硫化氢通过上调神经调节蛋白1/ErbB2抑制阿霉素诱导的大鼠心肌纤维化

目的观察硫化氢(H_2S)对阿霉素诱导的大鼠心肌纤维化及神经调节蛋白(NRG)1和ErbB2(又名HER2,NEU,CD340)蛋白表达的影响。方法取SD雄性大鼠随机分为4组:对照组,模型组,H_2S模型组,H_2S对照组。经腹腔注射阿霉素建立心肌损伤大鼠模型,对照组和H_2S对照组经腹腔注射同等剂量的生理盐水;建模后,H_2S模型组和H_2S对照组每日经腹腔注射硫氢化钠溶液;Masson染色观察心肌纤维化及计算心肌胶原容积分数(CVF);Western印迹检测NRG1和ErbB2蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组心肌细胞紊乱,心肌纤维沉积明显增多、CVF显著增高(P0.05),心肌NRG1和ErbB2蛋白的表达明显下降(P0.05);而与模型组相比,H_2S模型组心肌组织纤维沉积明显减少、CVF显著下降(P0.05),NRG1和ErbB2蛋白的表达显著上调(P0.05)。结论 H_2S可以改善阿霉素导致的心肌纤维化,其发生机制可能与通过NRG1/ErbB2通路上调NRG1和ErbB2蛋白表达有关。     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌组织中MT1-MMP和TIMP-2蛋白表达及心肌纤维化的影响及其机制

目的:观察气体信号分子硫化氢(H₂S) 对糖尿病(DM)大鼠心肌纤维化和膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和基质金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)蛋白表达的影响,探讨其在心肌纤维化发生发展中的作用和相关机制。方法:52只SD大鼠随机分为对照组(Control组)、糖尿病模型组(DM组)、硫化氢干预糖尿病组(DM+H₂S组)和硫化氢干预正常组(H₂S组),每组13只。以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立DM大鼠模型,模型构建成功后对照组(n=12)和DM组(n=9)大鼠每天腹腔注射生理盐水;DM+H₂S组(n=9)和H₂S组(n=10)大鼠每天腹腔注射100 μmol·kg^-1硫氢化钠溶液,8周后处死大鼠取左心室心肌组织,VG染色观察大鼠心肌组织形态学;Western blotting法检测大鼠心肌组织中Ⅲ型胶原、MT1-MMP和TIMP-2蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,DM组大鼠心肌细胞排列紊乱,胶原沉积增多,心肌存在明显心肌纤维化,心肌组织中Ⅲ型胶原蛋白、MT1-MMP和TIMP-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与DM组比较,DM+H₂S组大鼠心肌纤维化有所改善,心肌组织中Ⅲ型胶原蛋白、MT1-MMP和TIMP-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:H₂S可改善DM大鼠的心肌纤维化并下调Ⅲ型胶原蛋白的表达,其机制可能与其下调MT1-MMP蛋白表达以及改善MT1-MMP/TIMP-2蛋白失衡有关。     

硫化氢通过调控转化生长因子-β及基质金属蛋白酶-9/基质金属蛋白酶抑制剂-1改善糖尿病大鼠肾小管间质纤维化

目的探讨硫化氢(H_2S)气体信号分子对糖尿病大鼠肾小管间质纤维化及转化生长因子(TGF)-β、基质金属蛋白酶(MMP)-9/基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1表达的影响。方法单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型将成年雄性SD大鼠64只随机分为正常对照组(Control组)、STZ组、STZ+H_2S组、H_2S组。造模72 h后采尾静脉血检测,若血糖>16.7 mmol/L表明造模成功。H_2S组和STZ+H_2S组大鼠腹腔注射Na HS溶液100μmol·kg~(-1)·d~(-1),Control组和STZ组腹腔注射同等量生理盐水。8 w后取标本,Masson染色观察大鼠肾脏组织病理形态学改变,Western印迹检测大鼠肾脏TGF-β、MMP-9、TIMP-1、Ⅳ型胶原蛋白的表达水平。结果与Control组相比,STZ组存在明显肾小管间质纤维化,同时肾脏组织中Ⅳ型胶原、TGF-β、TIMP-1蛋白的表达升高,MMP-9蛋白的表达水平下降(P<0.05);与STZ组大鼠相比,STZ+H_2S组肾小管间质纤维化减轻,肾组织TGF-β、TIMP-1、Ⅳ型胶原蛋白的表达降低,MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 H_2S可改善糖尿病大鼠肾小管间质纤维化,其机制可能与调控MMP-9/TIMP-1失衡以及TGF-β蛋白的表达水平有关。     

脂蛋白磷脂酶A2和髓过氧化物酶与超敏C反应蛋白及全球急性冠状动脉事件注册评分的相关性

目的 探讨不同类型冠心病患者外周血脂蛋白磷脂酶A2和髓过氧化物酶水平的变化,及与超敏C反应蛋白和全球急性冠状动脉事件注册评分的相关性.方法 选择行冠状动脉造影术的住院患者150例,其中无症状心肌缺血(SMI)组28例,稳定型心绞痛(SAP)组59例,急性冠脉综合征(ACS)组63例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定血清脂蛋白磷脂酶A2、髓过氧化物酶水平,乳胶免疫比浊法测定超敏C反应蛋白水平,并计算患者全球急性冠状动脉事件注册评分,分析脂蛋白磷脂酶A2和髓过氧化物酶与超敏C反应蛋白、全球急性冠状动脉事件注册评分危险分层的关系.结果 急性冠脉综合征组外周血血清脂蛋白磷脂酶A2、髓过氧化物酶和超敏C反应蛋白均高于稳定型心绞痛组和无症状心肌缺血组,差异有统计学意义(P<0.05);稳定型心绞痛组外周血血清脂蛋白磷脂酶A2、髓过氧化物酶和超敏C反应蛋白水平与无症状心肌缺血组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);血清脂蛋白磷脂酶A2与髓过氧化物酶、超敏C反应蛋白均呈正相关(r=0.793,P<0.05;r=0.769,P<0.05),髓过氧化物酶水平与超敏C反应蛋白也呈正相关(r=0.743,P<0.05);而血清脂蛋白磷脂酶A2、髓过氧化物酶和超敏C反应蛋白水平与患者全球急性冠状动脉事件注册评分均无相关性.结论 联合检测血清脂蛋白磷脂酶A2、髓过氧化物酶和超敏C反应蛋白水平或联合全球急性冠状动脉事件注册评分可能有助于进一步有效评估冠心病危险分层,对冠心病的及时干预和治疗可能有重要意义.     

反相高效液相色谱法测定生地茶止咳合剂中岩白菜素的含量

目的 建立测定生地茶止咳合剂中岩白菜素含量的反相高效液相色谱法.方法 采用Phenomenex C18-ODS(250 mmm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相:甲醇-水(23∶77),流速:1.0 mL·min-1,检测波长:275 nm,柱温:30℃.结果 岩白菜素在0.040 8～0.408 μg线性关系良好,(r=0.999 9);平均回收率为98.5％(n=9).结论 该方法操作简便、快速,适用于生地茶止咳合剂中岩白菜素的含量测定.     

厄贝沙坦对心力衰竭大鼠心肌电生理失稳态和心室肌细胞ICa-L电流的影响

目的 探讨厄贝沙坦对心力衰竭大鼠心室电生理失稳态和L-型钙通道电流的影响. 方法 采用腹主动脉缩窄法建立大鼠心力衰竭模型,随机分两组,即心力衰竭治疗组与心力衰竭对照组,分别用厄贝沙坦(20mg/kg)和安慰剂治疗,另设假手术对照组.在术后32周用测定3组大鼠电生理指标以及心功能,以急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞并以标准全细胞膜片钳技术记录钙通道电流. 结果 与假手术对照组相比,心力衰竭治疗组与心力衰竭对照组大鼠的左室舒张末压、心率和动脉血压均明显增加,而心力衰竭对照组大鼠校正QT间期和VERP明显延长,QT离散度增加,心力衰竭治疗组与心力衰竭对照组相比左心室VERP明显缩短,且心力衰竭对照组的细胞膜电容大于假手术对照组(P＜0.05),亦明显大于心力衰竭治疗组(P＜0.05),心力衰竭对照组L-型钙通道电流峰值(- 926.28±334.26 pF)及电流密度(- 12.61±4.55 pA/pF)稍少于假手术对照组(- 921.87±468.56 pF和- 13.83±7.04 pA/pF),但差异无显著性(P＞0.05),但心力衰竭治疗组L-型钙通道电流峰值(-423.47±100.80 pF)及电流密度(-7.02±1.66 pA/pF)明显低于心力衰竭对照组和假手术对照组(P＜0.05).3组L-型钙通道电流的激活、失活和复活动力学特征差异均无显著性(P＞0.05). 结论 厄贝沙坦能明显改善心力衰竭大鼠电生理失稳态变化,并可能与其下调L-型钙通道电流有关.     

DR5上调在5，7-二甲氧基黄酮增敏TRAIL诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的 研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-DMF)是否能增强人肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)介导细胞凋亡的敏感性及其作用机制.方法 体外培养人肝癌Hep 3B细胞.MTT法测定细胞毒性;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;免疫酶联吸附法测定caspase-3和caspase-8的活性.Western blot 分析DR4和DR5表达.结果 5,7-DMF能增强Hep 3B细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性和诱导DR5表达.5,7-DMF与TRAIL合用诱导Hep 3B细胞凋亡依赖于caspase-3和caspase-8活化.DR5特异拮抗性嵌合抗体减弱5,7-DMF增强TRAIL诱导Hep 3B细胞凋亡作用.结论 5,7-DMF通过上调DR5增强TRAIL诱导人肝癌细胞凋亡.     

芹菜素激活c-Src/NADPH氧化酶/ROS通路诱导HO-1

目的 观察芹菜素对脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞分泌细胞因子的影响,并探讨其分子机制。 方法 体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,用不同浓度的芹菜素处理后,加入LPS刺激0～16 h。Western blot检测血红素氧合酶-1（HO-1）的表达以及c-Src和NADPH氧化酶p47^phox亚基的磷酸化;荧光探针H₂DCFDA检测活性氧（ROS）的产生;ELISA检测TNF-α和IL-6的产生。 结果 芹菜素作用RAW 264.7细胞30 min即可诱导c-Src和NADPH氧化酶亚基p47^phox磷酸化。采用50 μmol/L c-Src抑制剂PP1预处理细胞后,p47^phox磷酸化水平明显降低。同时,芹菜素能上调RAW264.7细胞内ROS的含量,而NADPH氧化酶抑制剂DPI可抑制其产生。芹菜素也能诱导RAW264.7细胞表达HO-1,而采用PP1、DPI或ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理细胞后,HO-1表达水平明显降低。此外,芹菜素处理能下调LPS诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6,而采用siRNA沉默HO-1表达后,能在一定程度上降低芹菜素对细胞因子的抑制效应。 结论 芹菜素可能通过激活c-Src/NADPH氧化酶/ROS通路诱导HO-1表达,从而抑制小鼠巨噬细胞过度分泌细胞因子。     

缬沙坦抑制血管紧张素Ⅱ刺激下心肌细胞缝隙连接蛋白43表达的上调

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激心肌细胞肥大后,缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的变化及缬沙坦的干预作用。方法分离培养大鼠心肌细胞,分为对照组,AngⅡ组(AngⅡ1.0×10~6mol/L)和缬沙坦组(AngⅡ1.0×10~6mol/L+缬沙坦1.0×10~6mol/L)。另外将缬沙坦以1.0×10~5、1.0×10~6和1.0×10~7mol/L刺激分为A组、B组和C组。先用AngⅡ诱导心肌肥大24 h后,采用免疫荧光法和免疫印迹蛋白法观察心肌细胞Cx43蛋白表达以及缬沙坦的干预作用。结果与对照组比较,AngⅡ组心肌细胞明显肥大,蛋白质含量明显增加,Cx43蛋白表达明显上调;与AngⅡ组比较,缬沙坦组拮抗AngⅡ刺激下Cx43蛋白的上调,并呈明显浓度依赖性下降。与A组比较,B、C组Cx43蛋白表达下降(P<0.05)。结论 AngⅡ刺激心肌细胞24 h后,通过AngⅡ1型受体信号通路,导致Cx43蛋白表达浓度依赖性上调,缬沙坦明显抑制其上调,Cx43上调可能与心肌肥大过程有关。     

厄贝沙坦对心力衰竭大鼠心室电生理重构及瞬时外向钾电流的影响

目的探讨厄贝沙坦对心力衰竭大鼠心室肌细胞电生理重构及瞬时外向钾电流(Ito)的影响。方法采用腹主动脉缩窄法建立心力衰竭大鼠模型,将制模成功的21只大鼠随机分为心力衰竭治疗组(治疗组,10只)、心力衰竭对照组(对照组,11只)和另选10只大鼠为假手术组。术后16周测定3组大鼠心率、QRS时间、QT间期、校正QT间期、心室有效不应期以及心功能。采用酶解法获得单个大鼠心室肌细胞并以标准全细胞膜片钳技术记录Ito。结果与假手术组比较,对照组和治疗组大鼠血压、左心室舒张末压明显升高,对照组大鼠校正QT间期、心室有效不应期明显延长,心室肌细胞Ito密度明显减少;治疗组大鼠心室肌细胞Ito密度较对照组明显增加,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。与对照组比较,治疗组大鼠心室有效不应期明显缩短(P0.05)。结论厄贝沙坦治疗能明显改善慢性心力衰竭大鼠电生理失稳态变化,可能与其增加心室肌细胞膜Ito有关。