慢性乙型肝炎中医证候聚类分析研究

目的探讨四川地区慢性乙型肝炎中医证候规律,为该病的中医客观化研究提供参考依据。方法采用横断面研究方法,根据课题组前期制定的慢性乙型肝炎中医证候规律研究病例报告表,记录四川地区8家子课题临床单位收集的1064例慢性乙型肝炎患者的四诊信息,运用K—means聚类分析的方法,探索慢性乙型肝炎证候特征规律。结果利用K-means聚类分析对1064例慢性乙型肝炎患者中医证候进行研究,结合专业知识,经专家讨论后,最终确定8类切合临床的证型,由多到少依次为脾胃湿热（326例,30．6％）、肝胆湿热（193例,18．1％）、肝脾湿热（158例,14．8％）、肝郁脾虚（92例,8．6％）、肝郁化热（89例,8．4％）、脾虚湿困（74例,7．0％）、湿热夹肝肾阴虚（73例,6．9％）及阳虚夹血瘀证（59例,5．5％）。结论四川地区慢性乙型肝炎的主要证型为脾胃湿热、肝胆湿热、肝脾湿热、肝郁脾虚、肝郁化热、脾虚湿困、湿热夹肝肾阴虚及阳虚夹血瘀证。     

梯度离心在体外处理精子结合抗体中的应用

目的：比较单纯PureSperm 方法和PureSperm 联合上游法处理精子结合抗体阳性精子的效果。方法：采用单纯梯度PureSperm 及PureSperm 联合上游法处理精子结合抗体阳性的精子,比较2种处理方法处理后精子结合抗体消退情况。结果：2种方法处理后,精子结合抗体滴度较处理前降低（P＜0.01）;梯度PureSperm 联合上游法处理后,精子结合抗体滴度的下降较单纯PureSperm 方法更显著（P＜0.05）。结论：采用梯度PureSperm 离心或梯度PureSperm 离心联合上游法处理精液,可以提高精子质量,再行宫腔内人工授精可能提高免疫性不育的治疗效果。     

过敏性哮喘大鼠模型结肠和肺组织CCK-8、CGRP、SP及VIP变化观察

目的 观察过敏性哮喘大鼠模型消化系统各组织八肽胆囊收缩素（cholecystokinin octapeptide,CCK-8）、降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide,CGRP）、P物质（substance P,SP）、血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）变化。方法 以1％卵清蛋白复制肺病（过敏性哮喘）大鼠模型,观察其对从胃至直肠整个消化系统的6个主要部位（胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠和直肠）的病理形态和相关调控物质CCK-8、CGRP、SP、VIP的影响。结果 模型大鼠肺和结肠组织病理形态同步改变,而胃、十二指肠、空肠、回肠、直肠无明显变化。模型大鼠肺组织和结肠组织CCK-8（79 961.4±12 577.9,48 519.5±12 240.7）、CGRP（41 950.1±12 600.1,38 059.8±11 942.4）、SP（88 243.9±32 177.2,47 417.8±16 462.4）、VIP（20 711.4±7 334.6,43 208.1±13 433.8）均出现显著变化（P〈0.05,P〈0.01）,而胃、十二指肠、空肠、回肠和直肠的上述物质无显著变化（P〉0.05）。结论 肺病可影响到结肠,引起结肠组织出现病理改变和相关调控物质（CCK-8、CGRP、SP、VIP）发生改变;而对胃、十二指肠、空肠、回肠和直肠的影响不显著。     

自发性糖尿病GK 大鼠糖尿病周围神经病变模型的建立

摘要： 目的 通过高脂饲养 GK 大鼠建立一种符合人类糖尿病周围神经病变 （DPN） 发病特点, 又操作简单的 DPN 大鼠模型。方法 7~8 周龄 SPF 级雄性自发性 2 型糖尿病 GK 大鼠 30 只, 喂养高脂饲料造模。另取 30 只 SPF 级正常 Wistar 大鼠作为正常组, 喂养普通饲料。每周监测动物血糖、 体质量、 饮水量、 饲料量。分别于干预 8 周、 12 周、 16 周后检测血清糖化血红蛋白、 坐骨神经传导速度, 取对侧坐骨神经做 HE 染色, TUNEL 染色计算细胞凋亡指数。结果 随着造模时间延长, GK 大鼠逐渐出现多饮、 多食、 生长迟缓等表现。与正常组相比, 造模 12 周及 16 周的大鼠血糖、 糖化血红蛋白升高 （P < 0.01）, 感觉神经传导速度降低 （P < 0.01）, 运动神经传导速度有一定下降趋势（12 周 P < 0.05, 16 周 P > 0.05）, 坐骨神经病理形态及雪旺细胞凋亡情况均提示 DPN 的形成, 并与正常大鼠形成鲜明对照 （凋亡指数 P < 0.01）。结论 长期高脂饲料喂养的 GK 大鼠是 DPN 研究的良好模型, 12 周是较为成熟且经济的造模时间。     

细胞因子预处理对体外扩增NK 细胞活性的影响

目的 采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血单个核细胞（PBMCs）进行自然杀伤细胞（NK）的 扩增培养,培养过程中白细胞介素IL-2、IL-12、IL-15、IL-18 以不同组合及不同方式添加,探究体外培养 NK 细胞的细胞因子最佳组合和添加方式。方法 根据细胞因子组合及添加方式的不同,将NK 培养分为3 组。 A 组：IL-2+IL-15 组,B 组：IL-2+IL-12+IL-15+IL-18 组,C 组：IL-12+IL-15+IL-18 预处理/IL-2 组。 培养过程中第7 天和第14 天分别取样统计各组细胞因子培养后的细胞数量,并使用流式细胞仪检测NK 细胞 表面分子表达;将NK 细胞与K562 细胞共培养,然后ELISA 测定NK 细胞的IFNγ 释放量,CSFE/7-AAD 法 检测NK 细胞的杀伤活性。结果 3 组不同的培养方式所得细胞的扩增倍数差异无统计学意义,随着培养时间的 增加,NK细胞的比例也逐渐上升,3组间NK细胞比例差异无统计学意义（P >0.05）。NK细胞表面CD25（IL-2Rα） 的表达情况比较,差异有统计学意义（P <0.05）,C 组的阳性率高于A 和B 组。IFN-γ 的释放量和NK 细胞的 体外杀伤活性一致,均为C 组高于A 和B 组。对肿瘤患者的NK 细胞,C 组的细胞因子添加方式也能很好的进 行扩增（CD3-CD56+ 细胞比例大于50%）。结论 C 组中的细胞因子预处理方式能够高效扩增NK 细胞,与A 或B 组联合添加的方式比较,该方式能显著激活NK 细胞的杀伤活性。     

基于数据挖掘分析中成药治疗阳痿用药规律

目的：基于数据挖掘分析中成药治疗阳痿用药规律。方法：筛选整理《中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂》《中国药典》《中国药典临床用药须知：中药成方制剂卷》《国家中成药标准汇编》《国家药品标准：新药转正标准》中有关治疗阳痿的中成药,分析中成药中药物的使用频次、药物功效、性味归经,并采用复杂网络、因子分析和关联规则分析方法总结中成药治疗阳痿的用药规律。结果：共筛选出处方86首,涉及中药176味。使用频次较高的中药有枸杞子、熟地黄、菟丝子、淫羊藿、鹿茸、当归、肉苁蓉等。药物以补虚药、收涩药、利水渗湿药为主;多归肾、肝、脾经;药性以温、平性多见;药味以甘、辛为主。关联分析得到最核心药物组合为熟地黄-山药-茯苓-枸杞子。复杂网络分析结果得到当归-黄芪-甘草-白术-白芍-锁阳、鹿茸-人参-远志-酸枣仁、枸杞子-五味子-覆盆子-山药-茯苓-肉桂-补骨脂等6个模块组合。聚类分析得到熟地黄-当归-巴戟天-肉苁蓉-杜仲、茯苓-山药-补骨脂-五味子-枸杞子、黄芪-甘草、鹿茸-人参等组合。因子分析贡献率最高的药物组合为巴戟天-杜仲-茯苓-肉苁蓉。结论：中成药治疗阳痿的核心药物为枸杞子、熟地黄、菟丝子、淫羊...     

血府逐瘀汤防治非酒精性脂肪肝的效应机制研究

目的探讨血府逐瘀汤对非酒精性脂肪肝(NAFLD)的防治效应及作用机制。方法 36只小鼠采用数字表法随机分为6组:预防-空白(C-P)组、预防-模型(M-P)组、预防-血府逐瘀汤(X-P)组、治疗-空白(C-T)组、治疗模型(M-T)组、治疗-血府逐瘀汤(X-T)组。并采用高脂饲料联合亚临床剂量脂多糖(LPS)腹腔注射建立ApoE~(-/-)小鼠NAFLD模型,造模期间或造模完成后,分别给予血府逐瘀汤15 g/kg灌胃干预4周。HE染色和油红O染色观测肝脏组织形态学变化,流式细胞检测全血CD14~+CD11b~+Ly6G~+细胞数量,ELISA检测血浆角蛋白趋化因子(KC)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)及肝组织髓过氧化物酶(MPO)、MIP-2含量。结果血府逐瘀汤可明显减少肝组织炎性细胞浸润,减轻肝组织脂肪变性,与模型组比较,减少了外周血中CD14~+CD11b~+Ly6G~+细胞数量(P0.05),降低了肝组织和外周血中MIP-2、KC含量(P0.05),但对肝组织中MPO含量无显著性影响。结论血府逐瘀汤对高脂饲料联合亚临床剂量LPS腹腔注射构建的ApoE~(-/-)小鼠NAFLD模型的肝组织炎症及脂肪变性具有防治作用,预防作用优于治疗作用,其作用机制与抗中性粒细胞趋化密切相关。     

多组分药物相互作用定量评价在抗艾滋病毒研究中的应用

目的 定量评价四组分药物抗艾滋病毒作用的相互关系。方法 用MTT法检测天然药物四组分药物对细胞生长的影响,在最大无毒剂量以下观察4种药物组分单用及合用的抗病毒作用,用中效原理计算2种及4种药物组分合用后的合用指数（combination index,CI）值,以CI值评价不同药物合用后抗病毒作用的相互关系。结果 AB药物组分合用时以协同作用为主,大剂量趋向作用相加;CD药物组分合用以拮抗作用为主,大剂量趋向相加;但四药合用10%抑制率以上均为协同作用。结论 采用中效原理可以定量评价4组分药物之间抗艾滋病毒的相互作用关系。     

补经合剂对初老大鼠卵巢细胞Fas、Caspase-3表达的影响

目的:补经合剂具有补肾益精、养血益气的功效,临床上用于治疗月经后期或伴量少属肾虚血亏者。本研究着重以该方对大鼠卵巢卵泡细胞凋亡的影响,拟从分子生物学水平探讨该方的作用机理。方法:以雌性初老大鼠为自然肾虚模型,采用免疫组织化学方法观察了补经合剂对肾虚大鼠卵巢的卵泡细胞 Fas表达、凋亡蛋白酶 Caspase-3表达的影响。结果:补经合剂高剂量组(相当于原生药31g/kg)能抑制肾虚大鼠卵巢的卵泡细胞凋亡蛋白酶 Caspase-3表达(P<0.05);同时中成药乌鸡白凤丸也具有相似的作用。结论:补经合剂临床上用于治疗月经后期或伴量少的机理,可能与该药抑制肾虚大鼠卵巢的卵泡细胞凋亡蛋白酶Caspase-3表达水平有关。     

基于数据挖掘技术探讨《寿世保元》柴胡的 配伍规律及应用特点

目的 对《寿世保元》中龚廷贤运用柴胡的处方进行数据分析,为现代临床用药提供思路。方法 收集《寿世保元》中龚廷贤运用柴胡的处方,构建临证方药数据库,运用数据挖掘技术对其药物的使用频次、药物主治病症等进行统计分析。结果 《寿世保元》载含柴胡的方剂共185首,用药总频次达2095次,主治疾病85种。甘草、当归、人参、白术常与柴胡配伍使用;龚廷贤常运用柴胡治疗伤寒、月经不调、发热、耳病等疾病;高频病症用药关联规则分析中,得到“柴胡–甘草–人参–黄芩”“柴胡–当归–甘草”“柴胡–人参–当归–甘草”3个主要核心药物组合,其中发热和耳病的核心药物组合皆为“柴胡–当归–人参–甘草”。结论 柴胡辛温发汗、疏肝解郁、调畅气机、疏泄肝胆,龚廷贤常使用其加减配伍治疗不同原因所致伤寒、月经不调、发热及耳病等疾病。