DHPLC在检测Miyoshi肌病家系致病基因突变中的应用

目的检测Miyoshi肌病家系成员的DYSF基因突变，探讨变性高效液相色谱分析法（DHPLc）在基因研究中的效能。方法用RT-PCR技术扩增DYSF基因的编码序列，利用变性高效液相色谱分析技术（DHPLC）对PCR产物进行突变筛选，出现异常峰型的片段进行核苷酸序列测定，明确突变位点。结果患者DYSF基因存在6429delG突变。结论DHPLC能有效地用于基因突变的检测，该方法快速高效，可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。     

DHPLC在检测Miyoshi肌病家系致病基因突变中的应用

目的检测Miyoshi肌病家系成员的DYSF基因突变,探讨变性高效液相色谱分析法(DHPLC)在基因研究中的效能。方法用RT-PCR技术扩增DYSF基因的编码序列,利用变性高效液相色谱分析技术(DHPLC)对PCR产物进行突变筛选,出现异常峰型的片段进行核苷酸序列测定,明确突变位点。结果患者DYSF基因存在6429delG突变。结论DHPLC能有效地用于基因突变的检测,该方法快速高效,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。     

矽肺患者血清和肺灌洗液中新喋呤水平的分析

目的：检测矽肺患者血清和肺灌洗液中新喋呤水平，探讨其在矽肺病情评估中的意义。方法：采用酶联免疫吸附法，对21例Ⅰ期、18例Ⅱ期、13例Ⅲ期矽肺患者和40例健康人的血清新喋呤水平进行检测；并进一步检测了Ⅰ期和Ⅱ期患者肺灌洗液中的新喋呤含量。结果：Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期矽肺患者血清新喋呤水平（分别为11．11±1．17nmol／L、11．3±1．07nmol／L和12．91±1．28nmol／L）均显著高于对照组（5．19±0．83）nmol／L；Ⅲ期矽肺患者血清新喋呤水平高于Ⅰ期和Ⅱ期；Ⅱ期矽肺患者肺灌洗液中新喋呤水平为（30．50±4．21）nmol／L，显著高于Ⅰ期（21．98±2．65）nmol／L；差异均具有统计学意义（P〈0．01）。结论：新喋呤可能作为一项新的生化指标用于矽肺病损程度的判断。     

平均红细胞体积和红细胞体积分布宽度临床意义的分析

目的 :建立一种有效实用的方法 ,对难治性贫血 (RA)和慢性再生障碍性贫血 (CAA)进行早期鉴别诊断。方法 :采用回顾性分析的方法 ,运用 Hemacell Plus全自动血细胞计数分析仪检测 2 3例 RA组和 2 2例 CAA组以及 40例正常对照组的血常规 (血RT) 18项 ,并对其中的平均红细胞体积 (MCV)、红细胞体积分布宽度 (RDW)两项指标进行均数比较及配对 t检验。结果 :RA组MCV为 (113.80± 7.16 ) f L、RDW为 (2 3.15± 6 .41) % ,均显著高于正常对照组 [(89.0 9± 2 .13) f L,P<0 .0 0 1、(12 .6 9± 1.34 ) % ,P<0 .0 0 1];而 CAA组的 MCV为 (93.17± 6 .2 3) f L ,RDW(x± s)为 (17.97± 2 .13) % ,虽高于正常人 ,但前者差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,而后者差异有显著性 (P<0 .0 0 1)。结论 :MCV和 RDW的检测简便、快捷、准确 ,可作为 RA和 CAA的早期鉴别诊断的定量指标 ,并为临床治疗、观察疗效提供参考依据     

98株产超广谱β—内酰胺酶菌对15种抗生素的耐药性分析

自产超广谱β-内酰胺酶 ( ESBL s)菌出现以来 ,给临床的抗感染治疗带来了很大的困难。如何快速准确地为临床提供产ESBL s菌株的依据 ,指导临床合理选择抗生素 ,监控各种耐药菌 ,已经越来越引起临床的关注。本文回顾性分析 5种革兰阴性杆菌产 ESBL s菌及其耐药情况。现将结果报告如下。1　材料和方法菌株来源　 5 79株菌均于 1999年 4月至 2 0 0 0年 4月分离自我院病区及门诊病人送检的各种临床标本 ,菌株鉴定按文献[1 ] 介绍的方法 ,其中大肠埃希菌 2 4 1株 ,肺炎克雷伯菌 10 3株 ,铜绿假单胞菌 119株 ,不动杆菌 68株 ,阴沟肠杆菌 2 8…     

小儿急性淋巴细胞性白血病微小残留病免疫治疗的初步研究

目的：研究利用体外培养的激活脐血造血干细胞（activated cord blood stem cell,ACBSC）,对急性淋巴细胞性白血病（ALL）患儿微小残留病（MRD）进行免疫治疗的疗效。方法：无菌枸橼酸（ACD）抗凝脐血收集,经Percoll单个核细胞分离与植物血凝素（PHA）培养,采用桥联免疫组化（APAAP）方法进行PHA激活前后CD3、CD4、CD8抗原测定;应用双抗体夹心ELISA法进行肿瘤坏死因子（TNF－α）检测;利用PCR方法对克隆性重排的T细胞受体（TCR）基因进行测定,检查外周血中ALL MRD。结果：①脐血单个核细胞以一定浓度PHA（20mg/L) 培养激活后,其中表达CD3、CD4、CD8抗原的淋巴细胞数增高。②未经PHA激活的单个核细胞TNF－α分泌呈一过性,72h后检测＜10pg/ml;经PHA激活48h,分泌维持在一个较高水平,达600pg/ml。③6例ALL患儿输注前骨髓和外周血中MRD测定全部阳性,4例经多次输注,半年后MRD检测为阴性,骨髓中MRD明显减少,其余2例骨髓和外周血中MRD检测均为阴性。结论：ACBSC能够分泌抗肿瘤细胞因子及可能具有细胞毒T淋巴细胞（CTL）样作用;可望通过利用脐血免疫治疗方法,对小儿ALL的MRD进行彻底清除;利用ACBSC移植,可能是治疗小儿ALL MRD安全有效的免疫治疗方法。     

星形胶质细胞瘤中端粒酶活性的检测

目的:探讨原发与复发星形胶质细胞瘤中端粒酶活性情况。方法:采用ＴＲＡＰ银染法。结果:Ⅲ级及其以上恶性星形胶质细胞瘤中端粒酶活性明显高于Ⅱ级及以下胶质瘤(１/１７,５．９%)(Ｐ＜０．０５);２年内复发的胶质瘤总的阳性率(８/１１,７２．７%)明显高于原发胶质瘤的阳性率(８/２９,２７．６%)(Ｘ２＝５．０２,Ｐ＜０．０５),原发、复发胶质瘤的差别主要分布在Ⅰ－Ⅱ级星形胶质细胞瘤中。结论:端粒酶可能是促进星形胶质细胞瘤复发及恶化的主要因素之一。     

日本血吸虫单克隆独特型抗体的筛选及初步鉴定

目的 从本实验室已建立的IgG类抗日本血吸虫抗原不同表位的单抗中筛选抗独特型抗体NP30的独特型抗体（id,Ab1)。方法 应用间接DLISA经典法,NP30作为抗原包板。加IgG各亚类杂交瘤细胞培养上清孵育,用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗鼠IgG捕捉。结果 单抗NP56与NP30呈阳性反应,NP56的Ig同型为IgG2b。免疫组织化学显示NP56与虫卵内毛蚴头腺及毛蚴膜呈阳性反应。结论 NP56是NP30的特异性id,可用于NP30模拟抗原的鉴定。     

肺癌细胞株APC基因启动子甲基化对其转录的影响

背景与目的:抑癌基因家族性腺瘤样结肠息肉病易感基因(adenomatous polyposis coli,APC)启动子区的高甲基化在很多肿瘤中被发现,与这些肿瘤的发生发展相关.本实验室在肺癌患者肿瘤组织中检测到APC甲基化率达47%,为了研究其在肺癌细胞株中的甲基化情况,并进一步了解甲基化对其转录的影响,本研究检测了3株肺癌细胞的抑癌基因APC启动子甲基化状态及其对该基因转录水平的影响.方法:提取3株肺癌细胞株(肺腺癌细胞株SPC-A1、小细胞肺癌细胞株NCI-H446、大细胞肺癌细胞株NCI-H460)的DNA,以经转甲基处理和未做处理的脐带血DNA为阳性、阴性对照,亚硫酸氢盐化学修饰后,用甲基化特异性基因扩增(methylation specific-polymerase chain reaction,MSP)和甲基化基因芯片对APC基因启动子1A CpG岛甲基化进行研究,并用实时荧光定量PCR(real time-polymerase chain reaction)技术,以Sybr-GreenⅠ为荧光染料,β-actin基因为内参照,检测mRNA转录;对甲基化阳性的NCI-H460细胞,分别用1、5、10、15 μmol/L的5'-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC)试剂进行脱甲基化,提取RNA,荧光定量检测其转录变化.结果:SPC-A1和NCI-H446细胞APC甲基化阴性,NCI-H460细胞APC甲基化阳性;甲基化芯片检测NCI-H460细胞在APC启动子1A 5个CpG位点均存在甲基化(687、707、714、719、726),SPC-A1和NCI-H446甲基化阴性,荧光定量结果NCI-H460的APC转录较SPC-A1和NCI-H446有明显的下降,仅为二者平均的30.04%;经5-aza-dC脱甲基化作用后,NCI-H460细胞的APC表达增加了约5～10倍,其中10 μmol/L浓度作用下,APC表达增加最多.结论:肺癌细胞株NCI-H460中存在APC基因高甲基化,5-aza-dC脱甲基化试剂可以激活其转录.     

食管癌患者循环DNA的定量分析及其临床应用价值

目的探讨食管癌患者循环DNA的来源、临床应用价值及可能的影响因素。方法收集53例食管癌患者术前和术后2h的静脉血,用SYBRgreenⅠ荧光染色法和检测CEA-mRNA表达的实时荧光定量RT-PCR法,分别检测血浆中的DNA水平和循环中的肿瘤细胞数。结果食管癌组术前循环DNA水平为(67.46±59.78)μg/L,显著高于良性肿瘤组(23.52±22.94)μg/L和健康组(11.97±12.35)μg/L,均P<0.001,ROC曲线下的面积为0.798。术后DNA水平迅速上升,达(122.36±71.41)μg/L,显著高于手术前(P<0.001)。CEAmRNA 循环肿瘤细胞数在术后也显著高于手术前,其中位数水平分别为1513(95%CI,660~7974)/ml全血和188(95%CI,155~498)/ml全血,P<0.01。血浆DNA水平与循环肿瘤细胞数之间,无论在术前还是术后均无显著性关联(r=0.200,P=0.156和r=0.206,P=0.138),与临床病理分期也无相关性(r<0.030,P>0.05)。结论食管癌患者循环DNA水平增高,可为疾病诊断提供一定的辅助信息,但没有足够的敏感性和特异性成为诊断或监测癌症的独立标志物。