MecA、femB基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的了解mecA、femB多重聚合酶链反应（PCR）法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出效率。方法对临床分离的71株非重复的金黄色葡萄球菌,采用多重PCR进行检测。结果 mecA、femB多重聚合酶链反应对MRSA的检测的特异性为100%,敏感性为97.87%。结论 mecA、femB多重PCR法可以对临床分离的金黄色葡萄球菌的甲氧西林耐药作出判断,是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

女性晚期非小细胞肺癌患者的临床特点及预后分析

目的分析女性晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床特点及其与预后的关系。方法收集218例初治女性晚期NSCLC患者的病历资料,随访3年,观察患者的总生存时间(0S)。结果218例患者中,腺癌占78.9%(172/218),中位OS为16个月(95%CI 13.257-18.743)。多因素分析结果显示,一线治疗方案、二线治疗方案与OS明显相关(P<0.05)。亚组分析显示,一线酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)治疗有效率为75.0%,中位OS为16个月;二线TKI有效率为35.9%,中位OS为23个月;老年患者(≥65岁)二线化疗或口服TKI与OS明显相关(P<0.05)。病理类型、肝转移、放疗与否与治疗转归相关。结论女性晚期NSCLC患者以腺癌为主,一线、二线治疗方案效果是女性晚期NSCLC患者的独立预后因素。一线TKI有效率较二线TKI有效率高,但OS无明显差异。老年患者二线化疗或口服TKI均能改善OS。非腺癌、肿瘤负荷大是临床治疗不易获益患者的临床特点。     

ShRNA干扰FAP蛋白表达对小鼠Lewis肺癌生长的影响

摘 要：［目的］ 研究shRNA干扰成纤维细胞活化蛋白（FAP）表达对小鼠Lewis肺癌生长的影响并探讨可能的作用机制。［方法］ 建立C57雌鼠皮下移植瘤和肺转移瘤模型,随机分成3组：FAP-shRNA组、HK组、5%葡萄糖（5%GS）组,分别接受FAP-shRNA干扰质粒脂质体复合物、空载质粒脂质体复合物及5%葡萄糖水治疗。记录移植瘤大小、重量,肺转移瘤数目及肺湿重。检测各组FAP表达水平、肿瘤微血管密度、胶原纤维情况。［结果］ FAP-shRNA组小鼠皮下移植瘤生长较5%GS组和HK组缓慢。FAP-shRNA组的肺转移瘤结节数目和肺湿重均小于5%GS组和HK组。并且FAP-shRNA组FAP表达量下调,肿瘤微血管密度减少,Ⅰ型胶原蛋白表达增多,胶原纤维沉积增加且分布紊乱。［结论］ FAP-shRNA干扰质粒抗肿瘤作用可能是通过减少肿瘤血管生成,增加Ⅰ型胶原蛋白表达,最终改变肿瘤微环境而实现的。     

RhoE小干扰RNA对乳腺癌细胞恶性表型的影响

目的　观察下调 Ras 同源类似物 E (RhoE) 表达对人乳腺癌细胞 231 生物学行为的影响。 方法　Western blot 技术检测小干扰 RNA（siRNA）转染前后 RhoE 在乳腺癌细胞 231 中的表达;RhoE siRNA 的细胞转染用 lipofectamine 2000 脂质体法;Cell Counting Kit-8 检测转染细胞及对照细胞的增殖变化;损伤刮擦试验和体外侵袭实验（Transwell 小室）分别检测转染细胞及对照细胞的迁移与侵袭能力。 结果　RhoE 在乳腺癌细胞 231 中的表达较高;成功转染 RhoE siRNA 的乳腺癌细胞,Western blot 显示 RhoE 的表达被明显的抑制;RhoE 的表达被抑制后对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有着明显的促进作用。 结论　下调 RhoE 表达能够明显促进乳腺癌细胞的增殖﹑迁移和侵袭,提示 RhoE 可能在乳腺癌的发生发展中起着重要作用。     

丹参注射液对血管内皮细胞低氧损伤的保护作用

目的 探讨丹参注射液对血管内皮细胞低氧损伤的保护作用及可能的机制.方法 将体外培养的人脐静脉内皮细胞株(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)分为3组,即常氧培养组、低氧培养组及低氧培养+丹参组,通过倒置相差显微镜观察并比较各组细胞的形态变化;MTT法检测细胞活性;AO/EB染色和Annexin V -FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;利用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧水平;并取各组细胞上清液进行总抗氧化能力检测.结果 丹参能够显著减少低氧引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,降低细胞内活性氧水平,并调节细胞总抗氧化能力.结论 低氧条件下,丹参对HUVEC有保护作用,其机制可能与清除自由基有关.     

结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌缺血模型的实验研究

[目的]研究改进建立大鼠急性心肌梗死模型的方法,提高造模效率并验证该模型的稳定性。[方法]分别采用传统方法(方法一)和改进方法(方法二)制作模型,用胸壁损伤大小、血流动力学指标、心肌梗死面积及28d存活率来评价两种方法的优缺点。[结果]改进的模型优于传统方法,且对心脏血流动力学参数没有显著影响。[结论]结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌缺血模型稳定,可应用于心肌缺血相关实验研究中。     

利用旋转式生物反应器快速扩增骨髓间充质干细胞

目的　探讨旋转式生物反应器是否能促进骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)的快速扩增。方法　将MSCs细胞放入盛有Myelocult(上标 TM)培养液生物反应器中动态培养,并在Myelocult(上标 TM)培养液中补充一些因子,如干细胞因子(SCF),白介素3和6(IL-3, IL-6)。检测和比较经反应器处理前后的MSCs的表型,增生和分化能力的变化。结果　在生物反应器中培养8d,总细胞数、Stro-l(上标 +) CD44(上标 +) CD34(上标 -)间充质干细胞和CD34(上标 +)CD44(上标 +) Stro-l(上标 -)造血干细胞分别增加了9、29和8倍。实验研究结果显示,生物反应器扩增的间充质干细胞表达了原始间充质干细胞的标记物内皮因子(SH2)和波形蛋白,却没有发现与细胞系的分化有关的标记物,包括骨钙素（成骨指标）,Ⅱ型胶原（成软骨指标）和C/EBPα（成脂指标）。生物反应器组的细胞集落生成效率（成纤维细胞集落／天）是对照组（无生物反应器组）的1.44倍。经诱导后,生物反应器扩增的间充质干细胞可以分化成成骨细胞,软骨细胞和脂肪细胞,其分化能力与未经生物反应器处理的MSCs无区别。结论　旋转式生物反应器结合改良的Myelocult(上标 TM)培养液可用于快速扩增间充质干细胞。     

分泌型重组mPSMA腺病毒的构建及表达

目的 构建分泌型重组小鼠前列腺特异膜抗原腺病毒(Ad-mPSMA),并检测其免疫效果。方法 利用AdEasy重组腺病毒载体系统,通过PCR扩增小鼠PSMA全长序列,并在基因的5′端加上人IL-2的信号肽序列,亚克隆至pAdenoVator CMV5穿梭质粒,与pAdenoVator ΔE1/E3进行同源重组获得pAd-mPSMA重组质粒,经HEK293细胞包装扩增获得重组病毒颗粒。通过RT-PCR及Western blot检测小鼠PSMA基因在HeLa细胞中的转录及表达。以该重组腺病毒免疫小鼠,对mPSMA的特异性抗体进行检测。结果 成功将mPSMA基因克隆至pAdenoVator ΔE1/E3载体上,病毒滴度为1.32×1011IU/ml,RT-PCR证实mPSMA的转录,Western blot证实mPSMA的分泌表达,并在小鼠血清中检测到mPSMA的特异性抗体。结论 成功构建分泌型重组mPSMA腺病毒,为前列腺癌特别是激素难治性前列腺癌的预防和治疗提供了更广阔的前景。     

原发恶性纵隔生殖细胞瘤的治疗与预后

目的:探讨纵隔原发恶性生殖细胞肿瘤的临床特征、治疗及预后.方法:回顾性分析四川大学华西医院2008年至2013年收治的生殖细胞瘤患者,筛选纵隔原发恶性生殖细胞肿瘤,采集临床病理资料分析预后.结果:经病理确诊生殖细胞瘤患者共1 523例,原发于纵隔163例,其中恶性14例,包括精原细胞瘤6例,非精原细胞瘤8例.病人接受手术、放疗及化疗的综合治疗.精原细胞瘤患者生存时间优于非精原细胞瘤患者(P=0.015).结论:精原细胞瘤患者生存优于非精原细胞瘤患者.手术对纵隔原发恶性GCT的价值仍难以断定,需要仔细评估疾病的具体情况.放化疗的综合治疗应当是此类病人的主要治疗模式.     

一种合成的纳米粒高分子材料的细胞毒性研究

目的 检测本实验室新合成的准备应用于静脉注射的系列高分子材料poly(ethylene glycol)-D,L-lactic and glycolic acid-poly(ethylene glycol)(mPEG-PLGA-mPEG,PELGE)以及由其制成的纳米粒对多种细胞的细胞毒性.方法 利用快速评定细胞增殖率和细胞毒性的噻唑蓝比色法(MTT),不仅参照美国药典用小鼠成纤维细胞L929细胞株进行评价,还根据该材料将来可能的应用领域,用Chang氏正常肝细胞株,原代人肾血管内皮细胞,原代人胚成骨细胞,原代人胚成肌细胞评价其细胞毒性.结果 结果表明该系列聚合物对L929细胞株24 h内和内皮细胞48 h内的毒性为0或I级,即无细胞毒性,而对其它不同种细胞具有不同程度的细胞毒性.结论 该材料具有应用于静脉注射的可能性.该实验为进一步的动物试验提供依据,同时为该新型材料应用于实际提供了前提检测方法.