈阳性或强阳性反应,推测p63可能具有肿瘤抑制基因功能。     

CD44v6在骨肉瘤的表达与临床意义

目的 研究骨肉瘤组织中CD44V6的表达情况,探讨它与骨肉瘤侵袭的关系及临床意义。方法 应用免疫组织化学方法对70例骨肉瘤、15例骨软骨瘤患者和15例正常人的骨组织进行CD44V6、ki－67检测;对60例有随访资料的病例进行生存分析。结果 CD44V6在骨肉瘤中普遍呈阳性表达,明显高于软骨瘤及正常骨组织,与预后无明显相关,与细胞增殖指数ki－67无明显相关。结论 CD44V6可作为骨肿瘤恶性表型的标志,并可作为骨肉瘤诊断的辅助指标;CD44V6不是决定肿瘤细胞增殖、侵袭的唯一因素。