多指标评价不同干燥工艺及切片对三叶青质量的影响

目的:研究不同干燥工艺和切片对三叶青质量的影响,优选三叶青的干燥处理方式。方法:分别采用2种处理方式(切片、不切片)及5种干燥方法(阴干、晒干、热风干燥、微波干燥、冷冻干燥)对三叶青块根进行处理,分别干燥3.5 h~213.0 h后,以药材中总黄酮、多糖、总多酚和β-谷甾醇的含量为指标,对比分析不同干燥工艺对三叶青质量的影响。结果:与不切片比较,三叶青切片后可缩短干燥时间,减少药材中活性成分的损耗。5种干燥方法中,冷冻干燥对三叶青中活性成分保留效果最好,切片干燥后药材中总黄酮、多糖、总多酚和β-谷甾醇的含量分别约为18.5、92.7、9.19、0.344 mg/g;微波干燥次之,随后依次为热风干燥、阴干和晒干。各干燥方法间有效成分含量差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:不同干燥工艺对三叶青质量有明显影响;从成本、有效成分含量及实用性等综合分析,三叶青宜采用切片后在60℃热风干燥的方式处理。     

不同生长环境三叶青中总黄酮提取工艺及含量比较

目的:研究三叶青活性成分最佳提取工艺并比较不同生长环境下三叶青中黄酮的含量.方法:以黄酮为考察指标,甲醇浓度、提取时间和温度为试验因素,通过单因素试验和正交试验,优化提取工艺条件.采用超高效液相色谱串联质谱法,测定经优化工艺提取的不同生长环境三叶青中的黄酮含量,并进行比较和分析.结果:甲醇浓度对黄酮成分的提取影响较大,提取时间和温度的影响程度不显著.较佳提取工艺为:60％甲醇,80℃水浴,提取45 min.10批样品中黄酮的含量差异较大,每克生药中,以云南来源的三叶青中黄酮含量最高,达到2757.99μg/g,万载来源次之,为1853.46μg/g.结论:本研究提供了三叶青黄酮的较优提取工艺,同时比较了不同生长环境下三叶青中黄酮的含量,可为三叶青药材的质量控制提供一定的参考.     

三叶青水提物对慢性阻塞性肺疾病MMP－9和TIMP－1的影响

目的：观察三叶青水提物对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠基质金属蛋白酶9（Matrix met alloproteinases－9,MMP－9）和基质金属蛋白酶抑制剂－1（Matrix met alloproteinases inhibitor－1,TIMP－1）的影响,探讨三叶青对大鼠肺组织的作用机制。方法选择烟熏加气管内滴注内毒素（ LPS）法复制COPD模型,将清洁级健康SD雄性大鼠30只,随机分为3组分别为对照组、模型组和三叶青组,每组10只。造模成功后肺组织采用HE染色观察病理改变,采用免疫组织化学方法测定大鼠肺组织中MMP－9和TIMP－1的表达,酶联免疫吸附法测定大鼠血清、支气管肺泡灌洗液和肺匀浆组织中MMP－9和TIMP－1的表达。结果光学显微镜下可见三叶青组大鼠炎症较模型组有所减轻。酶联免疫吸附法检测结果显示,模型组大鼠肺组织、血清和支气管肺泡灌洗液中MMP－9和TIMP－1含量较对照组显著增加（ P＜0．05）,三叶青组的MMP－9和TIMP－1含量较模型组显著下降（P＜0．05）。免疫组织化学检测结果显示,与对照组比较模型组肺组织中的MMP－9和TIMP－1表达明显增多,差异有统计学意义（P＜0．05）。与模型组比较三叶青组肺组织中的MMP－9和TIMP－1表达减少,差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论三叶青可能通过下调MMP－9、TIMP－1表达,调节MMP－9／TIMP－1失衡,进而干预气道重塑,延缓病变进展,这可能是其治疗COPD的作用机制之一。     

三叶青提取物对A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响

目的探讨三叶青乙醇提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。方法 采用MTT比色法,测定不同浓度三叶青乙醇提取物对A375细胞体外抑制作用;比色法测定酪氨酸酶活性和黑色素含量。结果在质量浓度为1～625μg/ml范围内,随着三叶青乙醇提取物浓度增大可抑制A375细胞的增殖(P<0.01);三叶青乙醇提取物浓度在1～5μg/ml时,对酪氨酸酶活性和黑色素合成抑制有增加趋势;而在25～625μg/ml时,对A375细胞有一定毒性。结论三叶青乙醇提取物在一定浓度范围内(1～625μg/ml)能抑制A375细胞的增殖,且呈剂量依赖关系。     

三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠髓源性抑制细胞的作用

目的研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠髓源性抑制细胞(MDSCs)的作用,探讨三叶青黄酮抗肿瘤机制。方法 40只C57BL/6雌性小鼠随机分为5组,三叶青黄酮高(100 mg/m L)、中(50 mg/m L)、低剂量组(25 mg/m L)、造模组及正常组,每组8只。除正常组外各组小鼠建立肺癌模型,24 h后各组灌胃给药。14天后处死小鼠,剥取瘤组织,计算抑瘤率;流式细胞仪检测小鼠脾脏中MDSCs(GR-1~+CD11b~+)、CD4~+T和CD8~+T细胞的表达;酶联免疫吸附法测定小鼠外周血中一氧化氮合成酶(i NOS)和精氨酸酶1(Arg-1)表达。结果三叶青黄酮高、中、低剂量组抑瘤率分别为:44. 3%、29. 2%、15. 4%。与正常组比较,造模组MDSCs(GR-1~+CD11b~+)及Arg-1、i NOS含量及CD8~+T比例增高(P 0. 01)、CD4~+T比例、CD4~+T/CD8~+T比值降低(P 0. 01)。与造模组比较,三叶青黄酮各组MDSCs(GR-1~+CD11b~+)含量、CD8~+T细胞比例、Arg-1、i NOS含量降低,CD4~+T细胞比例、CD4~+T/CD8~+T比值升高(P 0. 01)。与三叶青黄酮高剂量组比较,三叶青黄酮中剂量及低剂量组MDSCs(GR-1~+CD11b~+)含量、CD8~+T细胞比例、Arg-1含量升高,CD4~+T细胞比例、CD4~+T/CD8~+T比值降低(P 0. 05,P 0. 01),同时三叶青黄酮低剂量组i NOS含量增高(P 0. 01)。结论三叶青黄酮可通过改善荷瘤小鼠肿瘤免疫抑制状态发挥抗肿瘤作用,其机制可能与三叶青黄酮可下调MDSCs及其相关炎症因子的表达有关。     

三叶青对迟发型变态反应的影响

目的观察三叶青对迟发型变态反应的影响。方法以2,4,6-三硝基氯苯诱导小鼠接触性皮炎及二甲苯诱导耳肿胀,测量诱导相和效应相小鼠的耳廓厚度;以绵羊红细胞诱导小鼠足肿胀,测量诱导相和效应相小鼠足肿厚度。结果三叶青可抑制2,4,6-三硝基氯苯及绵羊红细胞诱导相肿胀反应,对二甲苯所致的耳廓肿胀无抑制作用。结论三叶青主要作用于T淋巴细胞的活化、增殖、分化及效应细胞形成的过程等,而对抗原特异性T细胞的效应过程及其以后的炎症过程影响较小,      

HPLC-ELSD法同时测定三叶青中胡萝卜苷和β-谷甾醇的含量

目的 建立同时测定三叶青药材中胡萝卜苷和β-谷甾醇含量的方法.方法 采用HPLC-ELSD法,岛津VPN-ODS C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,以甲醇为流动相,体积流量为0.7 mL·min-1,柱温为30℃;漂移管温度60℃,氮气体积流量1.8L ·min-1.结果 胡萝卜苷和β-谷甾醇分别在0.1～2.0 μg和0.2 ～4.0 μg范围内呈良好线性关系,回归方程分别为Y=0.696X+2.737,r =0.999 7;Y=0.752 X+2.909,r =0.999 6.平均回收率分别为99.32％、100.13％.结论 该方法简便,结果准确、可靠,可作为三叶青药材中胡萝卜苷和β-谷甾醇的含量测定方法,为三叶青质量控制提供依据.     

三叶青的蒸腾作用与气孔结构研究

目的 以浙江台州、福建闽侯和顺昌3个产地的1年生三叶青Tetrastigma hemsleyanum叶片为实验材料,研究不同光照强度对三叶青植株的蒸腾作用与气孔结构的影响。方法 采用扫描电镜技术观察不同品种三叶青叶片的气孔结构与变化,并测定在不同光照强度 [0～2 000 μmol/(m²·s)] 条件下叶片的蒸腾速率、气孔导度、水分利用率、净光合速率,寻找三叶青栽培中最适光照强度。结果 三叶青的气孔仅存在于叶片下表皮,呈环绕类型平行分布。相同温度下加重了光照强度,浙江台州产地和福建闽侯产地三叶青的净光合速率、气孔导度以及蒸腾速率随着光照强度增加表现出先升高后下降趋势。同时,福建顺昌产地三叶青的净光合速率、气孔导度以及蒸腾速率均显示上升趋势。福建闽侯产地三叶青的光饱和点为600 μmol/(m²·s),顺昌产地三叶青的光饱和点为1 900 μmol/(m²·s),水分利用率保持较高状态。结论 产地和外界光照强度都是影响三叶青蒸腾作用的重要因素,有利于三叶青的块根生长,促进植株体内黄酮类化合物积累。     

三叶青提取物对人树突状细胞功能的影响

目的探讨三叶青提取物TH-b对树突状细胞(dendritic cells,DC)功能的影响。 方法分离健康人外周血中单个核细胞,用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、白介素-4 (interleukin-4,IL-4)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导培养DC。用念珠菌孢子法检测经TH-b作用后的DC吞噬能力;将经TH-b作用后的DC与同种外周血淋巴细胞进行混合培养,以检测淋巴细胞增殖率;采用流式细胞术检测DC表面标记CD195和TH-b作用后DC的表面标记CD80、CD83、CD86、HLA-DR;用酶免疫法检测TH-b作用后DC的培养上清液中的IL-12含量。 结果培养7 d后DC CD195表达水平(85.3%)明显高于培养前(2.4%)。三叶青提取物TH-b部分对DC吞噬能力有作用明显,TH-b浓度为0.62 μg/ml时吞噬能力最强。各种TH-b浓度作用后DC的细胞表面CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达均明显升高,以0.62 μg/ml最明显,分别为88.56%±8.16%、86.75%±7.59%、99.34%±8.24%、96.15%±8.27%,显著高于对照组的71.38%±7.31%、43.61%±4.29%、93.41%±8.34%、79.26%±5.12%,差异有统计学意义(P<0.05)。TH-b作用后的DC与淋巴细胞在1:1、1:10、1:100的比例下,对同种外周血淋巴细胞具有强烈的激发和促增殖作用,以1:1最明显。TH-b作用DC 48 h后,DC分泌的IL-12均明显升高,在0.62 μg/ml时IL-12分泌达最高值(526.3 pg/ml),显著高于对照组(260.1 pg/ml)(P<0.05),并有浓度窗现象。 结论低浓度三叶青提取物TH-b部分能够显著促进人DC吞噬功能,促进DC表面标志物CD80和CD86的表达,提高DC成熟标记和IL-12分泌能力。     

三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植性肿瘤的抑制作用及免疫功能的影响

目的：观察三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及免疫功能的影响。方法：采用动物移植性肿瘤实验法腋下接种Lewis肺癌细胞制备小鼠荷瘤模型。观察三叶青乙酸乙酯提取物高、中、低剂量对瘤重、抑瘤率、脾指数、胸腺指数的影响,ELISA法检测血清中细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α含量。结果：三叶青各剂量组瘤重均低于模型组（P〈0.05或P〈0.01）,并呈剂量依赖性;高、中剂量组脾指数、胸腺指数较模型组增高,差异具显著性（P〈0.05）;三叶青高、中剂量组IFN-γ、TNF-α含量高于模型对照组,差异具显著性（P〈0.05）。结论：中药三叶青乙酸乙酯提取物具有抑制Lewis肺癌移植瘤作用,且能保护实验动物的细胞免疫器官,提高免疫功能。