Y染色体微缺失不育患者精液细胞学观察

目的:对Y染色体AZF区域微缺失不育患者进行精液细胞学检查,从而评估其生精功能。方法:收集35例AZF缺失不育患者,年龄23~44岁,经3次以上精液常规分析证实,26例为非梗阻性无精子症,9例为严重少精子症。按照AZF缺失部位分为以下4组进行观察:AZFa+b+c区域缺失组5例,AZFb+c缺失(4例)及单独AZFb缺失(3例)组7例,AZFc缺失组23例。采集患者精液,待自然液化后离心,生理盐水洗涤2次,离心沉淀物经生理盐水稀释后涂于干净玻片上,瑞吉染色,光学显微镜下观察。对其中6例患者进行了睾丸组织病理学检查。结果:AZFa+b+c缺失组,精液细胞学检查均未见各级生精细胞,可见少量上皮细胞。其中1例经睾丸活组织病理学检查,生精小管中未见各级生精细胞,为唯支持细胞综合征,与精液细胞学检查结果一致。AZFb+c缺失及单独AZFb缺失组,精液细胞学检查其中6例细胞停滞在精母细胞阶段,2例睾丸活检见生精阻滞在初级精母细胞阶段。1例AZFb缺失的患者精液细胞学检查见初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞,但睾丸活检显示阻滞在精母细胞阶段。AZFc缺失组中,少精子症组(8例)患者生精细胞检查5例停滞在精母细胞阶段,见少量精子细胞,另3例未见各级生精细胞;无精子症组(15例)患者未见各级生精细胞,其中2例经睾丸活检,证实为唯支持细胞综合征。结论:精液细胞学检查对AZF缺失患者能有效评估生精功能,作为一项无创检查技术,容易被患者接受,推荐作为临床评估生精功能的一项方法。     

原料药粒径对盐酸普萘洛尔渗透泵片释药行为的影响

目的:研究原料药粒径等对盐酸普萘洛尔渗透泵片释药行为的影响。方法:取不同批号盐酸普萘洛尔及同批号重结晶前、后的原料药均按相同处方制备成渗透泵片,考察药物体外释放情况及释药24h后衣膜形态;并对上述不同原料药的粒径分别以光学显微镜和激光粒度分析仪进行证实。结果:以原料药粒径较小的渗透泵片释放完毕后衣膜变形,且不能维持零级释放,原料药粒径较大的渗透泵片结果与之相反。不同原料药经仪器证实粒径确有差异。结论:原料药的粒径可影响制备的渗透泵片的释放行为,提示性状稳定的原料药的合理选择在制剂过程中不可忽视。     

脉冲式电磁辐射对大鼠血脑屏障影响的量效关系

目的 研究脉冲式电磁辐射(EMR)对大鼠血脑屏障(BBB)影响的量效关系。方法 采用伊思蓝静脉注射，荧光显微镜下观察不同脉冲次数的EMR辐照对大鼠BBB开放的影响。结果 伊思蓝在EMR诱发的大鼠BBB开放局部呈现荧光斑；随着EMR脉冲次数(0～200次)的增加，荧光斑数量增加、面积增大；荧光斑在EMR组全脑的分布，以皮质、丘脑、下丘脑、小脑、尾壳核和延髓较多。结论 不同脉冲次数EMR诱发大鼠BBB开放程度不同，随脉冲次数增加，血管通透性增强，200次时达开放高峰，皮质区BBB开放最明显。     

人表皮细胞分离培养最佳条件的选择

目的 确定表皮细胞分离培养的最佳条件，为进一步将其作为皮肤组织工程种子细胞奠定基础。方法 采用组织块法培养表皮细胞；分别以胰蛋白酶和分散酶分离表皮细胞，有血清培养法和无血清培养法进行表皮细胞的培养，并以克隆形成试验检测细胞存活和生长情况。结果 （1）表皮细胞以分散分离可量在多数基底细胞，且成纤维细胞污染少，而胰蛋白酶得到的表皮细胞少，且混杂有大量的成纤维细胞。（2）组织块法可观察到表皮细胞生长，但成纤维细胞污染严重，且不易得到成片生长的表皮。（3）有血清培养法表皮细胞需在3T3细胞的滋养层上生长，存在3T3细胞污染的可能。（4）无血清培养方法简便易行，更有利于表皮细胞的生长。结论 采用无血清培养法培养表皮细胞条件的最终确定，为进行相关的研究，尤其是皮肤组织工程的研究奠定了基础。     

应用噬菌体肽文库筛选McAb F3特异性结合肽

目的：应用噬菌体展示肽文库筛选可与抗汉坦病毒囊膜蛋白单抗F3特异性结合的配体肽。方法：采用protein-A亲和层析纯化的F3单抗为筛选配基，对噬菌体展示的随机12肽文库进行生物亲和淘洗，夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性，并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果：通过3轮生物淘洗，能被抗体捕获的噬菌体克隆为91．7％（11／12）；ELISA测定显示筛选到的噬菌体短肽能与F3单抗特异性结合；序列分析表明7个阳性克隆氨基酸序列相同，均为－MHGPTKNQMWHT，同源性分析显示该序列与HTNV／SEOV M蛋白G2区第750－759位氨基酸有较高的同源性，结论：获得了具有良好结合活性的模拟表位肽，为基于表位水平的HFRSV（肾病综合征出血热病毒）特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要依据。     

脐血CD34+细胞体外定向诱导分化为T淋巴细胞的实验研究

目的：建立利用人造血干／祖细胞体外定向诱导分化为T淋巴细胞的方法，为研究T细胞生物学特性及细胞免疫提供技术平台。方法：MACS方法分离人脐带CD34^ 细胞接种到人胎儿胸腺基质单层细胞上，IMDM液体培养基含20％人AB血清并加入FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合，于培养7、14、21、28、35、42天取非贴壁细胞利用流式细胞仪对细胞表型进行检测，并进行细胞形态学分析。结果：2周后，CD4^ CD8^ 非成熟T淋巴细胞占细胞总数的0．3％-13．3％，4-5周CD4^ CD8^ T淋巴细胞达到高峰占16．6％-26．5％，且CD3^ CD4^ CD8^ 和CD3^ CD4^-CD8^ T淋巴细胞逐渐增多，6周后达26．5％～64．9％和11．6％-38．9％。培养成熟的T淋巴细胞经PHA IL-2刺激后瑞氏染色鉴定可见大原始淋巴细胞存在。结论：利用人脐血CD34^ 在体外人胎儿胸腺基质单层细胞上加FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合条件下，可诱导分化出T淋巴细胞，并且培养的T细胞对有丝分裂素刺激有增殖反应。