以乙肝病毒核心抗原HBcAg为载体的utrophin抗体的制备

目的构建以乙肝病毒HBc为载体的带有utrophin的两个B细胞表位多肽的融合表达质粒pHBc-2UB，表达出融合蛋白并纯化，通过免疫新西兰大白兔获得抗utrophin的抗体。方法通过DNAstarⅡ模拟出utrophin的两个显著优势的B表位。用PCR法合成片段插入HBcAg序列的78位，将该合成片段克隆至pET28a载体中，构建重组表达质粒，表达出融合蛋白HBc-2UB，纯化后免疫新西兰白兔。再将该合成片段克隆至pGEX4T-2载体中，构建重组表达质粒，表达出融合蛋白GST-2UB，用于检测两个表位的抗体。结果测序结果表明重组质粒构建成功，SDS-PAGE电泳显示融合蛋白表达正确，ELISA检测到高滴度抗体。结论以HBc呈现utrophin的B表位被成功表达和纯化，获得高滴度的与两个B表位结合的抗体，为utrophin检测和DMD治疗药物研究打下了基础。     

核糖体展示小分子抗体的研究进展

核糖体展示技术是由Plückthun实验室[1]在多聚核糖体展示技术[2]的基础上改进而来的一种利用功能性蛋白相互作用进行筛选的新技术,它将正确折叠的蛋白及其mRNA同时结合在核糖体上,形成mRNA-核糖体-蛋白质三聚体,使目的蛋白的基因型和表型联系起来,可用于抗体及蛋白质文库选择、蛋白质体外改造等。运用此技术已成功筛选到一些与靶分子特异结合的高亲和力蛋白质,包括抗体、多肽、酶等,是蛋白质筛选的重要工具。1核糖体展示技术的基本原理及特点核糖体展示技术通过聚合酶链反应(PCR)扩增DNA文库,同时引入T7启动子、核糖体结合位点及茎-…     

高效液相色谱法同时测定复方甲硝唑片中两主药含量

目的　建立复方甲硝唑片中主药甲硝唑和法莫替丁的含量测定方法。方法　采用高效液相色谱法 ,色谱柱 :SpherisorbC1 8(1 50mm× 4 .6mm ,5μm)不锈钢柱 ,流动相 :pH 3 .0 ,0 .0 5mol·L- 1 磷酸盐缓冲液 乙腈 甲醇 (88∶1 0∶2 ) ,检测波长 2 65nm ,内标法定量。结果　在优化的色谱条件下 ,甲硝唑、法莫替丁和内标氢氯噻嗪间均能完全分离 ,片剂辅料不干扰测定 ,甲硝唑、法莫替丁的线性范围分别为 1 0 0～ 50 0 μg·mL- 1 和 5～ 2 5μg·mL- 1 ,回收率分别为 99.79%和 1 0 0 .6 % ,RSD <1 .5 %。结论　该法专属性强 ,操作方便 ,结果准确 ,重复性好     

肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺样毒素2B亚基的表达

目的:克隆肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 AH07株志贺样毒素2B(Stx2B)亚单位基因,应用原核表达系统制备重组蛋白质.方法:根据靶基因序列设计特异性寡核苷酸引物,采用PCR法克隆EHEC AH07株Stx28的编码基因stx2b,靶基因经TA克隆后连接到表达载体pET-28a构建重组质粒,阳性重组子转化表达宿主菌E. coli BL-21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导目的蛋白表达,应用SDS-PAGE和Western-blot (WB)分析重组蛋白生物活性.结果:PCR扩增stx2b基因约220bp,成功构建重组质粒pET28a-stx2b,并在原核细胞中得到高效表达,目的蛋白质的相对分子质量约为7500,约占蛋白质总量的40%;WB显示目的蛋白质可与特异性抗体发生特异性反应.结论:成功克隆EHEC O157:H7 stx2b基因,在原核系统获得目的蛋白质的高效表达,为O157:H7感染机制及疾病诊断和疫苗研究奠定基础.     

抗菌肽抑制肿瘤细胞的实验研究

昆虫与高等动物不同,它具有独特的防御系统,即高效的无细胞免疫系统.昆虫细胞被感染后引起免疫应答反应,产生一系列的抗菌物质,抗菌物质中最重要是抗菌肽.它具有分子量小、热稳定、水溶性好、抗菌谱广等优点.抗菌肽对真核细胞几乎没有杀伤作用,仅仅作用于原核细胞和发生病变的真核细胞.这可能与细胞膜和骨架上的成分差异有关.随着对抗菌肽的深入研究,人们已经发现一些新型抗菌肽不仅作用于某些细菌、真菌和原虫,而且还作用于某些肿瘤细胞.     

流式细胞仪检测人脾LAK细胞

目的：探求ＬＡＫ细胞对白血病疗效的监测手段。方法：用流式细胞仪测定５例成人脾淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）和２１例正常人外周血淋巴细胞的ＤＮＡ指数（ＤＩ）及增殖周期。结果：人脾ＬＡＫ细胞的增殖活力明显高于未激活的脾淋巴细胞和外周血淋巴细胞。培养（１～１４ｄ）期间人脾ＬＡＫ细胞的增殖活力高，并且稳定。在人脾ＬＡＫ细胞中，未找出非整倍体细胞，ＤＩ指数在正常范围。结论：流式细胞仪可用于判断人脾ＬＡＫ细胞对白血病的疗效。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7和霍乱弧菌的多重PCR检测

目的 建立同时检测肠出血性大肠杆菌(O157：H7)和霍乱弧菌的多重PCR方法,为霍乱和肠出血性大肠杆菌感染的快速诊断提供实验依据。方法 首先选择O157：H7的O抗原(rfbE)、H鞭毛抗原(fliC)基因以及霍乱孤菌外膜蛋白(ompW)和肠毒素A亚单位(ctxA)基因特异的4对引物,分别或共同对O157：H7和霍乱孤菌进行PCR扩增,并以琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果 所有O157：H7菌株均在497bp和625bp处出现O157 rfbE基因和H7 fliC基因扩增产物;霍乱菌株均出现560bp、302bp的ompW和ctxA基因扩增产物,O157：H7和霍乱弧菌共同扩增可出现4条单一条带。结论 选择4对特异引物的多重PCR方法可简便、特异、快速、灵敏地对O157：H7和霍乱弧菌进行同时检测。     

人EPO cDNA基因在CHO细胞中的稳定表达

建立稳定表达人红细胞生成素（ＥＰＯ）的工程细胞株。方法：用 ＤＮＡ磷酸钙共转染法,将人ＥＰＯ ｃＤＮＡ的表达质粒 ｐＣＤＢ与标志质粒 ｐＳＶ－ｄｈｆｒ共转染到 ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞中。用 ＥＬＩＳＡ法检测到 ７０个克隆的细胞培养上清,筛选出５０个克隆细胞系。结果：经ＭＴＸ加压扩增,获得４系高效表达ＥＰＯ的细胞系（Ｂ４、Ｃ３、Ｆ１０、Ｇ７）,表达量为 ２． ２～１０ μｇ／（１０６ ｃｅｌｌ· ２４ ｈ）,ＥＰＯ的分泌量在上述细胞系扩增了 １１～３１倍。 Ｆ１０细胞系表达量为最高,并进一步亚克隆纯化。其中Ｆ１０－６亚克隆细胞株的平均表达水平为１０ ｕｇ／（１０６ｃｅｌｌ·２４ ｈ）,细胞冻存后复苏传代１５次,ＥＰＯ的表达水平无明显改变。结论：以Ｆ１０－６亚克隆细胞株建立了工程细胞株。     

成人脾LAK细胞对肿瘤细胞杀伤过程的超微结构观察

本文通过透射电流观察了LAK 细胞与肿瘤细胞在不同的作用时期的超微结构病理过程。结果表明,LAK 细胞与肿瘤细胞混合15分钟后即可发生膜接触,30分钟后与肿瘤细胞紧密接触并融合,融合处肿瘤细胞胞浆发生空泡,4小时后LAK 细胞已进入肿瘤细胞内。作者提出脾LAK 细胞杀伤瘤细胞的病理过程。     

长效卫生杀虫喷涂剂对蚊蝇及蟑螂灭效观察

长效卫生杀虫喷涂剂,经现场25ml/m~2使用150天蚊虫平均相关密度值为0.95,密度下降率在96.4～100％;经强迫接触对蚊虫KT_(50)为6.5～24.3分钟,家蝇KT_(50)为13.3～22.9分钟,德国小蠊KT_(50)为27.3～63.4分钟。通过本次试验表明长效卫生杀虫喷涂剂对蚊蝇及蟑螂既有速效,也有持效,使用方便、安全,价格低廉采用该喷涂剂可以省时、省工和省钱。经现场试用受到用户欢迎,值得大力推广应用。