南苍术和北苍术干预湿阻中焦证大鼠的药效对比研究北大核心CSCD

目的:探讨南苍术和北苍术燥湿健脾药效作用差异。方法:将70只SD雄性大鼠随机分为10只正常对照组与60只造模组,采用“外湿侵体”、“正气损耗”、“过食肥甘”等方法建立湿阻中焦证模型大鼠。造模成功后,将成模大鼠分为模型对照组、南苍术挥发油47、372 mg/kg组、北苍术挥发油19、154 mg/kg组、香砂养胃丸926 mg/kg组。正常对照组正常饲养,造模组持续施加造模条件。各组连续灌胃相应药物或生理盐水,连续7 d。末次药后测定大鼠体质量、脾脏及胸腺的脏器系数及小肠推进率等指标;观察结肠苏木精-伊红染色病理组织切片变化;以酶联免疫吸附法检测大鼠血浆中胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)及结肠中水通道蛋白2(AQP2)的含量;利用实时荧光定量RCR(qRT-PCR)技术检测大鼠胃中促生长素(Ghrelin)、神经肽Y(Npy)和结肠组织中P物质(Sp)、血管活性相关肠肽(Vip)mRNA转录水平的变化。结果:与正常对照组大鼠相比,模型对照组大鼠体质量增长缓慢、精神萎靡、晦暗发黄(P<0.01);与模型对照组大鼠相比,南苍术挥发油372 mg/kg组大鼠一般情况有所恢复,体质量增长加快,大便形状有所好转;且大鼠小肠推进率、胸腺指数、脾脏指数明显升高(P<0.05或P<0.01);结肠组织炎性细胞减少、腺体结构改善;胃组织中Ghrelin、Npy表达显著上调(P<0.01);结肠组织中Sp mRNA表达上调,AQP2含量显著降低(P<0.01);血浆中GAS、MTL含量显著升高;南苍术挥发油47、372 mg/kg组大鼠的Vip mRNA表达均显著下调(P<0.01);北苍术挥发油154 mg/kg组大鼠血浆中MTL含量明显升高(P<0.05),北苍术挥发油19、154 mg/kg组大鼠结肠组织中Vip mRNA表达均显著下调(P<0.01)。南苍术挥发油372 mg/kg组对小肠推进率、胸腺指数、脾脏指数、Ghrelin、Npy、Sp、Vip mRNA表达的调控能力明显强于北苍术挥发油154 mg/kg组。结论:南、北苍术挥发油对湿阻中焦证均有治疗作用,但两者作用有较明显差异。在高剂量条件下,南苍术燥湿健脾药效明显优于北苍术。     

多重连接探针扩增-高分辨熔解法鉴别鸡血藤及其常见混伪品

目的 采用分子生物学技术鉴别鸡血藤及其常见3种混伪品。方法 根据4个物种核基因组内转录间隔区2(ITS2)序列差异设计特异性探针，结合运用多重连接探针扩增(MLPA)技术与高分辨熔解(HRM)曲线技术，根据特异性探针熔解温度(T_m)差异鉴别鸡血藤及其常见混伪品大血藤、白花油麻藤、香花鸡血藤。结果 4个物种特异性探针T_m值分别为：鸡血藤(87.0±0.2)℃、大血藤(82.8±0.2)℃、白花油麻藤(85.4±0.2)℃、香花鸡血藤(80.1±0.2)℃。探针特异性考察中，交叉反应与空白组均未产生熔解峰，表明探针具有良好特异性。构建的方法可用于1.0 ng模板DNA的检测，并可有效检出鸡血藤中掺混5%大血藤、白花油麻藤或香花鸡血藤。结论 基于MLPA-HRM技术建立的鸡血藤及其混伪品鉴别方法灵敏度高，特异性强，稳定性好，可有效解决市场上鸡血藤药材植物来源复杂、混伪品难以鉴别的问题。     

基于PCA-Logistic回归分析的艾叶药材等级评价方法研究

目的 通过分析艾叶主要有效成分，建立用于艾叶药材等级评价的“主成分(PCA)-Logistic回归”分析方法。方法 取艾叶药材14批，通过气相色谱-质谱(GC-MS)法分析鉴定其挥发油各组分，通过液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(Q-TOF LC/MS)解析黄酮类成分，选取挥发性及黄酮类有效成分中普遍存在且相对含量较高者为Logistic建模自变量，以各自变量含量测定值做PCA分析，运用Logistic二分类算法，将各成分进行关联分析，建立用于艾叶药材等级评价研究的“PCA-Logistic回归”分析方法。结果 选取挥发性成分中桉油精、龙脑，黄酮类成分中异泽兰黄素、棕矢车菊素为Logistic建模自变量。桉油精、龙脑含量范围分别介于0.052%～0.092%,0.021%～0.031%,异泽兰黄素、棕矢车菊素含量范围分别介于0.189%～0.324%,0.068%～0.088%。二分类Logistic回归分析结果表明，14批次艾叶分为4个等级，各批次艾叶等级拟合概率均>95%,优级5批，良级4批，中级2批，差级3批。结论 该实验基于“PCA-Logistic回归”分析，初步建立了不...     

RNaseH依赖性PCR扩增结合熔解曲线法鉴别石菖蒲与藏菖蒲掺杂

目的 采用核糖核酸酶H依赖性PCR(rhPCR)扩增结合熔解曲线分析对石菖蒲与藏菖蒲进行快速鉴定及相互掺杂检测。方法 比对分析石菖蒲与藏菖蒲核基因组内转录间隔区2(ITS2)序列，寻找稳定的单核苷酸多态性(SNP)位点设计特异性扩增引物，根据扩增产物熔解温度(T_m)不同进行鉴别，考察引物特异性，筛选最佳混合引物比例，并考察该方法灵敏度、掺混检出限及适用性。结果 设计的特异性引物具有良好特异性，石菖蒲、藏菖蒲扩增产物可分别产生(89.4±0.2)与(87.9±0.2)℃的单一特异性熔解曲线峰。所建立的方法灵敏度高，DNA检出限均为0.1 ng,对石菖蒲和藏菖蒲的掺混检出限均为10%。检测样品28份，其中石菖蒲16份、藏菖蒲12份，检测结果与DNA条形码结果一致。结论 该研究基于RNase H依赖性PCR扩增结合熔解曲线建立的石菖蒲及藏菖蒲鉴别及掺杂检测方法可有效鉴别石菖蒲、藏菖蒲及掺杂样品，有利于石菖蒲药材质量控制。     

金银花露GC特征图谱建立及其质量评价

目的 建立金银花露GC特征图谱，并对其进行质量评价。方法 GC-MS法分析挥发性成分，考察芳樟醇、α-松油醇色谱峰峰面积之间的相关性。结果 共鉴定出31种成分，其中特征性成分有6种。特征图谱中有5个特征峰。芳樟醇、α-松油醇色谱峰峰面积之间存在正相关(相关系数为0.994)。217批样品中有27批存在峰缺失和/或峰比例异常的问题。结论 该方法稳定可靠，可用于评价金银花露质量。     

利用分子方法鉴别白花蛇舌草及其伪品伞房花耳草

目的:建立一种鉴别白花蛇舌草及其常见伪品伞房花耳草的分子方法，确保临床用药安全。方法:根据白花蛇舌草和伞房花耳草内转录间隔区2(ITS2)序列的差异设计特异探针，采用多重连接探针扩增(MLPA)技术和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)技术，建立了一种能够鉴别白花蛇舌草、伞房花耳草的多重连接探针扩增-实时荧光定量PCR(MLPA-qPCR)方法。结果:对扩增产物进行熔解曲线分析，结果显示，所设计的MLPA探针具有良好的特异性，探针之间不存在交叉反应，白花蛇舌草探针的特异性熔解曲线T_m值为(81.8±0.2)℃,伞房花耳草探针的熔解曲线T_m值为(84.0±0.2)℃;灵敏度分析结果表明，该方法检出白花蛇舌草和伞房花耳草的最低模板量均为0.1 ng;掺伪检测试验结果表明，当白花蛇舌草探针与伞房花耳草探针比例为1.0∶0.6时，白花蛇舌草中掺杂1%的伞房花耳草仍可被有效检出。对收集的39份样品进行检测，成功鉴别白花蛇舌草25份、伞房花耳草12份、白花蛇舌草与伞房花耳草混合样品2份。结论:本研究所建立...