缺氧对人牙周膜成纤维细胞基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶抑制物mRNA表达的影响

目的 探讨缺氧对人牙周膜成纤维细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)和组织金属蛋白酶抑制物(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase,TIMP) mRNA表达的影响,以期为牙周组织修复再生机制研究提供依据.方法 组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,分为缺氧组和常氧组(对照组).缺氧组细胞分别于1％O2、5％ CO2、94％N2的37℃培养箱中培养12、24和48 h(分别为12、24、48 h缺氧组);常氧组细胞在20％O2、5％ CO2、75％N2的37℃培养箱中培养.采用反转录聚合酶链反应技术检测MMP和TIMP相关基因的表达.缺氧组与常氧组间均数比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD检验.结果 12、24、48 h缺氧组MMP-2 mRNA的表达呈明显递增趋势(分别为0.769±0.038、0.793±0.043、0.865±0.047),均显著高于常氧组(0.294±0.117),P＜0.01;12h缺氧组TIMP-1,2 mRNA的表达(分别为1.870±0.645、0.862±0.043)均有一过性升高,均分别显著高于常氧组TIMP-1,2 mRNA的表达(分别为0.816±0.043、0.426±0.097),P＜0.05.12h缺氧组MMP-1/TIMP-1 mRNA的比值(0.392±0.206)显著低于常氧组(0.859 ±0.126),P＜0.05;24、48 h缺氧组MMP-2/TIMP-2 mRNA的比值(分别为1.091±0.207、1.264±0.377)均显著高于常氧组(0.695±0.255),P＜0.05.结论 缺氧可以导致MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达,并使MMP-2 mRNA与TIMP-2 mRNA的比值失衡,这可能是缺氧导致牙周炎患者牙周组织破坏加重的机制之一.     

低氧诱导下舌鳞癌SCC-6细胞中HIF-1α、VEGF的表达及TSA对其表达的抑制

目的:观察低氧与人舌鳞状细胞癌SCC-6细胞中HIF-1α、VEGF表达的相关性,曲古抑菌素A(TSA)对其表达的抑制作用,初步探讨其作用机制。方法:体外培养的舌鳞状细胞癌SCC-6细胞,经不同作用时间去铁胺处理,模拟低氧条件培养后,RT-PCR检测HIF-1α、VEGF的mRNA表达,Western Blot检测其蛋白表达;模拟低氧条件下,不同浓度、时间梯度TSA处理SCC-6细胞后,分别检测HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白表达。结果:①低氧下SCC-6细胞HIF-1α蛋白表达增加,但其mRNA的表达不受影响;作为HIF-1α下游基因的VEGF的mRNA和蛋白表达,随HIF-1α蛋白表达增加而增加;②低氧下,TSA可抑制HIF-1α的蛋白表达及VEGF的mRNA和蛋白表达,并呈量效和时效关系,但HIF-1α的mRNA表达不受影响;③HIF-1α的调节在蛋白水平。结论:体外条件下,模拟低氧可诱导舌鳞状细胞癌SCC-6细胞中HIF-1α蛋白、其下游基因VEGF的mRNA和蛋白的表达增加。TSA可抑制HIF-1α的蛋白表达,进而抑制其下游基因VEGF的表达,从而发挥抗肿瘤血管生成的作用,并且呈量效和时效关系。     

Wortmannin阻断PI3K/AKT途径对食管癌缺氧诱导因子-1α及糖酵解的影响

目的 探讨人食管癌细胞TE1、TE13中应用wortmannin阻断PI3K/AKT通路对缺氧诱导因子(HIF)-1α的抑制效果及对糖酵解相关基因表达的影响,分析PI3K/AKT-HIF-1α途径对食管癌细胞糖酵解通路之间的关系.方法 wortmannin(2μmol/L)预处理食管癌细胞TE1、TE13后常氧和缺氧培养,分为①常氧组(N);②缺氧组(H);③常氧处理组(N+W);④缺氧处理组(H+W).采用Western印迹检测细胞中HIF-1α蛋白及己糖激酶(HK)-Ⅱ、葡萄糖载体蛋白(GLUT)-1、乳酸脱氢酶(LDH )-A等糖酵解相关基因蛋白的表达;实时定量PCR检测HIF-1α及HK-Ⅱ、GLUT-1、LDH-A等糖酵解相关基因mRNA的表达;分光光度法测定胞液中LDH、HK-Ⅱ活性和培养上清液中乳酸浓度.结果 常氧状态下,在TE1细胞中存在HIF-1α蛋白的表达,wortmannin(2 μmol/L)能抑制HIF-1α蛋白表达,12 h后抑制效应最明显,故选取12 h为后续实验的缺氧时间.TE1、TE13细胞经wortmannin预处理后HIF-1α、HK-Ⅱ、GLUT-1、LDHA蛋白表达较未加药细胞明显减弱(P＜0.05);HIF-1α、HK-ⅡmRNA表达较未加药细胞明显减弱(P＜0.05).常氧和缺氧条件下加用wortmannin的TE1,TE13组食管癌细胞胞液LDH、HK-Ⅱ活性均较未加药细胞组明显减弱(P＜0.05),未加药细胞缺氧后酶活性增强(P＜0.05).常氧和缺氧条件下加用wortmannin组较未加药组细胞上清液乳酸浓度明显减低(P＜0.05),加wortmannin组细胞缺氧后表达增强(P＜0.05).结论 常氧及缺氧条件下,wortmannin能通过抑制食管癌细胞HIF-1α和糖酵解相关基因的表达导致乳酸水平降低,表明PI3K/AKT- HIF-1α途径与食管癌细胞糖酵解通路密切相关.     

慢性间断性缺氧对帕金森病模型小鼠认知功能及海马神经元结构的影响

目的 探讨慢性间断性缺氧对帕金森病模型小鼠认知功能、海马神经元结构及突触素表达水平的影响.方法 采用百草枯腹腔注射联合慢性间断性缺氧制备帕金森病伴睡眠障碍小鼠模型,通过电迷宫和跳台实验评价其学习和记忆能力,HE和Nissl染色观察海马神经元形态及数目变化、免疫组织化学染色检测海马神经元突触素表达水平、电子显微镜观察海马神经元超微结构.结果 与对照组比较,百草枯组、慢性间断性缺氧组及其联合组小鼠学习和记忆成绩显著下降(均P＜ 0.05),电迷宫和跳台实验总反应时间延长、错误反应次数增加;Nissl染色阳性神经元数目减少、突触素表达水平升高.光学显微镜和电子显微镜观察显示,百草桔组、慢性间断性缺氧组及其联合组小鼠海马神经元均有不同程度损害,但以百草枯联合慢性间断性缺氧组最为明显(均P=0.000).结论 慢性间断性缺氧可加重百草枯所致帕金森病模型小鼠的学习和记忆障碍,可能与海马神经元结构损害、突触功能减弱有关.     

缺氧幼鼠脑组织和血清中HIF-1α的表达及意义探讨

目的 探讨缺氧幼鼠脑组织和血清中缺氧诱导因子-1α的表达,及HIF-1α与缺氧性脑损伤的关系.方法 建立缺氧幼鼠模型,取40只幼鼠依照随机数字表法分为缺氧组和正常对照组,于缺氧8 h取缺氧组和正常对照组幼鼠各10只测脑组织HIF-1α mRNA和血清HIF-1α的表达水平.结果 缺氧组幼鼠脑组织HIF-1α mRNA 含量和血清HIF-1α含量明显高于对照组检测值,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 缺氧幼鼠脑组织和血清中HIF-1α表达水平明显升高.     

神经节苷酯注射液治疗新生儿缺氧缺血性脑病的疗效

目的探讨单唾液酸神经节苷酯注射液(GM)治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的疗效。方法选取我院2007-01—2011-06收治的160例HIE患儿,随机分成对照组和研究组,对照组在常规治疗基础上运用胞二磷胆碱治疗,研究组在常规治疗基础上应用GM治疗。观察2组患者临床主要表现症状、恢复所需时间、患儿神经行为评分(NBNA)等各种指标。结果治疗后与对照组相比,研究组患儿原始反射时间、意识障碍和肌张力恢复所需要时间、惊厥消除时间均减少,差异均具有统计学意义(P<0.05);研究组NBNA评分较对照组明显高,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论单唾液酸神经节苷酯注射液治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效果显著,具有临床应用价值。     

纳洛酮联合复方丹参注射液治疗新生儿缺氧缺血性脑病的疗效和安全性

目的探讨纳洛酮联合复方丹参注射液对于新生儿缺氧缺血性脑病的临床疗效和安全性。方法入组117例新生儿缺氧缺血性脑病患儿分为2组,常规治疗组58例接受常规综合治疗,而联合治疗组59例在接受常规综合治疗的同时给予纳洛酮和复方丹参注射液,比较2组治疗效果和安全性。结果联合治疗组总有效率高达93.22%,远高于常规治疗组的79.31%(P<0.05)。联合治疗组意识障碍、肌张力及原始反射恢复时间均短于常规治疗组(P<0.05)。联合治疗组住院时间短于常规治疗组(P<0.05)。2组均未发生严重不良反应。结论纳洛酮联合复方丹参注射液治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效较好,且安全性高。     

新生儿缺氧缺血性脑病的早期综合干预分析

新生儿缺氧缺血性脑病属于新生儿发生窒息后的严重并发症,发病情况严重,致死率高,少部分存活下来的儿童(特别是中、重度HIE)常伴有脑功能障碍[1],小儿脑瘫、精神发育延迟、癫疒间等不良症状。本文选取64例足月新生儿缺氧缺血性脑病患儿,实施早期干预康复治疗,定时随访。现报告如下。1资料与方法1.1一般资料选取我院2008-06—2011-06收治的64例     

Changes of hypoxia-inducible factor-1 signaling and the effect of cilostazol in chronic cerebral ischemia

Hypoxiainducible factor1 and its specific target gene heme oxygenase1, are involved in acute cerebral ischemia. However, very few studies have examined in detail the changes in the hy poxiainducible factor1/heme oxygenase1 signaling pathway in chronic cerebral ischemia. In this study, a rat model of chronic cerebral ischemia was established by permanent bilateral common carotid artery occlusion, and these rats were treated with intragastric cilostazol （30 mg/kg） for 9 weeks. Morris water maze results showed that cognitive impairment gradually worsened as the cerebral ischemia proceeded. Immunohistochemistry, semiquantitative PCR and western blot analysis showed that hypoxiainducible factorla and heme oxygenase1 expression levels in creased after chronic cerebral ischemia, with hypoxiainducible factorla expression peaking at 3 weeks and heme oxygenase1 expression peaking at 6 weeks. These results suggest that the elevated levels of hypoxiainducible factorla may upregulate heine oxygenase1 expression fol lowing chronic cerebral ischemia and that the hypoxiainducible factor1/heme oxygenase1 sig naling pathway is involved in the development of cognitive impairment induced by chronic cerebral ischemia. Cilostazol treatment alleviated the cognitive impairment in rats with chronic cerebral ischemia, decreased hypoxiainducible factorla and heme oxygenase1 expression levels, and reduced apoptosis in the frontal cortex. These findings demonstrate that cilostazol can protect against cognitive impairment induced by chronic cerebral ischemic injury through an antiapoptotic mechanism.     

缺血再灌注损伤与细胞信号转导

短暂的缺血会对器官造成损伤,但是在恢复灌注后,损伤反而进一步加剧,这种现象称为缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI).临床上涉及缺氧/复氧过程的手术都不可避免地会发生IRI,比如重大器官的移植、冠脉搭桥、溶栓术等.IRI一直是医学研究的热点,近年来研究发现,缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)时,钙超载、供能不足和氧自由基的大量产生等理化因素刺激细胞,诱发信号介导的细胞损伤、凋亡是造成IRI的一个重要原因.本文就IRI与信号通路的研究进展做简要综述.