狂犬病毒糖蛋白和核蛋白在不同表达系统中的表达

狂犬病波及范围广，所致疾病症状严重，病死率极高，无有效治疗手段，其控制主要依赖于疫苗的接种。狂犬病毒的糖蛋白和核蛋白是有效的保护性抗原成分，常被用来制备亚单位疫苗。糖蛋白和核蛋白在大肠杆菌、酵母、痘病毒、腺病毒、杆状病毒和中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中均进行表达，大肠杆菌中表达出的蛋白无免疫保护作用，酵母、痘病毒、腺病毒和杆状病毒系统中表达出的蛋白在实验室和野外对动物均有一定的免疫保护作用。     

分化抗原5C5在人免疫细胞的表达

目的　明确 5C5蛋白为分化抗原 ,检测其在人免疫细胞的表达 ,以及它的信号传导作用。方法　用 5C5蛋白免疫小鼠 ,制备抗 5C5蛋白的单抗。用反义技术制备 5C5蛋白表达抑制的 3D5细胞。用免疫荧光染色和Western印迹确定 5C5单抗的特异性。用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定其分化抗原的性质。用双色免疫荧光染色流式细胞术检测 5C5分化抗原在多种人免疫细胞的表达。用Fura 3 AM试剂作探针 ,用激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2 + 浓度的变化。结果　制备了抗 5C5蛋白的特异性单抗。用 5C5单抗作探针 ,从 3D5细胞膜免疫沉淀到 1条相对分子质量 (Mr)为 19× 10 3的蛋白带 ,并在活 3D5细胞见阳性免疫荧光染色。 5C5分化抗原在人周围血CD19+ 、CD14 + 、CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率分别为 (33.4 7± 7.9) %、(86 .13± 6 .7) %、(15 .79± 7.1) %、(18.11±12 .77) %和 (11.76± 7.4 7) % ,在人免疫细胞株的表达率分别为 5 8.0 % (Nalm6 )、72 .7% (3D5 )、5 3.6 %(BJAB)、6 1.0 % (Daudi)、6 .9% (SKW6 )、6 .3% (Jurkat)、5 .8% (Peer)、2 1.3% (K5 6 2 )和 39.1% (U937)。3D5细胞在 5C5单抗刺激下 ,胞内Ca2 + 浓度逐渐增高 ,可达 2倍左右 ,对照小鼠Ig则无此作用。结论5C5蛋白为一个分化抗原 ,在人周     

人成纤维细胞在裸鼠体内生长和胶原分泌的观察

目的观察人成纤维细胞注射移植后是否在裸鼠体内增殖并分泌胶原。方法将经原代培养的2×1010L-1人成纤维细胞1mL注射于BALB/CNU裸鼠真皮内,于1、2和3个月处死取材,行HE和Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组化染色。结果在1、2和3个月时可以观察到人成纤维细胞在裸鼠体内呈分裂象,随着时间的推移细胞外基质Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌量呈增多趋势。结论人成纤维细胞注射移植裸鼠后,能够自行分裂、增殖并分泌人Ⅰ、Ⅲ型胶原,为自体成纤维细胞作为移植材料,发挥充填功能的持久性提供了理论依据。     

早老素1基因在转染CHO细胞中的表达及其与γ-分泌酶的关系

目的 研究早老素1(PS1)在淀粉样前体蛋白(APP)加工生成β-淀粉样多肽(Ap)过程中的作用及其与γ-分泌酶的关系。方法构建APP和PSI双基因稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株,应用免疫沉淀和印迹、脉冲追踪及ELISA方法,检测PS1的表达和代谢半衰期,分析对Aβ分泌的影响及与γ-分泌酶功能的关系。结果PS1转染的CHO细胞(APP-PSI)表达的主要是相对分子质量为45000的全长PS1蛋白,其半衰期短于1h,而其活性片段的N-末端片段和C-末端片段则相对稳定,半衰期接近16h。突变型PS1(M146L)转染细胞分泌的Ap总量与野生型PS1转染细胞没有明显差别,但分泌的Aβ亚型Ap142是未转染PS1或野生型PS1转染细胞分泌的将近2倍。结论 PS1参与了APP加工生成Aβ的过程,突变型PS1(M16L)导致Aβ142的分泌增加,提示PS1可能就是预期的γ-分泌酶。     

HLA-DRB1及HLA-DQA1单倍型与乙型肝炎病毒感染结局的关联研究

目的探讨中国北方汉族人群HLA-DRB1、DQA1单倍型与乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染不同结局的关系。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（sequence specific primers polymerase chain reaction，PCR-SSP）技术检测HLA-DRB1、DQA1等位基因，并比较207例慢性乙型肝炎患者，212名无症状HBV慢性携带者（HBV携带者），148例自限性HBV感染者的单倍型频率。结果自限性HBV感染组单倍型DRB1＊04-DQA1＊0301的频率为10．03％，显著高于慢性乙肝组的3．66％（P=0．0005）：DRB1＊15／＊16-DQA1＊0102的频率为6．80％，显著高于慢性乙肝组的1．94％（P=0．0012）和无症状HBV慢性携带者组的1．65％（P=0．004）；DRB1＊04-DQA1＊0302单倍型在慢性乙型肝炎组的频率为3．10％，明显高于自限性HBV感染组的0．39％（P=0．0077）。结论HLA-DRB1、DQA1单倍型与个体感染HBV后的不同结局存在显著关联。     

抗β1-肾上腺素受体自身抗体对在体大鼠心肌细胞的致凋亡作用

目的：观察抗β1-肾上腺素受体（β1-AR）自身抗体对在体大鼠心肌细胞的致凋亡作用,并探讨其可能的信号转导通路,以阐明该抗体参与心衰发生发展的病理机制。方法：用β1-AR细胞外第二环合成肽段免疫抗β1-AR自身抗体阴性大鼠（9周）,定期检测大鼠的血清抗β1-AR自身抗体滴度、心功能、心肌组织凋亡现象和caspase-3,8,9活性。结果：（1）免疫组大鼠的血清抗β1-AR自身抗体滴度逐渐升高并维持于高水平[1∶（1280±0.07）];对照组始终在1∶10左右;（2）TUNEL和琼脂糖凝胶电泳显示免疫组大鼠在免疫3、4、5周心肌组织发生明显凋亡,caspase-3,8活性增高,免疫7、9周心功能明显下降,对照组未见异常。结论：抗β1-AR自身抗体可能通过激活死亡受体途径促进在体大鼠的心肌细胞发生凋亡,最终引起心功能下降。     

CD54和LFA-1的相互作用在6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的JurkatT细胞的黏附性增强中的作用

目的研究CD54和LFA-1的相互作用在6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS)的黏附性增强中的作用。方法用细胞凝集试验确证AS细胞间黏附的增强，用细胞与细胞间黏附分子-1-人IgG的Fc片段(ICAM-1-Fc)的黏附试验和阻断性抗CD11a抗体的阻断试验研究CD54-LFA-1的作用，用单克隆抗体MEM-148检测As细胞LFA-1亲和力的变化，用单克隆抗体NKI-L16检测AS细胞LFA-1亲合力的变化，用鬼笔环肽染色细胞骨架，用Jurkat-Raji细胞间的作用作模型研究6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对T和B细胞间黏附的影响，用ConA结合试验检测细胞中蛋白质N-糖基化的变化。结果(1)AS细胞间的黏附性增强主要与CD54及CD11a表达的增强相关，也与LFA-1亲和力的增高相关；(2)AS细胞的细胞骨架发生重排；(3)As细胞与Raji细胞间的黏附也增强；(4)ConA与AS细胞的结合增强。结论CD54和LFA-1的相互作用在AS Jurkat T细胞的黏附性增强中起重要作用。细胞骨架重排也可能起作用。As细胞的蛋白质发生了N-糖基化修饰。     

三个新的PAH基因短串联重复序列多态性及其在苯丙酮尿症产前诊断中的应用

目的提高经典型苯丙酮尿症的产前诊断的成功率。方法在苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PAH）基因附近选择了3个新的短串联重复序列（short tandem repeat，STR）位点（PAH26、PAH32和PAH9），进行扩增长度片段多态性分析，确定它们在中国人群的分布及在诊断中的应用价值。结果3个新的STR位点的多态信息含量分别为0．518（PAH26）、0．413（PAH32）和0．362（PAH9）。这3个位点之间，PAH9与第3内含子中的STR位点（TCTA）n之间存在连锁不平衡，其他位点组合不存在连锁不平衡。联合第3内含子中的STR位点（TCTA）n和2个新的位点，可以对家系中突变基因标记进行95％N断，并成功地用于4例产前诊断中。结论选择性地应用PAH基因中的3个STR位点组合，可以95％地区分经典型苯丙酮尿症家系中父母的两个基因，从而准确地进行快速产前诊断。     

髓鞘素的提取与鉴定

通过口服抗原诱导免疫耐受治疗自身免疫性疾病,是一种应用前景非常广阔的治疗方法。目前研究较多的是口服髓鞘素（myelin)、髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP)、髓鞘碱性蛋白的多肽片段等,用以防治实验性变态反应性脑脊髓炎（experimental allergic encephalovomyelitis,EAE),进而治疗多发性硬化（multiple sclerosis,MS)。本文介绍一种简便实用的方法,用以提取粗制的髓鞘抗原,以便用于实验和临床口服免疫耐受的研究。