淀粉样前体蛋白在快速老化痴呆小鼠P8海马中表达的免疫组化学研究

目的:观察淀粉样前体蛋白(APP)在快速老化痴呆小鼠P8(SAMP8)海马中的表达,探讨其与SAMP8小鼠增龄性变化的关系。方法:选用1、4、8、12月龄的SAMP8,用同龄正常老化小鼠R1(SAMR1)作为对照组,每组各8只,用免疫组化方法检测海马区APP的表达。结果:APP主要在SAM鼠海马神经元胞浆内表达,海马不同区域均有表达。定量结果显示对照组SAMR1小鼠海马各区域APP的表达随月龄增加无显著性改变(P>0.05);而SAMP8小鼠APP的表达则随月龄增加而增加,8月龄和12月龄SAMP8小鼠CA1区的表达量显著高于1月龄组(P<0.05),也分别显著高于同月龄对照组(P<0.05),CA3区APP的改变稍晚于CA1区,与同品系1月龄小鼠及同龄对照组比较,12月龄时显示有显著性增加(P<0.05)。结论:SAMP8小鼠海马APP的表达随月龄增加而增加,提示APP表达量的增加与SAMP8小鼠的快速老化相关。     

丙型肝炎基因型定量检测及分型检测方法的研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一种RNA病毒,可以引发各种慢性肝病,其中包括肝硬化和肝细胞癌.全球每年HCV感染的患者数呈上升趋势,他已成为人类亟待解决的公共卫生难题.HCV可以分为6种主要的基因型以及70多种亚型,不同的基因型对抗病毒治疗的效果不同.如果在治疗前能通过准确灵敏的检测手段确定HCV的基因型,将会对临床治疗有重要的意义.本文对HCV基因型全球分布、临床表症与治疗、分型依据以及基因型与定量关系进行了概述,并重点阐述HCV基因分型的检测技术.     

介绍一种诊断明确时定性检测方法的性能评估方案

目的建立一种诊断明确时定性检测方法的性能评估方案。方法采用比较分析的方法，分别将新方法和原方法的检测结果与明确诊断结果进行比较。结果以实例的方式将新方法、原方法的检测结果和诊断结果进行比较，得出性能较好的定性检测方法。结论定性检测是临床实验室一种很重要的检测方法，其检测性能如何直接决定患者的检测结果，该评估方法的提出为临床实验室引入一种新的检测方法提供了指南。     

产毒型O1群霍乱弧菌特异性基因序列实时荧光双重TaqMan PCR快速检测体系的建立

目的建立针对O1群霍乱弧菌的高敏感、高特异的实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应快速检测体系。 方法根据O1群霍乱弧菌主基因组O抗原编码基因rfb-O1和霍乱肠毒素的A亚基编码基因ctxA的特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用便携式Smartcycler Ⅱ实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的敏感性,用19种其他肠道致病菌及院内感染常见致病菌评价该检测体系的特异性。 结果实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应快速检测体系对O1群霍乱弧菌的检测敏感度为1．0×10^2拷贝每反应体系;对O1群霍乱弧菌基因组DNA的检测敏感度为1．0×10^1 pg每反应体系;该检测体系在检测19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌时不存在非特异性扩增;整个反应在2h内完成。 结论本研究建立的实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系可作为产毒型O1群霍乱弧菌特异、敏感、快速的检测手段,也可同时检测O1群霍乱弧菌产生霍乱肠毒素的能力。     

北京市汉族人群MEF2A基因第7号外显子突变的检测及其意义

目的 检测我国汉族人群中MEF2A基因第7号外显子的突变，探讨这一突变的临床意义。方法 用PCR-单链构象多态性（SSCP）和（或）PCR产物直接测序法对500例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者、157例经冠状动脉造影证实无冠状动脉堵塞者为非冠心病组及242例健康体检者的MEF2A基因第7号外显子进行基因突变的检测。结果 对参与研究的899例受试者MEF2A基因第7号外显子基因突变的检测结果表明，在MEF2A第7号外显子中未发现任何类型的基因突变。结论 MEF2A第7号外显子的突变可能不是我国汉族人群冠状动脉粥样硬化性心脏病的遗传易感因素。与国外研究比较，在MEF2A第7号外显子突变的临床意义上，我国汉族人群与白种人群间存在明显的地域和种族差异。     

靶向白血病干细胞CD123的毒性融合蛋白的制备

 目的　构建靶向白血病干细胞CD123的融合蛋白,检测其表达效果及其识别白血病干细胞的活性。方法　采用PCR法扩增白细胞介素-3（IL-3）和毒素蛋白（LP）的编码DNA序列,经酶切、连接,克隆至表达载体pAYZ,转化大肠杆菌E.coli 16C9,鉴定阳性克隆菌落,经低磷培养基AP5诱导表达融合蛋白IL-3-G4S-LP,用CM-FF阳离子柱和抗-Etag亲和层析柱纯化,纯化产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,流式细胞术测定其与红白血病细胞TF1的结合活性。结果　构建的融合蛋白在大肠杆菌中以可溶性蛋白表达,纯化后纯度达95 %以上,表达量约为1 mg／L,并有与白血病干细胞表面IL-3受体α亚基（CD123）特异性结合的活性。结论　构建的融合蛋白IL-3-G4S-LP具有与白血病干细胞结合的特性,可望成为复发和耐药白血病的治疗药物。     

外源人gp96基因在肿瘤细胞中的高效表达

背景与目的：从肿瘤细胞中分离出的热休克蛋白gp96制备物免疫小鼠可产生抗相应肿瘤的特异性保护性细胞毒性T细胞免疫应答,为肿瘤免疫治疗开辟了一条新的可行性途径,但gp96害细胞中的表达水平较低,从有限的细胞或组织中获得的gp96制备物难以满足研究的需要。因此,本研究拟为制备高质量和充足的gp96而建立高表达gp96的单克隆细胞株。方法：构建人gp96cDNA的重组表达质粒pcDNA-hgp96并将其转染HeLa细胞,G418筛选稳定转染的阳性细胞克隆,然后用Western印迹分析单克隆细胞株的gp96表达时。结果：成功构建了人gp96的重组表达质粒,建立了稳定转染的单克隆细胞株,并筛选出一株高表达gp96的单克隆细胞。结论：成功建立了高表达gp96的单克隆细胞株,为gp96抗肿瘤免疫的研究奠定了基础。     

同位素稀释气相色谱质谱法测定血清孕酮

目的建立一种血清孕酮测定候选参考方法。方法以[3，4-^13 C2]孕酮为内标，用正己烷提取血清，以羟丙基-β-环糊精水溶液对提取液作净化处理，用七氟丁酸酐对孕酮进行衍生化。用气相色谱分离衍生产物，质谱选择离子监测模式检测孕酮与内标的特定碎片离子，用包括法定量。结果血清孕酮测定的总变异系数为0．69％～2．12％，平均分析回收率为98．3％～100．1％。分析血清孕酮标准物质，测定结果与靶值的偏差小于1．5％。结论建立的同位素稀释气相色谱质谱测定血清孕酮的方法，准确、精密，可望作为测定血清孕酮的参考方法。     

病原体核酸检测中泌尿生殖道标本采集的质量控制

在性传播疾病病原体核酸的PCR检测中，正确的泌尿生殖道标本采集方法和检测中必要的质控措施是保证检测质量的前提。标本中的PCR抑制物如血红蛋白、乳铁蛋白和尿素等，以及在标本采集时未采到上皮细胞是检测“假阴性”的主要原因。高效的核酸提取方法、标本冷藏后再检测和对标本进行稀释可有效地消除PCR抑制物的作用。对标本进行显微镜下观察是否有上皮细胞，以及检测标本时共扩增检测β-珠蛋白基因DNA，可监测标本采集的有效性。     

阿尔茨海默病分子遗传学最新研究进展(综述)

已知与阿尔茨海默病密切相关的基因有APP、PS-1、PS-2和apoE基因。随着分子遗传学研究的深入，人们又发现其他一些基因如心血管危险因子(LRP、ACE与LPL)、炎症基因(IL-1、1L-2、TNF-α)等也与阿尔茨海默病有相关性，多个相关基因的危险等位基因和环境因素的综合作用可能促进阿尔茨海默病发生发展。此文就近年来心血管危险因子、炎症基因及其他一些基因与阿尔茨海默病的相关性研究进展做一综述。