正常生育男性成熟精子mRNA的种类和特征

目的:剖析具有正常生育能力男性成熟精子mRNA的种类和丰度。方法:健康并育有后代的成年男性10例,禁欲1周后取精液,上游法优化精子,Trizol试剂提取精子总RNA。混合所有总RNA进行基因表达系列分析(SAGE)。结果:所建SAGE文库共获877个克隆,测序得到21 052个标签,出现两次以上的独特性标签有2 712种。经与SAGEm ap数据库比对,19.7%的独特性标签没有基因匹配,代表新基因;其余能匹配的基因中,67%具有蛋白质结合或核酸结合能力,41%具有催化活性,13%与信号转导有关,与细胞运输、精子结构、转录调节相关者分别达到10%左右。结论:人成熟精子中存在数量庞大、种类繁多的mRNA。     

基因表达谱芯片对结肠癌相关基因的研究

基因芯片技术是一项低消耗、高灵敏度、高通量地分析细胞内基因表达谱的新技术[1] ,目前已广泛应用于基因功能的研究 ,尤其是肿瘤发生的分子生物学方面的研究。结肠癌是消化道常见的恶性肿瘤 ,发病率在逐年增加 ,已成为严重危害人民健康的主要疾病之一。结肠癌的发生和发展与许多已知的和未知的基因相关 ,用基因芯片方法寻找在结肠癌组织中特异性表达差异的基因 ,会对结肠癌的早期诊断、防治起到积极的作用。一、材料与方法(一 )组织材料我院普外科经病理证实的 3例Ｄｕｋｅｓ改良分期Ⅰ期的结肠腺癌新鲜标本及距肿瘤边缘 5ｃｍ、ＨＥ染色无…     

利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子—2（IGF—2）

目的；研制有生物活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子－2（rhIGF-2)。方法：将14kD hIGF-2前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒（BmNPV)转移载体pBakPAK8中，经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后，通过体内同源重组的方式获得重组病毒BmNPV/IGF-2。以BmNPV/IGF-2感染5龄家蚕幼虫，分别在蚕染后24，48，72，96，108，120h提取家蚕血淋巴液，以ELISA法测定不同时家蚕血中IGF－2浓度，采用Westernblot分析鉴定IGF－2免疫学活性，MTT法观察其对NIH3T3细胞增殖的影响。结果：ELISA测定显示，BmNPV/IGF-2感染家蚕幼虫96h后IGF－2表达率最高，每毫升血淋巴中约含IGF－2 14μg，Western-blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成7.0kD成熟hIGF-2，并对NIH3T3细胞具有良好促增殖效应，其促细胞生长能力明显优于来源于E.coli的IGF－2标准品。结论；本研究实现具有免疫学活性及生物学活性的rhIGF-2在家蚕杆状病毒表达系统的高效表达。     

中国汉坦病毒H82O5株G2糖蛋白基因的克隆及在真核细胞中的瞬时表达

从感染病毒乳鼠脑组织提取总RNA，采用RT－PCR和分子克隆技术将扩增到的G2糖蛋白基因插入含CMV启动子的pcDNA3.1/His质粒载体中，通过脂质体介导转染COS－7细胞，用SDS－PAGE、Western-blot及IFIA方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果证明获得正向插入的G2－pcDNA3.1/His重组表达质粒，表达产物的相对分子量为56ku，与理论预期大小一致，并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体起特异反应。表明构建的G2－pcDNA3.1/His重组质粒所表达的蛋白为中国汉坦病毒株特有，能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性，重组质粒可应用于汉坦病毒的DNA疫苗研究。     

基因芯片技术在医学研究中的应用

基因芯片技术是同时将大量的探针分子固定到固相支持物上 ,借助核酸分子杂交配对的特性对DNA样品的序列信息进行高效的解读和分析。它可用于基因表达谱的分析、突变检测 ,克隆选择和文库筛选等研究工作 ,同时在人类疾病的检测 ,预防等方面也具有广阔的应用价值 ,在未来的生命科学领域中必将发挥重要作     

腰椎间盘内Ⅸ型胶原基因表达的观察

腰椎间盘内Ⅸ型胶原约占椎间盘胶原总量的 1 %～ 3 % [1 ] ,其确切的作用和分布还不清楚。我们以原位杂交的方法探讨胎儿、正常不同年龄的成人以及病理椎间盘中Ⅸ型胶原基因表达的规律。1 .资料与方法 :标本的制备 :(1 )胎儿组 :保胎失败胎龄 7个月的胎儿 ,在 4ｈ内无菌操作下取出椎间盘。 (2 )正常成人组 :取自意外死亡的成人 (2 2岁 )。(3)病变组 :取自椎间盘突出症患者的腰4 5和腰5 骶1 手术标本。将以上标本制备成厚度为 1 0 μｍ的原位杂交冰冻切片置于 - 70℃的低温冰箱中备用。含有Ⅸ型胶原ｃＤＮＡ探针序列的重组质粒ｐＭＣｏｌ1 0…