基于FRET构建A型肉毒毒素活性检测的高通量方法

目的 利用荧光共振能量转移(FRET)构建针对A型肉毒毒素酶活性检测的高通量体外方法。方法 构建只识别A型肉毒毒素的基于双荧光标记底物的重组表达质粒，将其构建的质粒转入大肠杆菌表达系统进行表达，对表达后的荧光标记底物重组蛋白进行纯化和透析并保存备用；利用A型肉毒毒素轻链(ALc)对重组蛋白进行酶切检测活性；对本检测方法的条件进行优化；ALc切割荧光标记底物测定其酶动力学参数K_m与K_cat值。结果 重组表达质粒构建成功，通过大肠杆菌表达系统表达后检测明显出现目的条带，对其纯化后获得的重组蛋白纯度在90%左右，命名重组蛋白为CYA。对CYA通过酶ALc、B型肉毒毒素轻链(BLc)进行酶切鉴定，结果显示CYA只能被ALc酶切产生与预期相符的两个蛋白片段，不能被BLc酶切。对基于FRET底物的条件优化得到：设定滤光片灵敏度在65～110之间；实时动态检测间隔为2 min/次，动态检测时间为30～120 min,底物CYA合适的浓度范围0.5～32μmol/L。CYA在ALc酶作用下随时时间的变化与荧光值528与485的比值作图最小在0.5左右，最大时...     

基于CRISPR/Cas12a的室温稳定鼠疫耶尔森氏菌检测体系的建立

目的 筛选并优化冻干保护剂组合，建立可室温稳定储存的、不影响试剂检测灵敏度的Cas12a鼠疫菌核酸检测冻干体系，为其应用于动物鼠疫监测的现场快速检测奠定基础。方法 以鼠疫耶尔森氏菌pla基因为靶基因，选择9种常用冻干保护剂加入核酸检测试剂中，筛选有明显保护效果的4种保护剂进行优化。按照正交实验设计原则设计保护剂组合，通过37℃加速破坏实验及26℃室温稳定性实验对复合保护剂进行保护效果和灵敏度评价。结果 加入蔗糖、山梨醇和海藻糖3种保护剂的冻干检测体系可在37℃稳定存放2周。室温下存放3个月后体系检测信号强度与37℃加速破坏1周时基本相当，同时检测方法的灵敏度依然能达到10^-5 ng/μL,说明Cas12a检测试剂加入筛选得到的保护剂冻干后，可在室温下稳定保存至少6个月。结论 本研究构建的室温稳定CRISPR/Cas12a鼠疫菌检测体系可在室温下稳定存放至少半年，能够满足鼠疫菌现场快速检测中对试剂稳定性的需求。同时，本研究获得的复合保护剂组分对构建其它室温稳定CRISPR/Cas12a核酸检测体系具有重要参考价值。     

布林西多福韦治疗双链DNA病毒感染的药理与临床研究进展

布林西多福韦（BCV）是西多福韦（CDV）的长脂肪侧链衍生物，是核苷类DNA聚合酶竞争性抑制剂。BCV结构中脂质部分的引入增加了细胞摄取和口服生物利用度，使其在保持广谱抗双链DNA（dsDNA）特性的基础上有效提高了抗病毒活性。临床试验表明 BCV对多种 dsDNA病毒表现出良好的治疗效果，并被美国食品药品监督管理局批准用于全年龄段天花的治疗。BCV不是有机阴离子转运蛋白-1（OAT-1）的底物，肾毒性降低，腹痛、腹泻等胃肠道症状以及血清转氨酶升高是其常见的不良反应。就 BCV的作用机制、药动学、临床疗效和安全性研究进行综述，为抗 dsDNA病毒药物研发及合理用药提供参考。     

新型布尼亚病毒抗体间接ELISA检测方法的建立北大核心CSCD

目的本研究旨在建立新型布尼亚病毒抗体检测的高特异性、低成本间接ELISA方法。方法通过优化抗原表达、纯化、包被、血清稀释、孵育时间等条件,以Gn的截短蛋白Gn2为包被抗原,开发了一种间接ELISA方法。检测该方法的稳定性、敏感性、特异性、符合率。结果批内和批间变异系数均小于10%,阳性血清临床符合率达76.9%(10/13),阴性血清临床符合率达86.7%(26/30)。结论本研究所建立的间接ELISA方法可用于临床血清样品的检测,为发热伴血小板减少综合征的疾病诊断和监测提供了较为可靠和廉价的检测方法。     

云南玉龙鼠类携带贝氏柯克斯体的基因分型研究

为更好地了解云南省鼠类中贝氏柯克斯体Coxiella burnetii的流行情况，以便制定针对Q热的预防和控制措施，本研究采用巢式PCR方法检测云南省玉龙县捕获的鼠类携带贝氏柯克斯体的情况，并对阳性样本的贝氏柯克斯体进行多间隔区序列分型(multispacer sequence typing, MST)和多位点可变数目的串联重复分析(multilocus variable number tandem repeats analysis, MLVA)。结果显示，在玉龙共捕获到49只野生鼠类，其中24只携带贝氏柯克斯体(48.98%, 24/49)。基因分型结果显示阳性样本携带贝氏柯克斯体的MST型别可分为MST16和一种新的MST基因型别，但未能获得最终的MLVA基因型别。本研究表明云南玉龙的鼠类携带新的贝氏柯克斯体MST基因型别，可为我国Q热的溯源提供一定的理论依据和数据支撑。     

新型宏基因组/宏转录组学技术在反向病原学研究中的应用

以微生物组学和宏基因组学为基础的新技术的飞跃式发展为新微生物的发现提供了无可比拟的优势。反向病原学理念公开提出后，在指导新发突发传染病的主动防控实践方面也正在发挥越来越多的作用，在公共卫生和疾病防控领域应用越来越广。新型宏基因组/宏转录组学技术进一步支撑和促进反向病原学研究，在发展评估新微生物致病潜力的理论、策略和方法方面有了一定的进展。在此，本综述梳理了新型宏基因组/宏转录组学技术在反向病原学研究中的作用实践、以及面临的挑战，期望促进人们对病原体的认识和理论技术创新。