补肾温阳化瘀方对实验性子宫内膜异位症TRPV1及其致敏因子NGF的影响

目的研究补肾温阳化瘀方对实验性子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)简称内异症,瞬时受体电位辣椒素亚型Ⅰ(transientreceptor potential vanilloid receptor 1,TRPV1)及致敏因子神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的影响,以探讨补肾温阳化瘀方治疗EMT疼痛的作用机制。方法将近交系BALB/c雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、孕三烯酮组,每组15只。观察各组扭体反应,并采用酶联免疫法(ELISA)检测血清NGF的含量,采用免疫组化SP法及Western blot法检测子宫和异位灶NGF、TRPV1蛋白的表达,采用Real-time PCR方法检测子宫和异位灶NGF、TRPV1 mRNA的表达。结果模型组血清NGF含量显著高于假手术组(P0.01),且与小鼠扭体次数呈正相关(r=0.574,P0.01);与模型组比较,中药高、低剂量组、孕三烯酮组血清NGF含量显著下降(P0.05);模型组子宫NGF、TRPV1蛋白及NGF、TRPV1 mRNA表达均高于假手术组(P0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组、孕三烯酮组子宫和异位灶NGF、TRPV1蛋白表达均显著降低(P0.01),NGF、TRPV1 mRNA以中药高剂量组下降最为明显(P0.01)。子宫及异位灶NGF与TRPV1蛋白及mRNA表达均呈正相关(P0.01)。结论 TRPV1及致敏因子NGF共同参与了EMT疼痛的发生;补肾温阳化瘀方可通过降低NGF对TRPV1的上调作用从而发挥抑制EMT疼痛的作用。     

补肾调经方和逍遥丸对体外培养小鼠卵泡中ADAM8 及 ADAMTS-1 影响的比较

目的?探讨补肾调经方和逍遥丸对体外培养小鼠卵泡中去整合素-金属蛋白酶8（ADAM8）和Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS-1）表达的影响。方法?机械法分离昆明乳鼠窦前卵泡，随机分为空白组、正常组、补肾组、疏肝组，空白组不加血清，正常组加入正常大鼠血清，体外培养12天；补肾组加入补肾调经Ⅱ号方高剂量大鼠含药血清，疏肝组加入逍遥丸高剂量大鼠含药血清体外培养11天。11天时补肾组和疏肝组分别改为补肾调经Ⅲ号方高剂量和逍遥丸低剂量大鼠含药血清体外培养1天。培养12天加入人绒毛膜促性腺激素（hCG）后0、8、12、16 h采用RT-PCR法检测各组卵泡和卵丘卵母细胞复合体（COCs）中ADAM8、ADAMTS-1 mRNA表达，细胞免疫荧光染色法比较各组ADAM8、ADAMTS-1蛋白表达。结果?加入hCG后0、8、12、16 h，各组ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白的表达逐渐升高，各时间点空白组与正常组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与本组0、8 h比较，补肾组12、16 h ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）。与本组0 h比较，疏肝组8 h ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）。与空白组和正常组比较，补肾组与疏肝组8、12、16 h ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白表达升高，8 h疏肝组高于补肾组，12 h补肾组高于疏肝组（均P<0.05）。补肾组ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白的表达高峰高于疏肝组（P<0.05）。结论?补肾调经方和逍遥丸均可通过增强ADAM8和ADAMTS-1的蛋白溶解作用，使卵泡壁破裂而诱发排卵，补肾法诱发排卵的作用优于疏肝法。     

补肾调经方通过有氧糖酵解促进控制性超促排卵小鼠囊胚发育的实验研究

目的?观察补肾调经方对囊胚质量的影响及与有氧糖酵解相关基因表达的关系。方法?将100只动情周期正常的费城癌症研究所（ICR）雌性小鼠按照随机数字表法分为4组，分别为正常组、模型组、补肾低剂量组、补肾高剂量组，每组25只。除正常组，其余各组小鼠建立控制性超促排卵模型。正常组及模型组雌鼠每日上午 9：00灌胃蒸馏水，补肾低、高剂量组雌鼠每日上午9：00灌胃补肾调经方低、高剂量（2.6、5.2 g/mL），连续 10 日。模型组及补肾低、高剂量组于第 11 日下午 16：00 同时腹腔注射孕马血清促性腺激素（PMSG）10 IU/只，48 h 后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素（HCG）10 IU/只；正常组于第11日下午16：00 腹腔注射生理盐水 0.1 mL。连续3个周期，每次间隔4天。模型组及补肾低、高剂量组均在控制性卵巢刺激（COS）第 3 次腹腔注射 HCG 后（下午 16：00）立即与雄性小鼠合笼。正常组在动情期第 3 次腹腔注射生理盐水后（下午 16： 00）立即与雄性小鼠合笼。次日清晨检查阴栓，见栓的雌鼠记为妊娠。妊娠第4天（注射HCG后96 h）在体式显微镜下取出囊胚，观察囊胚质量并计数，计算优质囊胚率；免疫荧光染色、实时荧光定量PCR检测囊胚中的乳酸脱氢酶（LDH）、M2-型丙酮酸激酶（PKM2）、葡萄糖6-磷酸脱氢酶（G6PDH）、单羧酸转运蛋白4（MCT4）蛋白及mRNA的表达。结果?与正常组比较，模型组的囊胚数量增加（P<0.05），优质囊胚率降低（P<0.05），囊胚G6PDH、PKM2、LDH、MCT4蛋白及mRNA表达均降低（P<0.05）；与模型组比较，补肾低、高剂量组的优质囊胚率升高（P<0.05），囊胚G6PDH、PKM2、LDH、MCT4蛋白及mRNA表达均升高（P<0.05）。结论?补肾调经方可增加超促排卵小鼠囊胚数量，提高小鼠囊胚质量，促进胚胎植入，其机制可能与上调有氧糖酵解改善早期胚胎能量代谢有关。