脑源性神经生长因子和神经干细胞联合移植对大脑中动脉阻塞大鼠神经功能恢复的作用

目的 将脑源性神经生长因子(BDNF)和神经干细胞(NSCs)单独及联合移植应用于大脑中动脉阻塞(MCAo)模型大鼠,观察BDNF和NSCs移植对大鼠缺血性脑卒中神经功能恢复的作用及BDNF对内源性和外源性NSCs增殖、迁移及分化的影响.方法 体外分离、培养新生大鼠海马NSCs,BrdU标记.实验动物随机分为A组(MCAo组);B组(MCAo+BDNF组);C组(MCAo+NSCs组);D组(MCAo+BDNF+NSCs组),每组16只,移植后进行神经功能损害评分(NSS),用免疫组织化学行BrdU、nestin、BrdU/NSE检测,分析结果.结果 移植后的2、4周神经功能评分分别为:A组5.3±0.5、5.3±0.5;B组4.0±0.8、3.8±0.5;C组3.5±0.6、3.5±0.6;D组2.0 ±0.8、1.8±1.0,D组显著好于其他3组(P<0.05),B组与c组显著好于A组(P<0.05).nes.tin阳性细胞数:A组1.24±1.13,B组2.59±1.44(P<0.05),BrdU阳性细胞数:A组0.52±0.68,B组1.65±1.10(P<0.05).BrdU阳性细胞数:C组6.08±1.52,D组10.26±1.96(P<0.05),BrdU/NSE双阳性细胞数:C组1.74±1.04,D组3.58±1.20(P<0.05).结论 BDNF和NSCs移植单独及联合应用对MCAo大鼠的神经功能恢复均有作用,两者联合具有协同作用.BDNF对内源性NSCs的激活、增殖有促进作用,对外源性NSCs的增殖、迁移及分化有促进作用.     

神经生长因子

神经生长因子（NGF）系1951年由LeviMontalofni在小鼠肉瘤细胞内发现的．NGF广泛存在于动物体内，以成年雄性小鼠颌下腺中含量最高，其次是豚鼠前列腺和蛇毒．它是一种蛋白质，含三种亚基α、β、γ，以αβγ五个亚基组成，分子量为1300000，通常称为7SNGF．只有β亚基具有促进神经生长的作用，用不同方法提取可以得到一种2．5S的NGF，大致相当于β亚基部。其作用具有非常的广泛性，不仅调节周围和中枢神经元的生长发育，维持神经元的存活，而且除神经系统（NS）外，还有许多其他作用，如对造血细胞有调节作用，可作为体内外多核白…     

神经生长因子受体和一氧化氮合酶在大鼠基底前脑神经元的分布 …

用神经生长因子受体免疫组化，ＮＡＤＰＨ－ｄ组化及两者的双重反应技术观察了神经生长因子受体和一氧化氮合酶在大鼠基底前脑神经元的表达和共存。神经生长因子受体和一氧化氮合酶阳性神经元在基底前脑内部以一条连续的细胞带的形式存在。神经生长因子受体阳性神经元多为多极形，排列较密，由吻侧向尾侧数量逐渐增多；一氧化氮合酶神经元的形状与神经生长因子受体阳性和神经元相似，但数量较少，且由吻侧向尾数量相对稳定。通过双重     

神经生长因子对小鼠突触体内Ca^2＋水平的调节作用

观察了多次海马内微注射ＮＧＦ对小鼠突触体内游离钙水平的影响，并在离体情况下观察ＮＧＦ对ＥＧＴＡ和ＣａＣｌ２分别造成突触体内低钙和高钙状态的调节作用。结果如下：（１）在体实验表明，一定剂量的ＮＧＦ可显著降低老年小鼠海马突触体内游离钙水平（Ｐ＜００５）；（２）离体实验表明，当突触体游离钙水平降低时，适当剂量的ＮＧＦ具有升高游离钙水平的作用；而突触体内游离钙水平升高时，则ＮＧＦ有降低游离钙水平的作用。提示ＮＧＦ对游离钙水平的双向调节作用可能是ＮＧＦ改善老年性记忆衰退的作用机制。     

外源性NGF对坐骨神经损伤后脊髓前角细胞CNTF表达的影响

目的　探讨坐骨神经损伤后脊髓前角细胞睫状神经营养因子 (CNTF)表达变化及外源性神经生长因子(NGF)与CNTF表达的关系。方法　采用大鼠坐骨神经损伤动物模型 ,分为给药组和对照组 ,每只大鼠又分为损伤侧组 (L组 )和健侧组 (R组 )两个亚组。用原位杂交、免疫组化技术检测CNTF的表达水平 ,观察各组在 1d、7d、1 4d、2 1d及 2 8d时的变化。用计算机图像自动处理系统进行定量分析研究。结果　给药组损伤侧脊髓前角细胞中CNTF表达水平除 1d、7d组外其余均多于对照组 (P <0 .0 5 ) ;而两组健侧脊髓前角细胞中CNTF表达水平无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论　①外源性NGF能促进坐骨神经损伤后损伤侧脊髓前角细胞中CNTF表达水平的增加 ;而对健侧CNTF表达水平无明显作用。②坐骨神经损伤后损伤侧脊髓前角细胞中CNTF表达水平在最初的 3周内逐渐下降 ,然后开始恢复 ,但至第 4周尚未恢复到开始时的水平 ;而两组健侧CNTF表达水平则无明显差异 (P >0 .0 5 )。     

牛黄栀子配伍对大鼠局灶性脑缺血再灌注不同时段神经生长因子（NGF）含量的影响

目的:通过检测牛黄、栀子配伍对大鼠局灶性脑缺血再灌注不同时段神经生长因子(NGF)含量的影响,探讨治疗缺血性中风在该作用环节不同时段的作用特点,研究其配伍阻抑脑缺血级联反应的时序特征。方法:用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,观察牛黄、栀子及二者配伍对缺血再灌注24小时和72小时两个时段大鼠脑组织NGF含量的影,响。结果:缺血再灌注损伤可明显抑制脑组织NGF的表达,从而削弱了机体的自身保护机制;再灌注24小时,牛黄、栀子均可促进NGF的表达,而二者配伍后作用明显降低:再灌注72小时,牛黄的作用不显著,栀子可明显增强NGF的表达,二者配伍与栀子的作用相当,未显示出明显的配伍效应。结论:中药配伍的作用不是简单的效应累加,而是依据作用环节及作用时间的不同表现为不同的时空特征。     

神经生长因子基因转染联合强化铁营养防治豚鼠爆震性聋的实验研究

Objective To study the protective effects of adenovirus-mediated human beta-nerve growth factor gene (hNGFβ) transfer combined with iron fortified nutrition on blast hearing damage in guinea pigs. Methods Deafness was induced by blast (172dB SPL) in 35 healthy guinea pigs. Seven days after noise exposure, 10 guinea pigs were inoculated with adenovirus-mediated hNGFβ (Ad-hNGFβ) into the perilymphatic space (the gene group), another 10 guinea pigs were given hNGFβ combined with iron fortified nutritional diet (the combination group), still another 10 guinea pigs were inoculated with artificial perilymphatic fluid (APF), and 5 guinea pigs served as control, given neither medicine nor noise exposure. Auditory brainstem response (ABR) threshold shifts were monitored in the guinea pigs before blast exposure and after gene transfer. Changes in cochlear morphology were examined with immunohistochemical and HE staining. Results One week after successful inoculation of hNGFβ, it was noted that Ad-hNGFβ protein was expressed in each turn of the cochlea, and its intensity was almost equal. After gene transfer in the combination group and the gene group, ABR threshold shifts at week 1 and 4 were significantly smaller than those of the APF group. HE staining showed that the number of the spiral ganglion cells in the combination group and the Ad-hNGFβ group was significantly higher than that of the control group after 4 weeks (P<0.01). Conclusions Ad-hNGFβ combined with iron fortified nutritional diet was effective in the prevention and treatment of blast hearing damage of cochlear hair cells.     

人参皂苷Rg1诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的作用

目的研究人参皂苷Rg1在体外能否诱导Wistar大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。方法通过贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养扩增,人参皂苷Rg1诱导分化,光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,RT-PCR检测细胞NGF mRNA的表达。结果大鼠骨髓间充质干细胞可通过贴壁法成功分离并可以在体外大量扩增。人参皂苷Rg1诱导72h后,部分骨髓间充质干细胞（35．57％±3．59％）转变为神经元样细胞,免疫细胞化学染色NSE呈阳性,分化的神经元样细胞可能表达NGF mRNA。结论人参皂苷Rg1可以在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞,并且可能表达NGF mRNA。     

外消旋聚乳酸复合神经生长因子缓释导管促周围神经再生的形态学研究

目的 建立外消旋聚乳酸复合神经生长因子（poly-D，L-lactic acid／nerve growth factor，PDLLA／NGF）可吸收性缓释导管桥接修复大鼠坐骨神经缺损的动物模型，观察复合导管对大鼠坐骨神经缺损再生的促进作用。方法利用溶剂挥发法制备PDLLA单纯导管和PDLLA／NGF缓释导管，每根缓释导管含NGF450U。SD大鼠40只随机分成4组，每组10只，切除中段坐骨神经10mm之后分别行自体神经移植（A组）、单纯导管桥接（B组）、单纯导管加一次性给药（C组）、PDLLA／NGF缓释导管桥接（D组）修复坐骨神经，除A组外，均保留10mm缺损。术后3个月观察神经再生情况，比较各组光镜、电镜及图像分析等指标。结果术后3个月导管与周围组织粘连松，并开始降解，但外形仍保持完整。再生神经均顺利通过导管腔，组织学观察A组和D组内神经纤维数目多，大小均匀，成熟良好；B组和C组纤维结缔组织多，神经纤维细小，髓鞘薄。图像分析显示除神经纤维计数D组高于A组外，A组和D组在纤维直径、轴突直径和髓鞘厚度方面差异均无统计学意义（P〉0．05），并明显优于B组和C组（P〈0．05）。结论 PDLLA／NGF缓释导管能够有效促进大鼠坐骨神经缺损再生，组织学观察指标接近自体神经移植。