miR-630调控BCL2抑制肺癌细胞的生长

目的 为了揭示小分子RNA miR-630抑制肺癌细胞生长的作用,阐明其通过靶向抑制BCL2来发挥作用的分子机制。方法 以CCK8检测细胞活力来评估细胞增殖的状况;以BD FACSCalibur流式细胞仪检测并分析细胞周期各个时期的变化;以mirPath和RNAhybrid两个生物信息学工具预测miR-630的下游靶点。通过一系列如PCR、琼脂糖胶回收、限制性克隆位点酶切链接以及质粒小提和大提等克隆工具,将miR-630基因构建到miRNA表达质粒pmR-mcherry载体,使用Lipofectamine 2000转染miR-630表达质粒至细胞内以在体外表达miR-630;以Western blot检测BCL2蛋白的表达。结果 成功构建表达miR-630的表达质粒,与对照组相比较,pmR-premiR630表达质粒转染48 h和72 h后miR-630的表达水平增高了(4.49±0.59)和(9.16±1.50)倍(P均<0.05)。与对照空质粒转染48 h和72 h后细胞活力为1.26±0.09和1.84±0.03相比较,miR-630表达质粒转染48 h和72 h后细胞活力降低到 0.89±0.09和1.34±0.23(P均<0.05)。细胞转染miR-630表达质粒转染48 h后细胞周期中S期降低。生物信息学预测到BCL2是miR-630的一个靶点。与对照组相比较,pmR- premiR630表达质粒转染48 h和72 h后BCL2蛋白的表达分别下降了(0.6±0.03)和(0.4±0.01)倍(P均<0.05)。细胞转染 miR-630表达质粒后BCL2蛋白表达降低。结论 miR-630通过抑制BCL2表达来抑制肺癌细胞的生长。     

miR-29a促进人乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的机制

探讨微小核酸miRNA-29a对人乳腺癌细胞MCF-7体外迁移和侵袭的促进作用及其机制。采用miR-29a模拟物及miR-29a抑制剂分别上调和下调miR-29a的表达;采用细胞划痕法和Transwell小室法检测miR-29a对细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Targetscan7.1数据库预测miR-29a的靶基因;荧光素酶报告法验证miR-29a的靶基因;Western blot和实时荧光定量PCR验证其表达结果。结果表明:miR-29a可显著促进MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。Targetscan软件预测HBP1可能为miR-29a的靶基因,荧光素酶报告实验显示miR-29a靶向HBP1基因的3′-UTR区。Western blot和实时荧光定量PCR结果显示,miR-29a下调了HBP1蛋白水平的表达,而mRNA水平则无明显变化。研究结果揭示在乳腺癌中高表达的miR-29a通过下调HBP1,从而使乳腺癌细胞获得高的迁移和侵袭能力,促进乳腺癌的转移。     

MicroRNA-31 在上皮性卵巢癌中的表达及其与预后的关系

目的 本研究旨在探讨microRNA-31（miR-31）在上皮性卵巢癌（EOC）中的表达水平与临床病理学因素以及预后的关系。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测150 例EOC 患者组织中miR-31 的表达水平,将miR-31 表达情况与随访结果和临床资料相结合进行统计学分析。结果 在EOC 组织中miR-31 的表达较癌旁正常卵巢组织降低（P <0.05）。miR-31 的低表达与较差的组织学分级、较多的淋巴结转移、更广泛的腹膜转移和更晚期的病理分期有关（P <0.05）,而与其他临床病理学因素无关（P >0.05）。此外,miR-31 的表达是患者总生存的独立预测因子。结论 miR-31 可能是EOC 一个新的诊断和预后标志物。     

miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的 观察miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 和正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 中miRNA-381 的表达;将AGS 细胞系分成两组,阴性对照组和miRNA-381 模拟物组,采用Lipofectamine TM 2000 分别转染miRNA-381 scramble 及mimics,采用CCK-8、Transwell 实验测定两组细胞增殖和侵袭的影响,Western blot 检测两组细胞肝受体类似物1（LRH-1）和扭曲相关蛋白1（Twist1）表达水平。结果 胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 中miRNA-381 相对表达量较正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 为低。miRNA-381 模拟物组在转染后72 和96 h OD 450 nm 值低于阴性对照组（P <0.05）;阴性对照组侵袭细胞数为（79.6±7.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数为（31.70±4.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数少于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量为（0.39±0.04）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组Twist1蛋白相对表达量为（0.51±0.05）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组Twist 1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）。结论 miRNA-381 低表达于胃癌细胞系,miRNA-381 过表达可抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力,其机制可能与下调LRH-1 和Twist1 的表达有关。     

地西他滨抑制AML1-ETO+白血病细胞增殖和诱导凋亡的机制研究

目的研究地西他滨抑制AML1-ETO+白血病细胞增殖和诱导凋亡,并初步探讨其可能的机制。方法Kasumi-1细胞常规培养在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中,CCK8法检测地西他滨抑制Kasumi-1细胞增殖,流式细胞术检测Kasumi-1凋亡,Western Blot检测相关蛋白的表达,RT-PCR检测AML1-ETO和mi R-193a的表达。结果地西他滨可以抑制Kasumi-1细胞增殖,具有浓度效应和时间效应;并能诱导凋亡,对照组、24 h和48 h组细胞凋亡率分别为(5.29±0.88)%、(9.83±1.71)%和(19.47±1.84)%;地西他滨能减少AML1-ETO蛋白的表达,0.1、0.5和1μmol/L地西他滨组与对照组的比值分别为(0.85±0.21)、(0.28±0.06)和(0.10±0.07),24、48 h组AML1-ETO蛋白与对照组的比值为(0.31±0.21)和(0.24±0.11),但不影响AML1-ETO m RNA表达,24和48 h组与对照组的比值分别为(0.96±0.19)和(0.84±0.11),统计分析无显著性差异(F=1.22,P0.05);地西他滨能上调mi R-193a,24和48 h分别上升(3.61±0.06)和(6.99±0.74)倍,并减少MDM2和Cyclin D1蛋白的表达,MDM2和Cyclin D1蛋白加药组与对照组的比值分别为(0.51±0.19)和(0.50±0.10)。结论地西他滨通过上调mi R-193a阻遏AML1-ETO的翻译,并减少MDM2和Cyclin D1蛋白的表达,从而抑制AML1-ETO+白血病细胞增殖和诱导凋亡。     

抑郁模型大鼠脑脊液miR-16与中缝核miR-16、5-羟色胺转运体表达的关联性研究

目的研究抑郁模型大鼠脑脊液miR-16是否能反映中缝核miR-16水平的变化,并与中缝核5-羟色胺转运体(serotonin transporter,SERT)的表达相关。方法将20只SD大鼠随机分为抑郁模型组和对照组,每组各10只。抑郁模型组大鼠接受21 d不可预知温和应激的刺激,对照组大鼠正常饲养。收集大鼠脑脊液测定miR-16,分离中缝核测定miR-16和SERT蛋白。比较模型组与对照组脑脊液miR-16、中缝核miR-16、SERT表达差异并分析三者的关联性。结果模型组大鼠脑脊液miR-16水平(0.19±0.10)和中缝核miR-16水平(0.65±0.22)均低于相应的对照组(0.35±0.12、0.84±0.18)(P0.01),中缝核SERT水平(0.99±0.29)高于对照组(0.59±0.18)(P=0.002)。脑脊液miR-16与中缝核miR-16呈显著正相关关系(r=0.95,P=0.000),而且脑脊液miR-16与中缝核miR-16一样,与中缝核SERT呈显著负相关(r=-0.91,P=0.000)。结论抑郁模型大鼠脑脊液miR-16水平能反映中缝核miR-16水平,并与中缝核SERT表达相关,可能可作为抑郁症的生物标记物。     

冠心病患者白细胞miR-223-3p水平与氯吡格雷治疗后的血小板反应无关

目的：探讨冠心病患者白细胞miR-223-3p水平与氯吡格雷治疗后血小板反应之间的潜在相关性。方法：收 集188名择期经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术后接受双重抗血小板治疗的门诊患者的 一般资料和血标本,检测二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱导的全血血小板聚集率。选取血小板反应有显著 差异的患者(超反应组和无反应组),检测其白细胞miR-223-3p水平。结果：除ADP诱导的全血血小板聚集率外,两组 患者的一般资料和白细胞miR-223-3p水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论：冠心病择期PCI术后门诊患者外周血白细 胞miR-223-3p水平与氯吡格雷治疗后的血小板反应无关。     

7- 二氟亚甲基-5, 4'- 二甲氧基金雀异黄素对大鼠压力性尿失禁模型的疗效及其机制

目的：探讨7-二氟亚甲基-5, 4'-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethy-5, 4'-dimethoxygenistein,DFMG)对SD大 鼠压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)模型的疗效及其机制。方法：采用模拟妊娠、难产产伤及卵巢去势 建立SD大鼠SUI模型,分为正常对照组、SUI组、DFMG(10,20 mg/kg)组,模型鼠行DFMG隔日灌胃治疗。采用膀胱 最大容积(maximal bladder capacity,MBC)、漏尿点压力(leak point pressure,LPP)、腹部漏尿点压力(abdominal leak point pressure,ALPP)以及HE染色和Masson染色检测建模效果;采用RT-PCR检测尿道括约肌细胞(urethral sphincter muscles cells,USMCs)miR-26b及其下游靶基因磷酸酶和肌腱同源染色体(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PENT)mRNA表达;用Western印迹检测USMCs细胞PENT,磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K), 蛋白激酶B(protein kinase B,AKT),B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax),细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase-9)的蛋白表达;采用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测USMCs细胞凋亡率,采用噻唑蓝[3-(4, 5-dimethyl-2-thiazolyl)-2, 5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]检测尿USMCs细胞增殖率。结果：成功建立SD大鼠 SUI模型。HE染色和Masson染色显示：与SUI组比较,DFMG组尿道括约肌病理症状显著改善,MBC,LPP和ALPP 均有显著提高(均P<0.05)。RT-PCR结果显示：与SUI组比较,DFMG组USMCs细胞miR-26b mRNA表达升高(P<0.05), PENT mRNA表达下调(P<0.05)。Western印迹显示：与SUI组比较,DFMG组PENT,Bax,Cyt-C和caspase-3蛋白均下调 (均P<0.05);而PI3K,AKT和Bcl-2蛋白表达均上调(均P<0.05);并伴随USMCs细胞凋亡率降低(P<0.05),增殖率增高 (P<0.05)。结论：DFMG可以显著改善SUI模型鼠尿动力学症状,其机制可能与上调miR-26b表达、调控PI3/AKT-Bcl-2/ Bax信号通路而抑制细胞凋亡有关。     

Expression and clinicopathological significance of miR-146a in hepatocellular carcinoma tissues

Background. Aberrant expression of microRNA-146a (miR-146a) has been found in several classes of cancers. However, its expression and clinicopathological contribution in hepatocellular carcinoma (HCC) has not been fully elucidated.

Objective. To explore the clinicopathological significance of the miR-146a level in HCC formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue.

Methods. Eighty-five HCC samples and their para-cancerous normal liver tissues were collected. Total mRNA including miRNA was extracted, and miR-146a expression was determined using real-time RT-PCR. Furthermore, the correlation between the miR-146a expression and clinicopathological parameters was investigated.

Results. MicroRNA-146a expression in HCC tissues was lower compared with that in adjacent non-cancerous hepatic tissues. MicroRNA-146a expression was also related to clinical TNM stage, metastasis, portal vein tumor embolus, and number of tumor nodes.

Conclusions. Down-regulation of miR-146a is related to HCC carcinogenesis and deterioration of HCC. MicroRNA-146a may act as a suppressor miRNA of HCC, and it is therefore a potential prognostic biomarker for HCC patients.     

人microRNA-339慢病毒载体的构建及其对结肠癌细胞SW620迁移的影响

目的 构建人microRNA-339(has-miR-339)慢病毒载体,并探讨miR-339-5p/3p对结肠癌细胞SW620迁移能力的影响.方法 由miRBase及NCBI数据库查找获得miR-339前体序列(pre-miR-339)及其侧翼序列,将pre-miR-339和PLVTHM载体经双酶切后连接,产生PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体,并经测序鉴定;以PLVTHM-pre-miR-339、psPAX2和pMD2.G三质粒包装系统共同转染293FT细胞,包装产生慢病毒.流式细胞仪筛选建立稳定过表达pre-miR-339的SW620细胞株,实时荧光定量RT-PCR检测miR-339-5p及miR-339-3p表达.利用细胞划痕实验进行细胞迁移能力检测.结果 成功构建PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体,测序证实所插入基因序列完全正确.倒置荧光显微镜下观察可见转染后的293FT细胞及SW620细胞均表达绿色荧光.在过表达pre-miR-339的SW620亚细胞系中,miR-3396p及miR-339-3p表达水平显著高于空载对照组.划痕实验结果显示:与SW620/PLVTHM-NC组相比,SW620/PLVTHM-pre-miR-339组细胞迁移减缓,划痕较宽.结论 成功构建了PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体和稳定过表达miR-3396p及miR-339-3p的SW620亚细胞系,并证实miR-339-5p/3p可抑制结肠癌细胞SW620的迁移能力.