长链非编码RNA H19和沉默信息调节蛋白6在喉鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系

目的研究长链非编码RNA H19和沉默信息调节蛋白6(silent information regulator 6,SIRT6)在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)中的表达情况,二者与LSCC病理参数的关系及对患者预后的影响。方法选取2011年3月至2014年6月在郑州大学附属洛阳中心医院进行手术切除的53例患者作为研究对象,将切除的癌组织作为试验组,同时取同一患者的癌旁(距肿瘤边缘>2cm)组织作为正常对照组。采用实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测长链非编码RNAH19的表达情况;采用免疫组化检测SIRT6的阳性表达;分析长链非编码RNAH19和SIRT6与LSCC病理参数的关系;Cox回归分析影响LSCC预后因素;分析长链非编码RNA H19和SIRT6表达情况对LSCC患者生存情况的影响。结果试验组中长链非编码RNA H19 mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05),SIRT6蛋白的阳性表达率明显低于对照组(P<0.05);长链非编码RNA H19、SIRT6的表达水平与TNM分期有关(P<0.05);Cox回归分析显示,长链非编码RNA H19表达是影响LSCC患者预后的独立危险因素,SIRT6表达是影响LSCC患者预后的独立保护因素;绘制LSCC患者术后60个月的生存曲线,长链非编码RNA H19高表达患者的总生存率明显低于低表达患者(P<0.05),SIRT6蛋白阳性表达患者的总生存率与阴性表达患者相比差异无显著性(P>0.05)。结论LSCC患者癌组织中长链非编码RNA H19表达上调、SIRT6蛋白阳性表达率下降,二者水平与TNM分期相关,且均与患者的预后状况密切相关,可为LSCC的治疗提供参考。     

脂蛋白脂酶活化剂NO-1886改善高脂高糖喂养小型猪糖脂代谢

目的　用高脂高糖饲养的贵州小香猪观察脂蛋白脂酶活化剂NO 1886调节糖、脂代谢的作用。方法　采用高脂高蔗糖饲料喂养贵州小香猪 ,并用NO 1886进行治疗 ,观察其体重、血糖、胰岛素、血浆肿瘤坏死因子α(TNF α)、游离脂肪酸 (FFA)、脂肪细胞形态的变化。结果　与正常对照组相比 ,高脂高蔗糖喂养使小香猪脂肪细胞体积变大 ,血浆TNF α和FFA以及空腹血糖水平均增高 (P <0 .0 5～P<0 .0 1) ,而且引起胰岛素抵抗。在高脂高蔗糖饲料中添加了 1%NO 1886后 ,与高脂高蔗糖组相比 ,脂肪细胞增大被抑制 ,血浆TNF α、FFA和空腹血糖的浓度均显著降低 (均P <0 .0 5 ) ,血浆葡萄糖清除率以及胰岛素分泌急性相都有了明显改善。结论　NO 1886可能通过抑制脂肪蓄积、降低血浆TNF α和FFA的浓度而改善高脂高蔗糖饲料引起的小型猪的糖代谢紊乱。     

黄芪多糖对兔动脉粥样硬化血管内皮细胞功能的影响

目的:探讨黄芪多糖对新西兰兔动脉粥样硬化内皮细胞功能的影响。方法:将40只雄性新西兰兔随机分为4组,每组10只,对照组喂普通饲料;模型组:普通饲料加质量分数为1.5%的胆固醇喂养;黄芪多糖(APS)组:普通饲料加质量分数为1.5%的胆固醇喂养,同时腹腔注射APS(12.0mg/kg);卡托普利组:普通饲料加质量分数为1.5%的胆固醇喂养,同时灌喂卡托普利(15.0mg/kg);10周后,测定各组空腹血清或血浆三脂酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、丙二醛(MDA)、C反应蛋白(CRP)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性,并计算主动脉内膜粥样斑块面积。结果:模型组与对照组比较,TG、TC、MDA、ET-1、NO、CRP明显升高(P<0.01),HDL-C/TC比值、SOD活性明显下降(P<0.01),主动脉内膜粥样斑块面积较大(P<0.01);卡托普利组与模型组比较,各项指标无明显差异;而APS组与模型组比较,TG、CRP、NO、MDA、ET-1明显下降(P<0.01),TC无明显变化,HDL-C/TC比值、SOD活性明显升高(P<0.01),主动脉内膜粥样斑块面积明显减少(P<0.01)。结论:黄芪多糖对动脉粥样硬化有明显的预防和治疗作用,可能与抗氧化、免疫调节、保护血管内皮细胞有关。     

病例教学法在生物化学教学中的应用与评价

目的:探讨病例教学法在生物化学教学中的应用。方法:根据教学内容,适当引入临床病例,以小组为单位,对病例中涉及到的生化问题进行讨论,通过问卷调查对病例教学进行评价。结果:100%学生认为临床医学专业适合病例教学,多数学生赞成病例教学法。结论:病例教学能够激发学生的学习兴趣、分析能力、思考能力,有利于基础知识与临床医学的联系。     

枸杞多糖对动脉粥样硬化内皮细胞功能及炎症反应的影响

目的:探讨枸杞多糖对兔动脉粥样硬化内皮细胞功能障碍、炎症反应的影响及机制。方法:将36只雄兔随机 分为3组,对照组(12只),喂普通饲料;模型组(12只),普通饲料加1．5％胆固醇喂养;枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharide,LBP)组,普通饲料加1．5％胆固醇喂养,同时按体重腹腔注射LBP(3．0mg/kg);10周后,测定各组空腹血清 三脂酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、一氧化氮、内皮素、丙二醛、C反应蛋白含量以及超氧化物歧化酶活性,计 算主动脉内膜粥样斑块面积并观察主动脉形态学变化。结果:模型组与对照组比较,TG、TCh、NO、MDA、ET-1、CRP明显 升高(P<0．01),HDL-C/TCh、SOD活性明显下降(P<0．01),主动脉内膜粥样斑块面积较大;而LBP组与模型组比较,TG、 CRP、NO、ET-1、MDA明显下降(P<0．01),TCh无明显变化,HDL-C/TCh比值、SOD活性明显升高(P<0．01),主动脉内膜粥 样斑块面积明显减少(P<0．01)。结论:枸杞多糖对动脉粥样硬化有明显的预防和治疗作用,其机制可能与其抗氧化、免疫 调节、提高HDL-C/TCh有关。     

构建糖尿病性肢端坏疽大鼠模型及中药复方的干预效应

背景:糖尿病性肢端坏疽已成为糖尿病致残、致死的重要原因之一。目的:建立糖尿病性肢端坏疽的大鼠模型,观察中药复方对糖尿病性肢端坏疽的干预作用。设计:对比观察实验。单位:河南科技大学临床医学院第一附属医院。材料:选用雄性Wistar大鼠50只,6周龄,体质量(200.0±16.3)g。以普通饲料单笼喂养,室温18～22℃,自由摄食、饮水。随机抽取10只作为空白对照组,其余40只用于造模。方法:实验于2001-10/2002-04在河南科技大学动物房完成。①实验分组:将40只大鼠禁食6h后左下腹腹腔注射链脲佐菌素55.0mg/kg;空白对照组注入同体积的柠檬酸钠缓冲溶液。选用造模成功的20只大鼠,随机分为2组:模型组和治疗组,每组10只。治疗组大鼠于造模成功后每天9:00灌胃中药(60g/kg),共3周;模型组灌胃等体积的生理盐水。第3周末,各组大鼠禁食12h,麻醉后处死取血测血糖、血脂和胰岛素水平;实验过程中记录各组大鼠的每日饮水量。②实验评估:肢端坏疽积分标准:以皮肤颜色发黑、皮肤有轻度开放性病灶、病灶已侵入深部肌肉组织3个等级对糖尿病性肢端坏疽大鼠的四肢进行评分,计算每只大鼠的总积分。对胰岛β细胞分泌的功能进行评价主要观察指标:实验前后大鼠饮水量、体质量、三酰甘油、胆固醇、空腹血糖、血脂和胰岛素水平的变化。结果:纳入Wistar大鼠50只,造模不成功脱落20只,30只进入结果分析。①实验期间,模型组和治疗组饮水量明显高于空白对照组(P<0.01);治疗组随着治疗时间增加饮水量明显下降,模型组随着时间的推移逐渐升高。②治疗后模型组大鼠体质量明显低于治疗前(P<0.01),治疗组有下降趋势,与治疗前比较,差异不明显(P>0.05)。③两组大鼠均有明显肢端坏疽出现(P<0.01)。治疗组大鼠的体质量明显高于模型组(P<0.01),肢端坏疽情况明显好于模型组(P<0.01)。④治疗前治疗组和模型组的空腹血糖水平明显高于空白对照组(P<0.01),而胰岛素水平和胰岛β细胞功能指数明显低于空白对照组(P<0.01)。治疗后两组的空腹血糖水平高于空白对照组(P<0.01),治疗组的明显低于模型组(P<0.01),已接近正常值;两组血脂和胰岛β细胞功能指数均明显低于空白对照组(P<0.01),治疗组明显高于模型组(P<0.01),接近正常值。⑤治疗前其它两组三酰甘油、胆固醇水平明显高于空白对照组(P<0.01)。经过治疗,治疗组三酰甘油、胆固醇明显下降(P<0.01),与空白对照组比较,差异不明显(P>0.05);模型组继续升高,明显高于空白对照组(P<0.01)。结论:血清胰岛素水平升高,血糖、血脂水平下降,可在一定程度上防治糖尿病足的发生、发展。该糖尿病性肢端坏疽模型对药物反应敏感,可用于研究糖尿病足发病机制及药物治疗效果的评价。     

软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗及其机理

目的 研究游离脂肪酸（FFA）诱导人肝癌细胞（HepG2）产生胰岛素抵抗及其分子机理。方法 用含0．25mmol／L的软脂酸（软脂酸组）或100nmol／L胰岛素（高胰岛素组）的DMEM培养基培养HepG2细胞，再用100nmol／L胰岛素刺激后，测定其培养液中的葡萄糖浓度、细胞内的糖原含量以及胰岛素受体底物2（IRS-2）的蛋白水甲。加入磷酯酰肌醇3激酶（P13K）的抑制剂wortmannin，再次检测IRS-2的蛋白水平。结果 软脂酸组和高胰岛素组培养液中葡萄糖含量明显高于正常对照组（P＜0．05），而细胞内糖原含量显著减少（P〈0．01）。软脂酸组胰岛素刺激的IRS2蛋白水平显著低于正常对照组（P〈0．01）。用wortmannin处理后，软脂酸组中的IR导2蛋白水平差异无显著意义（P〉0．05），而正常细胞组中IRS-2蛋白水平差异有显著意义（P〈0．01）。结论 0．25mmol／L的软脂酸培养24h后，HepG2细胞可产生胰岛素抵抗，且胰岛素信号转导途径存在障碍；P13K是胰岛素信号转导途径中的关键调节点，可能IRS-2和一些P13K相关分子缺陷与游离脂肪酸诱导的肝胰岛素抵抗的形成有关。     

实验性糖尿病足大鼠模型的建立

目的建立一种具有实验价值的糖尿病足大鼠模型。方法给雄性Wistar大鼠腹腔注射中等剂量的链脲佐菌素后,适当调低室温,以建立动物模型;连续测量实验期间各组的饮水量,并观察各组的体表变化,测定各组在造模前、造模后的空腹血糖、胰岛素和体重。结果糖尿病组较正常对照组有明显的糖尿病足症状出现、体重明显下降,空腹血糖升高,而空腹胰岛素水平明显下降;同时糖尿病治疗组与糖尿病对照组相比,糖尿病足症状明显减轻(P<0.01),体重明显较糖尿病对照组升高(P<0.01),空腹血糖明显下降(P<0.01),而空腹胰岛素水平明显上升(P<0.01)。结论本方法建立的糖尿病足大鼠模型具有重要的实验和科研意义。     

游离脂肪酸引起肝细胞胰岛素抵抗及其机制的研究

目的研究游离脂肪酸（FFA）诱导人肝癌细胞（HepG2）引起胰岛素抵抗及其分子机制.方法应用含0.25 mmol/L的软脂酸（PA组）或100 nmol/L胰岛素（Ins组）与不含软脂酸和胰岛素（正常组）的DMEM培养基培养HepG2细胞24 h,正常组和PA组中又分加与不加磷酯酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂Wort-mannin两个亚组,100 nmol/L胰岛素刺激后分别测定培养液中的葡萄糖浓度、细胞内的糖原含量、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）活性及胰岛素受体底物2（IRS-2）的蛋白水平.结果PA组和Ins组培养液中葡萄糖含量显著高于正常组（P＜0.01）,而细胞内糖原含量显著减少（P＜0.01）;PA组胰岛素刺激的PEPCK活性显著高于正常组（P＜0.01）,IRS-2蛋白水平显著低于正常组（P＜0.01）.无论应用Wortmannin处理与否,PA组中的PEPCK活性及IRS-2蛋白水平差异无显著性（P＞0.05）,而正常组中PEPCK活性及IRS-2蛋白水平的差异有显著性（P＜0.01）.结论加0.25 mmol/L的软脂酸培养24 h后,肝细胞可能由于胰岛素信号转导障碍产生胰岛素抵抗;胰岛素抵抗的形成可能与IRS-2及PI3K相关分子缺陷有关.     

Blending Learning教育思想指导构建生物化学实验课教学模式

Blending Learning是一种既能够发挥教师主导作用又能够体现学生主体地位的教育思想,在这种思想指导下,学生不仅可以从教师和书本上获得知识,还能够利用网络信息和小组讨论获取知识,翻转课堂模式、泰微课+洋思模式和跨越式教学模式等新型教学模式都充分体现了这种教育思想。我们在认真研究了上述教学模式的基础上,大力改革传统实验课常用的凯洛夫五段教学法,提出了适合本校生物化学实验教学的新型教学模式:七段教学法,经过几年的实践与改进,取得了良好的教学效果,达到了"人人都动手,组组有结果,结果都不错"的实验教学目标,并体会到一堂成功的生物化学实验课离不开教师的主导作用、学生的主体地位、实验人员的主场配合和主管领导的积极协调。